穿膜肽引导的体外表达转录因子蛋白Sox2进入红鳍东方鲀精巢细胞系

为了探索适用于体外培养的鱼细胞外源基因转入方法, 本研究通过构建红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)转录因子Sox2的重组表达载体pET32a(+)-Sox2-11R-6His, 诱导表达并纯化得到了C末端连接多聚精氨酸(11R)的重组蛋白Sox2-11R-6His, 以其与红鳍东方鲀精巢细胞系细胞共孵育12 h后, 光镜观察结合Western Blot检测发现重组蛋白进入细胞的效率与浓度呈剂量依赖关系且最佳孵育浓度为8 μg/mL, 当重组蛋白质量浓度达到10 μg/mL时, 表现出明显的细胞毒性。对外源蛋白进行免疫荧光标记定位, 发现重组蛋白分布于细胞质, 部分进入到细胞核中。证明了穿膜肽11R可以有效运载转录因子重组蛋白至红鳍东方鲀的细胞系细胞中。本研究旨在将广泛应用于哺乳动物的细胞基因递送载体穿膜肽应用于鱼类细胞系细胞。