悬浮培养MDCK细胞制备的H9亚型禽流感灭活疫苗免疫剂量试验

为研究由悬浮培养的MDCK细胞制备的H9亚型AIV抗原所制备的灭活疫苗的免疫剂量,在生物反应器中悬浮培养MDCK细胞,接种H9亚型禽流感病毒WD98和HN04种毒,收获抗原液,以2种抗原液分别制备2个毒株的单价油佐剂灭活疫苗。每种疫苗均按照0.3、0.2、0.1、0.05mL/只(107.5 EID50/只~105.52 EID50/只)的剂量接种21日龄SPF鸡,免疫接种后3周采血测定AIV的HI抗体,采血后分别用与制苗株同源的H9亚型AIV种毒静脉注射攻毒,测定疫苗保护率。2种疫苗不同剂量免疫接种后21d的AIV HI抗体水平达到3.8log2~5.6log2,对照组鸡AIV HI抗体均为0log2。攻毒试验证实,以105.52 EID50/只~107.5 EID50/只剂量进行免疫接种,免疫鸡只获得了80%以上的保护。按照兽药典H9亚型禽流感疫苗攻毒保护率90%为合格的标准,悬浮培养MDCK细胞制备的H9亚型禽流感疫苗的最小免疫接种剂量为106.82 EID50/只。     

牛布鲁菌侵染对HPT-8细胞p38基因转录水平的影响

探讨布鲁菌侵染人胚胎滋养层细胞(HPT-8)过程中对p38基因转录的影响。用牛布鲁菌2308和RB51株分别侵染HPT-8细胞,在不同侵染时间点(0、4、8、12、48h)收集细胞,提取总RNA,反转录获得cDNA;构建p38α、p38β和内参基因GAPDH的克隆质粒,并绘制3种基因扩增的标准曲线;RT-qPCR检测p38α和p38β基因的转录表达。结果显示,获得了HPT-8细胞侵染前后的cDNA,构建了pMD18-T-p38α/p38β/GAPDH克隆质粒,绘制了标准曲线。RT-qPCR结果显示,布鲁菌2308和RB51侵染滋养层细胞后(4、8、12、48h),p38α和p38β的相对表达量比0h均明显下降,差异极显著(P0.01),布鲁菌RB51株和2308株也存在一定差异。结果表明,在布鲁菌侵染HPT-8细胞的过程中,p38 MAPK信号通路被下调,提示p38 MAPK信号通路参与了对细胞生物学效应的调控,且这种调控作用与菌株的毒力强弱存在密切联系。     

稳定表达山羊SLAM受体的BHK-21细胞系的建立及应用

信号淋巴激活分子(SLAM)又称为CD150,是小反刍兽疫病毒(PPRV)和犬瘟热病毒(CDV)等麻疹病毒属病毒感染淋巴细胞的主要受体,在病毒侵入细胞中发挥重要作用。为建立稳定表达山羊SLAM(g SLAM)的真核细胞系,本研究将人工合成的g SLAM基因克隆至真核表达质粒p IRESpuro3中,并在该基因的3'端引入Flag标签序列作为分子标记,构建了重组质粒p IRES3-g SLAM。将该重组质粒转染BHK-21细胞,经嘌呤霉素加压筛选及采用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组PPRV病毒(r PPRV/GFP)感染鉴定后,筛选到稳定表达g SLAM基因的细胞系。r PPRV/GFP感染和western blot鉴定表明,无论是否有嘌呤霉素压力的存在,该细胞系在传代至第20代,仍能稳定表达g SLAM蛋白。由于g SLAM氨基酸序列与犬的同源性较高,以表达GFP重组CDV强毒株(r CDV/GFP)感染该细胞系,病毒可以感染且能形成明显的细胞病变,表明该细胞系可用于CDV强毒分离和致弱机制等相关研究。     

新疆天康将推出三款猪用疫苗

<正>猪圆环病毒2型重组杆状病毒亚单位灭活疫苗由新疆天康畜牧生物技术股份有限公司技术中心研制的猪圆环病毒2型重组杆状病毒亚单位灭活疫苗,是应用分子生物学技术将猪圆环病毒2型Cap基因重组于杆状病毒内,在昆虫细胞上培养表达PCV2-r Cap蛋白而制成的亚单位疫苗。该疫苗与市场使用的猪圆环病毒2型全病毒灭活疫苗相比,具有极其显著的特点:(1)以当前的优势基因型毒株PCV2b基因序列做参考,经杆状病毒系统表达出类似病毒样颗粒(VLPs)的蛋白,抗原的     

禽流感新型工艺疫苗——细胞源灭活疫苗闪亮登场

<正>由吉林冠界生物技术有限公司、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所和哈尔滨维科生物技术开发公司三家联合研制的禽流重组感病毒H5亚型二价灭活疫苗(细胞源)日前通过农业部新兽药评审。该疫苗采用MDCK细胞传代培养增殖禽流重组感病毒H5亚型制备疫苗,与目前使用的鸡胚工艺相比,该疫苗具有生产过程可控、批次均一、制品安全有效等特点。此外,该疫苗采用的全悬浮细胞培养工艺具有工艺简单快捷,成本低,培养条件易控,不易被污染;无血清或者低血清培养,不仅降低动物     

应用蚕豆根尖细胞微核技术对污水遗传毒性的研究

为了研究应用蚕豆根尖细胞微核技术对污水遗传毒性的监测,试验以石河子某化工厂污水为检测对象和试验材料,于2013年10月份进行水体采集和理化检测,将水体分为6个浓度,以自来水处理为阴性对照组,利用蚕豆根尖进行7组不同的细胞微核试验。结果表明:水体理化检测结果显示,水质有一定的污染;微核试验结果显示,7组间有差异。说明蚕豆根尖细胞微核试验对水质检测是非常有效且简单易行的方法,值得推广。     

蛙皮抗菌肽的提取及抗肿瘤活性检测

<正>抗菌肽是一类防御性生物活性物质,广泛存在于细菌、植物、昆虫及动物中,具有抗菌、抗病毒及抗原虫作用。此外,抗菌肽还具有较强的抗肿瘤活性。抗菌肽的抗肿瘤机制特殊,可以选择性地作用于肿瘤细胞,通过破坏细胞膜、细胞骨架、细胞器等达到杀伤肿瘤细胞的目的,具有对动物正常细胞毒性较低,作用迅速,不易产生耐药性的特点[1]。基于以上特点,寻     

母牛黄体期的生理特点

<正>母牛排卵后,膜细胞和颗粒细胞间的基膜裂解,继而无血管的颗粒细胞层被含有膜细胞和血管的结缔组织所代替,颗粒细胞和膜细胞分化形成黄体细胞,产生孕酮、雌激素、催产素和松弛素,即为黄体期。血管进一步分支,从而为成熟黄体的代谢供给足够的血量。组成黄体的细胞中,内皮细胞占一半以上,且在黄体溶解过程中发挥关键的作用。对母牛而言,使卵泡黄体化的激素主要是促黄体素(LH)。正常条件下,黄体在LH存在下维持     

树突状细胞甘露糖受体在旋毛虫感染中的变化研究

应用流式细胞术(FCM)检测旋毛虫感染后小鼠肠系膜淋巴结(MLN)中树突状细胞(DC)上甘露糖受体(MR)的影响。培养小鼠骨髓源树突状细胞(BMDC)并负载旋毛虫排泄/分泌抗原(ES抗原),FCM检测BMDC上MR的变化情况。结果显示,感染第7天MLN中DC表面MR出现下调,但在14 d后出现上调,差异显著(P0.05)。体外实验发现,BMDC负载ES抗原后MR出现下调,直到第48小时出现上调,差异显著(P0.05)。本研究证明旋毛虫感染后可以引起树突状细胞上MR的变化,表明MR可能是ES抗原的识别受体。这为研制旋毛虫树突状细胞疫苗提供了支持,并对寄生虫免疫逃避机制的研究提供了思路。     

7株牛源A型巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

对2014年沈阳地区患有呼吸系统疾病的育肥牛场进行病原分离,得到7株分离菌,对其进行培养形态及染色观察、病理组织切片观察、动物致病性观察及16S序列分析,初步鉴定为牛多杀性巴氏杆菌(Pm)。利用Pm种特异性引物及荚膜血清特异性引物进行PCR扩增,均得到目的基因条带。对分离菌进行药敏试验的结果显示,5株分离菌株已对阿米卡星、新诺明产生较强耐药性;7株分离菌均对氟苯尼考、恩诺沙星、四环素及氨苄西林敏感。由此确定,分离菌株均为牛荚膜A型巴氏杆菌,且已具有一定耐药性。