一株芽孢杆菌的分离鉴定及在生物絮团对虾养殖中的应用

从对虾养殖池中分离到1株细菌(编号2013042402,简称菌株02),分别用16S rDNA序列比对法和细菌全细胞脂肪酸气相色谱法对该菌进行鉴定.结果显示,菌株02为芽孢杆菌(Bacillus sp.).为探讨该芽孢杆菌在生物絮团对虾养殖中的使用效果,实验分别设置加菌加糖组(菌株02的量为2.0× 104 CFU/ml,蔗糖量为饵料的70％)、加菌组、加糖组(生物絮团组)及空白对照组,研究了菌株02对养殖水质(温度、盐度、溶氧、pH、氨氮及亚硝酸氮)、对虾存活率及水体中主要菌群组成等指标的影响.结果显示,加菌加糖组能显著降低养殖水体中的氨氮和亚硝酸氮浓度,提高对虾存活率.生物絮团对虾养殖系统中添加菌株02,能够改善菌群结构,抑制弧菌生长.研究结果可为生物絮团对虾养殖中定向培养有益微生物提供技术支持.     

凡纳滨对虾RAS与WSSV-VP26的相互作用

白斑综合征病毒(WSSV)是对虾养殖中主要的病原之一,病原与宿主作用是介导病毒感染的重要过程。RAS蛋白是Ras基因分泌的保守蛋白,为小G蛋白家族的一员,普遍存在于从酵母菌到哺乳动物的真核细胞中,具有偶联受体和效应系统传递跨膜信号的功能,在细胞增殖和分化中起双重调节的作用,但关于RAS与WSSV的作用尚不明确。本研究将凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) Ras基因克隆至pBAD/gⅢA表达载体上,以E. coli Top10为宿主菌,在L-阿拉伯糖的诱导下获得RAS重组蛋白。以Co~(2+)亲和层析方法,获得纯化的RAS蛋白,质谱分析显示,该蛋白为凡纳滨对虾RAS。采用Far-western和ELISA检测方法分析RAS与WSSV结构蛋白VP26、VP28N和VP37的相互作用。Far-western结果显示,RAS与VP26有明显的结合作用,ELISA实验结果显示,RAS与VP26蛋白的相互作用随RAS量的增加而增强。本研究表明,RAS参与WSSV侵染过程,为进一步研究WSSV侵染机制提供了理论基础。     

阿拉伯婆婆纳种子萌发特性及萌发期耐盐性研究

以野生蓝色花卉阿拉伯婆婆纳种子为试验材料,对其萌发特性及萌发期耐盐性进行研究。结果表明:阿拉伯婆婆纳新鲜种子存在休眠,赤霉素处理能有效打破休眠,浓度为50 mg·L~(-1)处理效果最好;种子萌发对温度要求不高, 15～35℃范围内发芽率均在90%以上,最适合萌发温度为25～30℃,变温不利于种子萌发;种子在土壤表层和覆土0.5 cm时萌发情况较好,覆土3 cm时种子不出苗,种子萌发受黑暗抑制; 25～50 mmol·L~(-1) NaCl胁迫能促进阿拉伯婆婆纳种子萌发和幼根生长,种子能较好地耐受低盐胁迫。     

凡纳滨对虾微粒体谷胱甘肽硫转移酶3基因克隆及其功能分析

[目的]明确凡纳滨对虾微粒体谷胱甘肽硫转移酶3(LvMGST3)在机体抗逆境胁迫与抵御病原体侵染过程中的功能作用,为有效提高对虾的抗胁迫能力和抗病力提供理论依据.[方法]采用RACE克隆LvMGST3基因cDNA序列,以EditSeq、ExPASy、SignalP 5.0、TMHMM 2.0、Clustal X和MEGA 6.0等在线软件进行生物信息学分析,再应用半定量PCR进行组织表达量分析.凡纳滨对虾分别进行氨氮胁迫(20.00 mg/L)及脂多糖(LPS,8μg/g)刺激后,采用实时荧光定量PCR检测分析LvMGST3基因的表达响应情况.[结果]LvMGST3基因cDNA序列全长826 bp,包含85 bp的5'端非编码区(5'-UTR)、321 bp的3'端非编码区(3'-UTR)和420 bp的开放阅读框(ORF),在ploy(A)尾前端15个核苷酸处存在加尾信号AATAAA.LvMGST3基因编码139个氨基酸残基,包含MGST3亚家族共有的保守结构域FNCX1QRX2H,此序列为FNCYQRAH.LvMGST3蛋白分子量为15.53 kD,理论等电点(pI)为9.38,具有3个跨膜结构域,但不存在信号肽.LvMGST3氨基酸序列与软甲纲普通卷甲虫(Armadillidium vulgare)的MGST3氨基酸序列(RXG56258.1)相似性最高,为71.22%;基于MGST3氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,LvMGST3与节肢动物门和软体动物门的MGST3亲缘关系较近.LvMGST3基因在凡纳滨对虾肝胰腺、鳃组织和眼柄中的基础表达量较高;经氨氮胁迫后,肝胰腺中的LvMGST3基因相对表达量分别在胁迫6和24 h时极显著上调(P<0.01,下同),鳃组织中的LvMGST3基因相对表达量在胁迫12 h时显著上调(P<0.05,下同)、胁迫48 h时极显著上调;肝胰腺中的LvMGST3基因在LPS刺激前期表达受抑制,至刺激12 h时极显著上调,鳃组织中的LvMGST3基因分别在LPS刺激3和48 h时出现2个表达峰值,其相对表达量均极显著高于对照组,分别是对照组的4.39和6.45倍.[结论]LvMGST3基因具有典型的MGST3亚家族结构特征,主要在凡纳滨对虾的肝胰腺、鳃组织和眼柄中表达,且氨氮胁迫和LPS刺激可明显诱导凡纳滨对虾肝胰腺和鳃组织中LvMGST3基因的表达水平,即MGST3在对虾抗逆境胁迫及抵御病原菌感染的调控机制中发挥重要作用.     

桑叶黄酮对凡纳滨对虾肠道黏膜形态和肠道菌群的影响

本试验旨在研究桑叶黄酮对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肠道黏膜形态和肠道菌群的影响。选用初始体重为(1.32±0.01)g的凡纳滨对虾800尾,随机分为5组(每组4个重复,每个重复40尾),分别饲喂在基础饲料中添加0、50、100、150和300 mg/kg桑叶黄酮的试验饲料。饲养周期为50 d。结果显示:1)饲料中添加桑叶黄酮可促进凡纳滨对虾肠道肠绒毛发育,增加肌层厚度,添加100 mg/kg桑叶黄酮组绒毛高度最高且显著高于其他组(P<0.05),添加50 mg/kg桑叶黄酮组肌层厚度最高且显著高于其他组(P<0.05)。2)饲料中添加桑叶黄酮可增加凡纳滨对虾肠道菌群多样性,添加50 mg/kg桑叶黄酮组Shannon指数显著高于未添加组(P<0.05),Simpson指数显著低于未添加组(P<0.05)。3)与未添加组相比,添加100和150 mg/kg桑叶黄酮组弧菌属(Vibrio)与添加50、100和150 mg/kg桑叶黄酮组希瓦氏菌属(Shewanella)的相对丰度显著增加(P<0.05),各桑叶黄酮添加组红球菌属(Rhodococcus)与添加100、150和300 mg/kg桑叶黄酮组乳球菌属(Lactococcus)的相对丰度显著降低(P<0.05)。由此得出,饲料中添加50 mg/kg桑叶黄酮可促进凡纳滨对虾肠道发育,增加肠道菌群多样性。     

添加中草药与草分枝杆菌对凡纳滨对虾育苗效果的影响

为探究添加不同浓度中草药(芪参散)与草分枝杆菌对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)育苗、虾苗标粗与养殖效果的影响,在室内养殖桶内采用相同方法开展2次育苗试验,并跟踪2次育苗试验虾苗低盐耐受性、标粗与养殖的表现。结果显示,凡纳滨对虾苗生长性状上的差异具统计学意义,D组(2.0%芪参散)和G组(1.0%草分枝杆菌)的育苗效果最佳。虾苗低盐耐受性的表现差异具统计学意义,C组(添加1.0%芪参散)、D组、F组(0.5%草分枝杆菌)和G组的虾苗存活率相比其余组差异显著,此外该4组虾苗标粗成活率、养殖生长速度、养殖成活率及成功率都优于其他组虾苗。在育苗过程中添加一定比例的中草药(芪参散)与草分枝杆菌可提高凡纳滨对虾的育苗效果,对培育高健康优质虾苗、提升标粗与养成效果具有重要意义。     

水质监测中氨氮测定的影响因素分析

指出了氨氮是水质常规监测中重要的一项检测项目。对纳氏试剂分光光度法测定水中氨氮的关键影响因素,如无氨水和试剂的配制、监测过程中实验反应的显色温度、反应时间以及水样中pH值、盐度及光波等因素进行了分析,以确保氨氮实验结果的准确性和科学性。     

氟雷拉纳与4种杀虫剂对斜纹夜蛾的室内毒力及其联合作用

为明确氟雷拉纳对斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius的毒力及其与毒死蜱、茚虫威、溴氰菊酯、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（简称：甲维盐）复配后的联合作用,筛选出最佳配比,从而为其混剂研发提供科学依据。笔者采用室内人工饲料混毒法,测定了氟雷拉纳与毒死蜱、茚虫威、溴氰菊酯、甲维盐单剂及其混剂对斜纹夜蛾三龄幼虫的毒力,并通过共毒系数法评价复配药剂的联合作用。单剂结果表明：氟雷拉纳、溴氰菊酯和甲维盐对斜纹夜蛾具有高毒力,药后48 h的LC₅₀值分别为0.48、0.65、0.38 mg/kg;毒死蜱和茚虫威对斜纹夜蛾的毒力中等,药后的LC₅₀值分别为8.71、3.08 mg/kg。混配结果表明：氟雷拉纳与毒死蜱混配具有良好的增效作用,且配比为3:2时,共毒系数最高为164.2;与茚虫威混配时,具有相加作用;而与溴氰菊酯或甲维盐混配时,却均表现为拮抗作用。总之,本研究为氟雷拉纳的增效混剂研发提供了科学依据;而因其与溴氰菊酯或甲维盐混配存在拮抗作用,应避免用于混剂研发。     

饲料蛋白质水平与加工工艺对凡纳滨对虾生长性能、体组成及体色的影响

为探讨饲料蛋白质水平与加工工艺（膨化饲料和颗粒饲料）对凡纳滨对虾生长性能、体营养组成以及体色的影响，本试验以鱼粉为主要蛋白源，分别制备蛋白质水平为41%、43%和46%的3种膨化饲料和3种颗粒饲料，进行为期60 d的养殖试验。结果表明：在试验第30天后，无论是饲喂颗粒饲料还是膨化饲料，饲料43%和46%蛋白质处理组对虾的增重率均显著高于41%蛋白质处理组（P < 0.05）。在第60天时，在41%和43%蛋白质水平下，膨化饲料组对虾的增重率均显著高于颗粒饲料组（P < 0.05）。无论是在膨化饲料还是颗粒饲料的条件下，饲喂46%蛋白质对虾的肥满度均显著高于41%蛋白质处理组（P < 0.05）。无论是饲喂颗粒饲料还是膨化饲料，43%和46%饲料蛋白质处理组对虾的体粗蛋白质含量和体表a*值均显著高于41%蛋白质处理组（P < 0.05）|同时，在41%和43%饲料蛋白质处理条件下，膨化饲料组对虾的体粗蛋白质含量显著高于颗粒饲料组（P < 0.05）|在不同蛋白质水平下，颗粒饲料处理组对虾体表a*值显著高于膨化饲料处理组（P < 0.05）|当饲喂颗粒饲料时，43%和46%饲料蛋白质处理组的L*值显著高于41%蛋白质处理组（P < 0.05）。综上所述，本试验条件下，相比于饲料中41%的蛋白质水平， 43%和46%的蛋白质可促进凡纳滨对虾幼体的生长，增加体蛋白质含量，改善对虾体表的色泽。同时，在蛋白质水平为41%和43%时，膨化饲料可促进对虾生长和体蛋白的沉积，其效果优于颗粒饲料，但其对对虾体表色泽的提升效果欠佳。 [关键词] 蛋白质|加工工艺|凡纳滨对虾|生长|体组成|体色