绵羊霉形体病研究现状

绵羊霉形体感染普遍发生于世界各养羊国家和地区,绵羊霉形体病主要包括由无乳霉形体引起的传染性无乳症、由绵羊肺炎霉形体引起的绵羊霉形体肺炎(非典型性肺炎)和由结膜霉形体引起的角膜结膜炎等。尽管这些疾病导致的死亡率低,但能给养羊业生产造成巨大的经济损失。我国绵羊存栏量巨大,对绵羊霉形体病的发生和危害应引起足够重视。本文对绵羊霉形体病有关研究进展和存在问题进行了简要概述。     

牛支原体黏附和侵入宿主细胞的研究进展

牛支原体可引起牛的肺炎、乳房炎和关节炎等一系列重要疾病,给养牛业造成严重的经济损失。黏附和侵入是牛支原体定殖和感染宿主的关键步骤,是毒力的重要组成部分。本文主要描述了牛支原体对不同宿主细胞的黏附和侵入方式,并简单介绍了牛支原体黏附相关蛋白及其作用,以期为今后牛支原体致病及免疫逃避机制的研究提供参考。     

副猪嗜血杆菌分型血清的制备及其在流行病学研究上的应用

用副猪嗜血杆菌1~15血清型参考菌株和2株澳大利亚分离株高免健康家兔制备副猪嗜血杆菌分型血清,建立副猪嗜血杆菌KRG血清学分型方法(基于热稳定抗原免疫扩散试验的血清学分型方法),并用该方法对田间分离的62株副猪嗜血杆菌进行血清型鉴定。结果顺利制备出了副猪嗜血杆菌15个血清型菌株的分型血清,建立了副猪嗜血杆菌KRG分型方法,62株副猪嗜血杆菌分离株中血清5型占22.5%、4型占16.1%、12型占14.5%、不能分型的菌株占16.2%。试验建立的副猪嗜血杆菌KRG分型方法,可为中国副猪嗜血杆菌血清学分型提供技术支持;血清型5、4、12为中国部分地区近2年最流行的血清型,为副猪嗜血杆菌病的防制提供了有效的参考依据。     

动物支原体相关蛋白的免疫原性研究进展

动物支原体可引起肺炎、关节炎、乳腺炎等一系列重要疾病，临床上常表现为慢性、持续性感染，给养殖业造成严重的经济损失。亚单位疫苗具有安全高效、成本低廉等优点，是支原体疫苗研究的重要发展方向。本文主要介绍了重要动物支原体相关蛋白的免疫原性研究进展，以期为今后动物支原体病亚单位疫苗研究提供参考。     

牛支原体黏附宿主细胞间接免疫荧光检测方法的建立

牛支原体可引起牛肺炎、乳腺炎和关节炎等多系统炎症,关于其黏附宿主细胞的机理有待深入研究。本试验以牛支原体08M株和牛肾细胞MDBK为研究对象,抗牛支原体多克隆抗体为一抗,FITC标记的兔抗牛IgG为二抗,通过优化牛支原体黏附滴度、黏附时间及一抗、二抗工作浓度,建立牛支原体黏附宿主细胞的间接免疫荧光检测方法。最终确定牛支原体的最适黏附滴度为1×109 CFU/mL,黏附时间为4h,一抗最适工作浓度为1∶250,二抗最适工作浓度为1∶250。本试验建立的间接免疫荧光方法可用于牛支原体黏附宿主细胞的检测,为牛支原体体外感染的检测及黏附机理的研究提供有效的技术手段。     

绵羊肺炎支原体人工感染SPF鸡胚的研究

为探索SPF鸡胚作为绵羊肺炎支原体实验室感染模型的可行性,本试验用不同浓度绵羊肺炎支原体（10⁸、10⁹、10¹⁰ ccu/mL）经由卵黄囊和尿囊腔两个部位接种7日龄SPF鸡胚,通过统计鸡胚死亡情况和不同鸡胚组织样品中绵羊肺炎支原体检测阳性率（PCR检测和支原体分离鉴定）,确定绵羊肺炎支原体鸡胚感染方式、感染剂量和最佳分离部位,再用3株不同来源的绵羊肺炎支原体分离株感染鸡胚,观察其对鸡胚的致病力。结果表明,绵羊肺炎支原体感染鸡胚最佳接种途径为卵黄囊接种,感染剂量为10⁹ ccu/mL、0.2 mL/只,最佳分离部位为卵黄液。3株支原体均能感染和致死鸡胚,并均能从卵黄液中分离到绵羊肺炎支原体,但对鸡胚的致病性存在一定差异：FL3株致鸡胚死亡率为45%,略高于MoGH3-3株（40%）,二者均高于A3株（25%）,但差异均不显著（P>0.05）;FL3株鸡胚检测阳率为100%,高于MoGH3-3株（85%）及A3株（90%）,但差异也不显著（P>0.05）。本试验初步确定了绵羊肺炎支原体可感染和致死SPF鸡胚,不同分离株对SPF鸡胚致病力有差异,表明SPF鸡胚可作为下一步建立绵羊肺炎支原体实验室感染模型的候选,为绵羊肺炎支原体致病性研究和疫苗研制奠定基础。     

猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立

根据猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)外膜脂蛋白基因序列，设计合成了1对特异性引物。经PCR扩增，APP1～10标准血清型菌株均能扩增出大小为980bp的DNA片段，而大肠埃希氏茵、猪多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪肺炎霉形体和葡萄球菌等的扩增结果均为阴性。该方法检测APP DNA的敏感性可达2pg。表明，此PCR方法特异性好，敏感性高，可用于猪传染性胸膜肺炎的快速诊断。     

丝状霉形体山羊亚种巢式PCR检测方法的建立

根据已发表的丝状霉形体簇各成员核苷酸序列，设计合成了2对引物McF、McR和MmcF、MmcR，建立了可以鉴别丝状霉形体山羊亚种（Mycoplasma mycoides subsp．capri，Mmc）的巢式PCR方法。特异性和敏感性试验结果显示，该方法只能对Mmc扩增出195bp的片段，而对其他病原菌不能扩增出任何条带，它最低能够检测出10Pg的Mmc DNA，说明该方法具有良好的特异性和很高的敏感性。田间试验结果显示，对4株霉形体分离株及其病料均可扩增出Mmc特异性片段，表明，该巢式PCR方法可用于Mmc快速鉴定和流行病学调查。     

牛支原体0580基因C端截短体的原核表达及生物学功能初步分析

旨在初步分析牛支原体(Mycoplasma bovis)PG45菌株0580基因的生物学功能。前期测试发现牛支原体PG45菌株、08M菌株、07801菌株都有溶解鼠红细胞的现象,根据NCBI中对PG45菌株的基因注释,筛选到1个假定与溶血素相关的基因MBOVPG45＿0580。该基因编码的蛋白经预测具有4个跨膜区,全长表达困难,故构建了不含跨膜区的C端截短体原核表达载体Pcold III-0580-C,进行诱导表达以及纯化,并在小鼠中制备0580-C端重组蛋白的多克隆抗体,对0580-C重组蛋白溶红细胞能力、多克隆抗体效价及特异性、是否影响菌株黏附细胞的能力进行了探究。PG45菌株中假定的与溶血素相关的蛋白0580在牛支原体中的相似性高达100%,去除4个跨膜区的重组蛋白0580-C能在大肠杆菌中表达,相对分子质量约为37 ku;鼠红细胞溶血试验发现0580-C重组蛋白没有溶血活性,但黏附及黏附阻断试验发现该蛋白有助于提高牛支原体黏附EBL细胞的效率,0580-C蛋白鼠源多抗能有效阻断牛支原体对EBL细胞的黏附。制备的0580-C蛋白鼠源多克隆抗体效价达2¹¹,且...     

从山羊中检测山羊支原体山羊肺炎亚种

山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumonia,Mccp)最早由MacOwan 和Minette于1976年分离,是引起山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleruopneumonia,CCPP)的病原体.~([1-2]).