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通过PCR方法,从肠出血性大肠杆菌O157:H7的基因组DNA中扩增出Stx1A基因序列,并将之与编码LHRH的基因序列连接起来,构建编码Stx1A-LHRH的重组融合基因片段,并定向克隆到表达质粒pET28a的NcoⅠ和EcoRⅠ位点之间,构建重组表达质粒pET28a::stx1A-LHRH,将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中。对重组菌株用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明重组菌株表达出了23700的目的融合蛋白Stx1A-LHRH,目的蛋白为包涵体表达,经薄层扫描分析表明表达量约占菌体总蛋白的37.6%。为了将来更好的进行目的蛋白的功能研究,本研究再将融合基因片段克隆到表达质粒pMAL-p2x中实现了重组蛋白的可溶性表达,表达的重组蛋白经amylose亲和层析柱一步纯化后纯度可达93.4%,为下一步进行重组蛋白的活性分析及其生物学作用研究奠定了基础。 相似文献
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为了研究重构融合蛋白Eae-Stx1/2B免疫特性及对出血性大肠杆菌感染的免疫保护作用,进行了细胞粘附抑制试验和免疫保护试验。结果证明Eae-Stx1/2B融合蛋白免疫血清在体外能降低出血性大肠杆菌对HEp-2细胞的粘附作用,这一特性在出血性大肠杆菌疫苗设计中具有重要价值。以纯化的融合蛋白Eae-Stx1/2B为抗原对小鼠进行腹腔注射免疫和滴鼻免疫,ELISA检测结果显示,2次免疫后7 d,免疫组抗Eae-Stx1/2B融合蛋白和抗出血性大肠杆菌O157血清IgG抗体显著高于未免疫组;用出血性大肠杆菌O157强毒株EDL933攻击免疫小鼠,免疫组小鼠排菌时间显著缩短,免疫组小鼠存活率均高于未免疫组,免疫组小鼠体质量恢复增长较快。上述试验结果表明,Eae-Stx1/2B融合蛋白对出血性大肠杆菌感染有保护作用。 相似文献
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苹果套袋栽培技术始于日本,已有上百年历史。20世纪90年代初期,新加坡果商俞大中先生首先在我国烟台龙口对红星和红富士套双层专用纸袋,生产出高档无公害苹果,打入东南亚市场,为我国套袋出口苹果起了示范和导向作用[1]。“十五”期间我国将苹果套袋栽培技术纳入果园日常管理[2]。本文采用田间试验与实验室测定相结合的方法,对苹果套袋的正、负面效应进行分析,提出了改进套袋苹果质量的具体措施。1材料与方法1.1套袋效益2004年对陕西省洛川县6个乡镇,每个乡镇选3种类型苹果园进行调查。3种类型果园分别是:管理水平好,树势健壮;管理水平一般,… 相似文献
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“无公害”农药是人们一种习惯叫法,我国目前对“无公害”农药还没有一个明确的概念。农药要达到“无公害”,必须同时具备两大条件:一是有效成分对防治对象高效,对人畜、环境、天敌及作物无害或基本无害,对农产品不造成残留污染;二是农药的助剂无污染,剂型 相似文献