EHEC O157:H7 stx基因缺失突变株的构建及其特性

针对肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7的stx基因，通过PCR扩增出缺失了183bp的s灯基因片段，将其克隆到自杀性戢体pCVD442中，然后通过接合性转导将重组自杀性质粒pCVD442：：△stx从大肠杆菌SMIO转到O157：H7中，利用抗性标记和PCR方法筛选出O157：H7 stx基因缺失突变菌株。Vero细胞毒性试验证实，该突变株不能产生完整的Stx。动物试验表明，与强毒株相比该突变株的致病性明显降低。该突变株的构建为研究志贺毒素在EHEC O157感染中所起的作用和研制O157的基因工程减毒活菌苗奠定了基础。     

大肠杆菌不耐热肠毒素对狂犬病病毒减毒疫苗株粘膜免疫效应的增强作用

将狂犬病病毒 SRV9减毒疫苗与大肠杆菌不耐热肠毒素 (L T)混合 ,分别经口腔滴入、灌胃、灌肠等途径免疫小鼠。通过检测外周血淋巴细胞特异性转化率、CTL反应、Ig G、Ig A、SIg A等免疫指标 ,并结合攻毒保护 ,探讨了狂犬病病毒经消化道不同途径接种产生的免疫效果以及 L T在粘膜免疫中的作用。结果表明 :肠道接种组的狂犬病病毒特异性免疫应答水平高于口腔和胃接种组的免疫应答水平 ,L T可增强狂犬病病毒减毒疫苗诱导的免疫应答反应     

10%农抗120防治苹果褐斑病药效试验

苹果褐斑病是造成苹果树早期落叶的主要病害之一,在我国各苹果产区都有程度不同的危害。近几年,陕西渭北苹果主产区多使用代森锰锌、甲基托布津、大生M-45、喷克等农药进行防治。为减少化学药剂防治带来的病原菌产生抗性、果品农药残留和环境污染及防治成本高等问题,应对近期欧盟EUREP-GAP认证果园禁用多抗霉素等农药的规定,提高果品安全水平,2005年笔者选用新型生物制剂———10%农抗120可湿性粉剂进行了苹果褐斑病田间防治试验,取得了较好的效果。1材料和方法1.1试验园概况试验设在陕西渭北苹果主产区旬邑县湫坡头镇甘家店村、白水县…     

肠出血性大肠杆菌O157：H7噬菌体的分离纯化

分离纯化了抑制肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E coli,EHEC）0157：H7的噬菌体,并对其进行效价测定。将宿主菌EHEC0157：H7培养制成悬液后与污水样品37℃共培养16h,将培养物离心、过滤除菌后得到该菌的噬菌体原液。噬菌体原液采用双层琼脂平板法进行5次纯化,得到直径相同的噬菌斑。纯化后噬菌体的效价达到12×10^pfu。电镜观察表明,该噬菌体呈蝌蚪状。根据ICTV对病毒的分类标准,该噬菌体属长尾噬菌体科,为烈性噬菌体。     

抗菌肽重组逆转录病毒载体的构建、重组病毒的包装及其在牛奶中的稳定表达

将含有双抗菌肽基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLN-bcp-LK(R)中,获得了含有双抗菌肽基因的重组逆转录病毒载体pLN-bcp-LfcinB-CE-MA(R),利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到了阳性细胞克隆,克隆扩大培养后,用病毒上清感染NIH3T3细胞进行滴度测定,最高滴度为1×104CFU/mL,用病毒上清转染妊娠中后期奶牛乳腺组织,产犊后采集的奶样经琼脂板溶圈法和Tricine-SDS-PAGE检测,结果表明乳汁中表达的抗菌肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有明显地抑菌活性,并能实现相对稳定的表达,表达可持续30~45 d。     

应用生豆浆检测鲜奶、奶粉中掺杂尿素

1 方法取待检奶2 mL(奶粉2 g,加10 mL馏水溶解),加生豆浆0.5mL,混匀,滴加0.1％酚红酒精溶液2滴。如有尿素存在,即显粉红色,正常奶(奶粉)呈黄色。该法简便,快速,1～2 min即可出结果。2 原理生豆浆中含有大量的脲酶。脲酶可分解尿素使近中性的鲜奶、奶粉液呈碱性,滴加酚红指示剂(pH 6.8黄～PH 8.4红),即可判定。     

猪链球菌2型分选酶srtC5基因敲除突变菌株的构建及其特性分析

构建猪链球菌2型（Streptococcus suis serotypc 2）强毒株ZY458分选酶srtC5基因敲除突变体并分析其特性。首先通过重叠延伸PCR技术扩增AsrtC5片段,该片段携带srtC5编码基因及其上下游部分序列,但是中间缺失212bp序列。随后构建重组自杀载体pSET4s：：△srtC5,并将其电转化导入ZY458菌株,通过同源重组获得△srtC5突变体。通过体外的细胞黏附试验和体内的家兔攻毒试验证明△srtC5突变体比较野毒株,其细胞黏附能力和对家兔的致病性都显著降低。     

果树枝条掩埋发酵最佳模式研究

【目的】为了减少果树枝条肥料化过程中枝条的捡拾、搬运、粉碎、堆肥、施肥环节的劳动力消耗,降低枝条肥料化成本,探索农村劳动力缺乏大背景下省时、省力的枝条肥料化技术。【方法】采用开沟机在苹果园作业行内开宽30～35 cm、深35～40 cm的深沟,将果树枝条、落叶、枯草填入沟内,添加微生物菌剂、尿素、土壤调理剂后覆土回填技术(回填深度8～10 cm),研究枝条掩埋发酵模式对枝条腐解率、果树腐烂病、轮纹病发病率、果园CO_2浓度、土壤温度、水分含量的影响。【结果】(1)枝条掩埋发酵枝条腐解率随时间推移呈由小变大再变小的趋势,按75 kg/hm~2自带营养的微生物菌剂、50 kg/hm~2尿素及20 kg/hm~2土壤调理剂的比例(处理2),周年腐解率最高、为40.1%。(2)处理组果树腐烂病、轮纹病的发病率低于对照,以处理2果树腐烂病、轮纹病的发病率最低,分别为0和15.2%。(3)处理组近气层CO_2浓度显著高于对照,以处理2近气层CO_2的浓度最高、为550μmol/mol。(4)各处理寒冷时土壤温度高于地表温度,炎热时土壤温度低于地表温度,以处理2较为显著;处理组土壤的水分含量高于对照组。【结论】微生物菌剂、尿素、土壤调理剂处理可加速果树枝条腐解,增加近气层CO_2的浓度;枝条掩埋发酵技术能降低苹果腐烂病、轮纹病的发病率;果树枝条掩埋发酵具有缓和土壤温度、蓄水保墒的作用。处理2为最佳果树枝条掩埋发酵方式。     

套袋与苹果果实中Pb、Cd、Cr含量关系的研究

测定了洛川、白水试验园中的套袋及不套袋苹果果皮、果肉中的Pb、Cd、Cr含量,对其分布及其机理进行了研究.结果发现:①所采样品均达到国家无公害苹果标准.Pb的背景值高于Cd、Cr.②套袋与Pb、Cd、Cr含量之间呈明显的相关性,即不套袋苹果、套单层育果袋苹果的Pb、Cd、Cr含量分别高于套袋苹果及套双层育果袋苹果.③育果袋的透气性越大,苹果中Pb、Cd、Cr的含量越高.④重金属主要集中在果皮中.由此可见,苹果套袋是降低苹果重金属含量的有效措施.     

磷酸盐对土壤胶体和矿物表面吸附酸性磷酸酶的影响

研究了系列浓度磷酸盐体系中 ,酸性磷酸酶在黄棕壤、砖红壤胶体和高岭石、针铁矿及δ MnO2 表面的吸附特点。结果表明 :随着磷酸盐浓度升高 ,磷酸酶在土壤胶体和矿物上的等温吸附曲线类型逐渐由L型向C型转化 ,等温吸附方程由Langmuir方程向线性方程转化 ,这种转化可能与磷酸和酶在胶体矿物表面对不同点位的利用及其能量特点有关。随着体系中磷酸盐浓度的增加 ,酶吸附量呈现先急剧下降后逐渐稳定的趋势。磷酸盐对土壤胶体和矿物上酶吸附的影响决定于矿物表面的类型特别是羟基的数量、体系中磷酸盐浓度及酶的加入量。针铁矿及含铁铝氧化物较多的砖红壤胶体对酶的吸附受磷酸盐的抑制作用最为显著。