海南岛糙海参性腺发育的组织学特征

对中国海南岛糙海参(Holothuria scabra)的性腺发育过程进行了组织学观察。结果表明,海南糙海参的性腺发育可分为恢复期(Ⅰ期)、增长期(Ⅱ期)、成熟期(Ⅲ期)、部分排放期(Ⅳ期)、排空期(Ⅴ期)共5个时期。1)精巢发育特征:Ⅰ期,生殖上皮出现精原细胞和精母细胞,生殖管壁最厚;Ⅱ期,生殖管上皮变薄,褶皱往管腔中延伸;Ⅲ期,成熟精子充满整个生殖管;Ⅳ期,生殖上皮恢复褶皱形态;Ⅴ期,生殖管中剩余少量残留精子。2)卵巢发育特征:Ⅰ期,在生殖上皮附近附着卵原细胞和卵黄发生前期卵母细胞;Ⅱ期,大量卵黄发生时期卵母细胞与卵原细胞及卵黄发生前期卵母细胞共存于生殖管中;Ⅲ期,卵黄发生时期卵母细胞充满生殖管;Ⅳ期,在生殖上皮附近重新出现卵黄发生前卵母细胞,生殖管腔中出现营养性吞噬细胞;Ⅴ期,生殖管腔残留少数卵细胞。     

自制棉酚饵料对小白鼠的抗生育作用

为了探讨棉酚对小白鼠生殖功能的影响,本试验将30只健康小白鼠(雌、雄各半),随机分为3组,每组10只(雌雄各半),对照组饲喂基础饵料,试验1组饲喂添加1.0%的棉酚的基础饵料,试验2组饲喂添加0.5%溴敌隆的基础饵料,试验结束后计算适口性,睾丸、卵巢脏器系数,制作睾丸、卵巢组织学切片,统计合笼后的产仔情况。结果表明,在适口性方面,添加1.0%棉酚的混合饵料比添加0.5%溴敌隆的混合饵料要好;试验1组,小鼠的生精小管的管壁厚度比对照组薄(P0.01),管腔直径大。试验2组小鼠的生精小管管壁管,管腔直径与对照组相比显著变小(P0.05)。配对以后试验1组小鼠的幼仔个数少于对照组。结果表明,棉酚对小鼠精巢有影响,影响生精小管管壁直径,精子数量,并且降低了雌鼠所怀幼仔个数。说明棉酚能起到降低了雄性小鼠的生育能力的作用。     

穿膜肽引导的体外表达转录因子蛋白Sox2进入红鳍东方鲀精巢细胞系

为了探索适用于体外培养的鱼细胞外源基因转入方法, 本研究通过构建红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)转录因子Sox2的重组表达载体pET32a(+)-Sox2-11R-6His, 诱导表达并纯化得到了C末端连接多聚精氨酸(11R)的重组蛋白Sox2-11R-6His, 以其与红鳍东方鲀精巢细胞系细胞共孵育12 h后, 光镜观察结合Western Blot检测发现重组蛋白进入细胞的效率与浓度呈剂量依赖关系且最佳孵育浓度为8 μg/mL, 当重组蛋白质量浓度达到10 μg/mL时, 表现出明显的细胞毒性。对外源蛋白进行免疫荧光标记定位, 发现重组蛋白分布于细胞质, 部分进入到细胞核中。证明了穿膜肽11R可以有效运载转录因子重组蛋白至红鳍东方鲀的细胞系细胞中。本研究旨在将广泛应用于哺乳动物的细胞基因递送载体穿膜肽应用于鱼类细胞系细胞。

     

中华绒螯蟹精巢特异表达蛋白DMRT-like:抗体制备及免疫鉴定

Dmrt是性别调控因子Doublesex和Mab-3的相关基因,近年报道了中华绒螯蟹EsDmrt-like只在精巢中表达,为了验证EsDMRT-like蛋白是否在中华绒螯蟹精巢中特异表达及其功能,根据中华绒螯蟹EsDmrt-like基因序列,构建重组质粒pET-32a-EsDmrt-like,转化大肠杆菌BL21,经融合表达和SDS-PAGE分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为46ku.利用Ni柱亲和纯化融合蛋白免疫家兔,制备获得EsDMRT-like多克隆抗体.Western-blotting检测表明该抗体既能特异地识别重组蛋白,又能特异识别精巢中EsDMRT-like蛋白,并且该抗体仅在精巢中检测到EsDMRT-like蛋白的表达,分子量约为52 ku,为预期单体分子量的二倍.Western-blotting检测变性后精巢总蛋白,该抗体能识别52和34 ku两条条带,证明了二聚体的存在.这一结果暗示EsDMRT-like可能通过形成二聚体形式调控中华绒螯蟹精巢发育.     

养殖与野生银鲳精巢发育形态学和组织学的初步比较

采用组织学与形态学等方法研究养殖与野生银鲳(Pampus argenteus)精巢结构、细胞形态、发育过程的异同点。结果表明:银鲳精巢结构为典型的小叶型结构,由精小叶、精小囊、小叶间质、小叶腔和输出管构成;生殖细胞可划分为5类;精巢发育与其他海水鱼类一样,可划分为6个时期。通过实验得知,养殖银鲳个体普遍小于野生银鲳的个体,且同等大小个体的养殖银鲳的精巢发育也不如野生银鲳精巢饱满,推测可能由于营养和环境温度的差异所造成。     

养殖银鲳第一次性周期性腺发育组织学

采用常规石蜡切片技术对人工养殖银鲳的性腺发育情况进行了研究。结果表明,在1～2月龄,养殖银鲳精巢处于第Ⅰ期;3～4月龄发育至第Ⅱ期;5月龄时发育至第Ⅲ期;6月龄时发育到第Ⅳ期;在7月龄时即能达到性成熟;在越冬的8～10月龄退化至第Ⅲ期,之后又开始重新发育,并在11～12月龄达到成熟。卵巢在3～4月龄时发育至第Ⅰ期;5月份发育至第Ⅱ期;6月龄发育到第Ⅲ期;7～8月龄的越冬时期卵巢退至第Ⅱ期;越冬之后的9～10月龄时卵巢继续发育,并在11～12月龄时达到性成熟。银鲳精巢和卵巢发育都为不完全同步型,且精巢发育较卵巢快。本研究为银鲳性腺发育及人工繁育研究提供了基础资料。     

团头鲂倍间杂交三倍体性腺发育的多态性观察初报

于5月份团头鲂正常繁殖期前夕,以初次性成熟(二足龄)二倍体团头鲂为对照样本, 同龄同池培育的同源倍间正交三倍体、同源倍间反交三倍体、异源倍间杂交三倍体为实验样本,分别取性腺,石蜡切片,镜检发育状况.发现团头鲂三倍体的性腺可归纳为三种情况:(1)性腺发育程度很低,表现为雄性二足龄三倍体的性腺外观细小,生殖细胞处于精原细胞水平.(2)性腺发育出现异常,表现在性腺外观畸形,有卵巢单侧不发育,有精巢大部分为细线,局部增粗等情况,还有发现外观无异常,但切片观察为雌雄嵌合体.(3)性腺发育无异常,表现为性腺外观没有异常,切片观察也能观察到各期典型的生殖细胞.     

三苯基锡对褐菖鮋精巢发育的影响及其作用机制

三丁基锡(tributyltin,TBT)和三苯基锡(triphenyltin,TPT)广泛应用于海洋船只防污涂料。但相对于TBT,对TPT的毒性研究还很少。本实验以海洋经济鱼类褐菖鲉(Sebastiscus marmoratus)为对象,研究环境水平TPT对精巢发育的影响。研究发现,TPT降低精巢的精子数目和密度,增加精小叶间隙脂滴数量和精巢总脂质水平。另外,TPT降低精巢睾酮酯化水平,增加游离睾酮水平,降低游离17β-雌二醇水平。TPT对精巢发育的抑制可能与精小叶间隙脂质水平的增加及精巢17β-雌二醇水平的降低有关。实验结果为全面了解TPT产生鱼类生殖毒性效应、途径和机制提供了新的重要资料。环境水平的TPT能够抑制精巢的发育,而且毒性要高于TBT。这些结果为海洋环境政策的制定和评估有机锡污染对海洋鱼类资源的影响提供了重要的依据。     

镉急性染毒对中华稻蝗精卵巢小分子热休克蛋白基因表达的影响

小分子热休克蛋白(s HSPs)能够被环境胁迫诱导,采用不同浓度氯化镉(Cd Cl2)溶液对中华稻蝗5龄若虫进行急性染毒,利用Real-time PCR技术对5个小分子热休克蛋白基因Oc HSP19.1、Oc HSP19.8、Oc HSP20.4、Oc HSP20.7和Oc HSP21.1在精巢和卵巢的表达进行了分析。结果表明:在精巢内,Oc HSP19.1和Oc HSP19.8基因经0.16μg·μL-1Cd2+处理,其在不同处理时间的表达水平与对照组相比均显著升高;经0.32μg·μL-1Cd2+处理,其在2 h表达水平最高,之后显著降低;经0.48μg·μL-1Cd2+处理,Oc HSP19.1基因在2 h和6 h的表达量均高于对照组,在12 h的表达量低于对照组,Oc HSP19.8基因在2 h的表达量高于对照组,在6 h的表达量低于对照组,之后二者表达量都显著升高,在36 h表达量最高,分别为对照组的6.3倍和5.4倍。在卵巢内,Oc HSP19.1和Oc HSP21.1基因经0.16μg·μL-1和0.48μg·μL-1Cd2+处理,其在不同处理时间的表达水平与对照组相比无显著差异;经0.32μg·μL-1Cd2+处理,Oc HSP19.1基因在6 h和12 h的表达水平高于对照组,但在24 h低于对照组,Oc HSP21.1基因在2、6、12 h和24 h的表达水平与对照组相比均显著降低,但二者都在36 h表达量最高,分别为对照组的4.8倍和4.6倍;经0.16μg·μL-1和0.48μg·μL-1Cd2+处理,Oc HSP20.7基因在2 h表达水平高于对照组,经0.32μg·μL-1Cd2+处理,该基因的表达水平随着时间的延长出现先升高后降低的趋势。Oc HSP21.1基因在精巢内和Oc HSP20.4基因在卵巢内的表达水平与对照组相比无显著差异。研究结果显示,Cd急性诱导中华稻蝗5个Ocs HSPs基因在精巢和卵巢的表达模式不同,其表达量与Cd浓度和作用时间相关。     

杂色鲍精巢显微和超微结构的研究

通过光镜、扫描与透射电镜技术对杂色鲍精巢的显微及超微结构进行研究.结果表明:精巢由精滤泡组成,滤泡中央为结缔组织小梁.精原细胞分布于小梁边缘;初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞离小梁较远,散乱分布.精子头部呈短子弹头状.苏木精伊红染色,精子顶体强嗜酸性,为红色,核嗜碱性,为蓝色,尾部难着色,高倍镜下为丝状.精子表面不光滑.头部可见顶体和致密的核及其共同形成的顶体下腔,核中有染色质缺失的空泡结构,核后是4～5个线粒体围绕中心粒形成的略为膨大的颈部.鞭毛轴丝为典型的"9 2"结构.