鸡β-防御素-3的克隆与诱导表达

利用反转录PCR（RT—PCR）与套式PCR技术检测Gal-3基因在鸡体不同组织的分布表达。实验结果表明Gal-3基因在法氏囊、皮肤、舌头、肺脏、骨髓、气管等组织中广泛分布，在肾脏、脾脏、肝脏、胰脏等组织中没有检测到。对从鸡骨髓中扩增出来的β-防御素（Gal-3）cDNA进行克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为297bp，与GenBank中的Gal-3cDNA序列完全相同。核苷酸序列比较表明在同源性上，Gal-3与Gal-1、Gal-2基因核苷酸相似性分别为75％、50％，同火鸡GPV-1基因同源性最高，达9l％。体外诱导表达实验表明在气管上皮细胞中LPS与灭活卡介苗可以诱导Gal-3的表达；Gal-3在法氏囊细胞、肺上皮细胞的表达为持续性表达。     

鸭源H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定

从广东各地鸭群的392份泄殖腔样本中分离到3株病毒。用琼脂扩散试验(AGP)及血凝抑制试验(HI)证实3个分离株均为H9亚型禽流感病毒(AIV)。3个AIV分离株都能凝集人、鸡、山羊、豚鼠、兔的红细胞,但不能凝集猪红细胞;所有分离株血凝素(HA)对热不稳定;60℃加热处理10 m in后,病毒失去对鸡胚的感染性;3个AIV分离株的半数鸡胚感染剂量(E ID50)分别为107.2/0.2 mL、105.8/0.2 mL和106.1/0.2 mL。     

传染性囊病抗原-抗体复合苗免疫雏鸡的效果

用ＩＢＤＶ抗体与某ＩＢＤ商品疫苗民ＩＢＤＶ－Ａｂ复合苗,用ＩＢＤＶ－Ａｂ复活 合苗与ＩＢＤ商品疫苗在有母源抗体的雏鸡中进行免疫对比试验,试验鸡随机分为４组,饲养在隔离器中,第１组为空白对照组,第２组为攻毒对照组,第３组在１０ｄ龄用复合苗进行免疫第４组在１０ｄ龄用商品苗进行免疫、各组从１１ｄ龄起每隔１０ｄ采血,用酶联免疫吸附试验检测血清中ＩＢＤ抗体水平,３５ｄ龄时进行攻毒试验,试验结果显示,２１ｄ龄     

胡须鸡β-防御素Gal-1-Gal-13基因克隆、序列分析及其在组织中分布

用设计的特异性引物,采用RT-PCR技术扩增到胡须鸡β-防御素基因Gallinacin-1(Gal-1)～Gallinacin-13(Gal-13)共13个基因编码区全长片段.通过克隆、测序获得13个基因的cDNA核苷酸序列,GenBank登陆号为:DQ858311～DQ858323.比较分析胡须鸡13种β-防御素Gal-1(a)～Gal-13,Gal-1基因与GenBank中注册的防御素基因氨基酸序列的同源性.均在96.5%～100%之间.利用Clustax软件对所获得的13种胡须鸡β-防御素基因进行系统发育树分析,结果显示Gal-1、Gal-1(a)、Gal-2、Gal-3、Gal-4、Gal-5、Gal-6、Gal-7、Gal-8、Gal-12和Gal-13在同一大的分支上;Gal-9和Gal-10在同一分支;Gal-11独在一分支上.用RT-PCR方法分析胡须鸡β-防御素Gal-1～Gal-13基因在不同组织中的分布,结果发现:Gal-1、Gal-2、Gal-4、Gal-5、Gal-6、Gal-7和Gal-10的表达分布非常广泛,Gal-3、Gal-8、Gal-9、Gal-11、Gal-12和Gal-13的分布少.     

缩胆囊素抗体对猪生长性能的影响

本研究将CCK33基因四串体片段克隆到原核表达载体pBCX上,成功构建重组表达质粒pBCX-4CCK33。将其转化大肠杆菌BL21中表达,经SDS-PAGE可检测到分子量约为53 kDa的融合蛋白,最高表达量占菌体总蛋白的30.08%,蛋白可溶性分析表明,融合蛋白主要是以可溶性形式表达。Western-blotting证实,可溶表达的融合蛋白与CCK-8阳性血清具有良好的免疫反应性。将纯化的可溶性融合蛋白制成油乳剂疫苗,主动免疫蛋鸡,ELISA检测结果表明,该融合蛋白能在鸡体内引起免疫。用含CCK抗体的蛋黄粉饲喂82天龄肉猪,试验结果表明,在肉猪饲料中添加100g/t含CCK抗体蛋黄粉,试验期间平均日增重和采食量与阴性蛋黄粉组相比,分别提高6.64%和8%,差异显著（P<0.05）。     

鸡β-防御素-3在毕赤酵母中的分泌表达

对鸡β-防御索-3(Gal-3)在毕赤酵母中的分泌表达进行了研究.以重组质粒CaJ-3-T为模板,利用PCR技术扩增出Gal-3基因成熟肽片段,将该片段插入到酵母表达载体pPICZα-C,构建分泌型重组表达载体pPICZα-C-Gal-3,电转入表达宿主菌X-33毕赤酵母,Zeocin抗性筛选重组菌株;挑取阳性菌株经甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE电泳发现在约4.5 kDa位置出现预期条带;对所表达的Gal-3进行抗菌活性检测,发现其具有抗大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等细黹的活性.     

DNA疫苗及其在家禽上的应用前景

介绍了ＤＮＡ疫苗的概念,免疫机制及一般的研究方法,阐述了ＤＮＡ疫苗在控制家禽疫病方面的应用前景。     

鸡γ干扰素基因在毕赤酵母中的分泌表达

为了获得高效分泌表达ChIFNγ的重组毕赤酵母菌株,利用基因工程技术,将435 bp的ChIFNγ成熟肽编码基因亚克隆到巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达载体PPICZαC中,将该重组质粒用BstX Ⅰ线性化并通过电击法转化毕赤酵母X-33菌株,用500 μ/mL抗生素Zeocin筛选高拷贝阳性重组菌.甲醇诱导表达的重组ChIFNγ经SDS-PAGE电泳,可在相对分子质量约2.0×104处检测到目的蛋白带,目的蛋白占酵母表达上清液总蛋白质的35％.微量细胞病变抑制法检测表达产物的生物学活性,检测结果表明,巴斯德毕赤酵母表达的重组ChIFNγ的抗病毒效价为6 400 U/mL.     

肌肉生成抑制因子多克隆抗体的制备与鉴定

运用纯化的肌肉生成抑制因子(myostatin,简称MSTN)蛋白为免疫原制备弗氏佐剂疫苗,主动免疫健壮的雄性青年家兔以制备抗血清,运用饱和硫酸胺沉淀法对所制备的抗血清成功地进行粗提．Western-Blot和ELISA检测结果是;当抗原质量浓度为20μg／mL,抗体稀释800倍时,所测的P／N仍大于2,证明抗体的制备是成功的,抗体效价为1：12800,且特异性较高．抗体稀释400倍时,血清抗体D450nm值为0．624,P／N值为5．552．     

过氧化氢酶同工酶KMnO4染色法的初步研究

将电泳凝胶在H2 O2 溶液中浸泡一段时间。在凝胶上有过氧化氢酶的地方 ,由于H2 O2 被该酶催化生成了H2 O和O2 ,也就无H2 O2 与KMnO4反应 ;而在无过氧化氢酶的地方 ,H2 O2 能在中性条件下与KMnO4反应生成棕色的MnO2 沉淀。利用KMnO4可在凝胶的棕色背景上观察到透明的过氧化氢酶同工酶带