猪胸膜肺炎放线杆菌APXⅡA基因原核表达载体的构建及其表达

经PCR从含有APXⅡA基因片段的重组质粒pT—APXⅡA中扩增出了APXⅡA基因。同时对目的基因和表达质粒pGEX-4T-1进行了双酶切，连接、转化受体菌，经PCR、酶切和序列分析，证明连接向位和阅读框架正确。成功构建了APXⅡA基因的原核表达载体pGEX—APXⅡA。重组质粒转化表达菌在IPTG诱导下，用SDS—PAGE分析表达目的蛋白。结果表明，蛋白质的分子质量为102．5ku。     

豚鼠副猪嗜血杆菌感染动物模型的建立

为建立副猪嗜血杆菌(Hps)的感染动物模型,本试验用Hps血清5型标准菌株(Nagasaki),以2.0×10~9CFU剂量腹腔感染豚鼠,观察豚鼠发病及死亡情况.取死亡豚鼠的主要器官组织,观察其病理和组织病理变化,与猪Classer's病痛变进行比较.并同时对死亡豚鼠进行细茵分离,分离菌经PCR鉴定.实验结果显示:在接种14 h后试验组豚鼠(5/8)出现死亡,死亡豚鼠剖检时出现了与猪Classer's病相似的病变;主要组织器官组织学变化以炎性细胞浸润、纤维蛋白和红细胞渗出等变化;并通过细茵分离培养,在豚鼠大脑、心血、肺、肝、脾和肾主要器官中分离到Hps血清5型茵.实验结果表明豚鼠可以作为Hps的感染动物模型.这一结果为研究其致病机制、诊断和免疫研究奠定基础.     

绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法的建立及应用

利用绵羊肺炎支原体标准株Y98制备抗原,经超声破碎后作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法用于检测绵羊肺炎支原体血清抗体.经方正滴定确定了抗原包被质量浓度为2.5μg.mL-1,血清样品稀释倍数为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1∶40000,抗原抗体最佳结合时间为1 h.试验结果确定的判定标准为:样品D490 nm(P)与标准阴性血清D490 nm(N)之比,即P/N≥3.0为阳性,P/N≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑.试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,并且与间接血凝试验相比较其敏感性高于后者.     

湖北省部分地区猪场副猪嗜血杆菌病的血清学调查

为了明确湖北省部分地区猪场的副猪嗜血杆菌感染率,采用副猪嗜血杆菌间接血凝对湖北3个不同地区猪场的450份血清样品进行了血清学调查,结果平均阳性率为21.7%,其范围为0～58.0%.表明该地区猪场有副猪嗜血杆菌不同程度的感染.     

复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌方法的建立及初步应用

在已经建立的胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件和引物的筛选,成功地建立胸膜肺炎放线杆菌(App)、多杀性巴氏杆菌(PM)复合PCR诊断方法,利用1次PCR反应,即可同时扩增App的342bp和PM的457bp的特异性片段。检测灵敏度分别达9.7pgDNA/1.4×103OCFU和16pgDNA/2.3×103OCFU,用建立的方法检测临床分离的23株可疑菌株,App阳性8株,PM阳性2株,与其它鉴定方法检测结果相符,表明该方法的建立能够对这2种疾病进行临床鉴别诊断。     

青海地区丝状支原体山羊亚种的流行病学调查

为弄清楚丝状支原体山羊亚种在青海省地区的流行状况,笔者利用丝状支原体山羊亚种抗体检测正向间接血凝试剂盒对2007至2009年采自青海各地区的1200份山羊血清进行了检测。结果显示,平均阳性率为16.08%。不同地区山羊血清的阳性率从5%-20.9%不等。从季节上看,冬春季节发病率要高于夏秋季节。结果提示青海地区的丝状支原体山羊亚种的感染率偏高,应该加强对由丝状支原体山羊亚种的防控。     

羊传染病防控措施

冬季天寒地冻,草料缺乏,羊只抵抗力下降,为抵御严寒往往消耗自身能量,不利于保持膘情。圈养的羊只由于保温通风很难两全,为疾病的发生提供了有利条件。而冬季也是冬羔出生的季节,因此对怀孕母羊和冬羔来说,也面临着严峻的考验。此时,做好疾病的防控,不仅提高羊只当季的体况和成活率,对于来年的养羊效益也是很好的保障。本期继续邀请国家肉羊产业技术体系疫病防控功能研究室的专家从传染病、普通病、寄生虫病三个方面,为您解读冬季羊病防控重点,希望能对您的养羊生产有所裨益。至此,羊病系列专题全部完结。     

羊传染性脓疱诊断技术研究进展

羊传染性脓疱皮炎(也称羊口疮)是由羊传染性脓疱病毒(羊口疮病毒)引起的绵羊、山羊的一种急性、接触性传染病,可给羊的生产带来巨大的经济损失,并威胁人类健康。及时准确的诊断是防控羊口疮的重要环节,羊口疮的诊断方法包括临床诊断、病原学诊断、血清学诊断、分子生物学检测技术等,每种技术体系中又包括多个诊断方法。论文对国内外羊口疮诊断技术研究现状进行概述,并展望了今后的相关研究重点和方向。     

山羊支原体山羊肺炎亚种培养基的筛选及生长曲线测定

为筛选出山羊支原体山羊肺炎亚种的适宜培养基,将山羊支原体山羊肺炎亚种分离株M1601分别接种Thiaucourt肉汤、MEM-KM2和TSA 3种不同的培养基,测定其在3种不同培养基中生长滴度、生长速度,并测定了M1601在最适培养基中在不同培养阶段的生长滴度。结果表明,添加2g/L丙酮酸钠和150mL/L马血清的Thiaucourt肉汤培养基最适宜山羊支原体山羊肺炎亚种的生长,生长滴度可达109 CCU/mL,在培养6h后开始进入对数生长期,培养60h后进入稳定期,培养72h时后进入衰亡期。此试验结果为山羊支原体山羊肺炎亚种培养特性研究提供了参考数据。     

目前我国羊病发生特点及流行趋势

我国是养羊大国,根据2009年《中国统计年鉴》资料,2008年底我国羊存栏量为2.8亿只,其中山羊1.5亿只,绵羊1.3亿只;羊肉产量380.3万吨;绵、山羊毛产量