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甲基转移酶(methyltransferase,MTase)是鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)非结构蛋白5的重要功能基团,在病毒复制及致病过程中发挥重要作用.为了对鸭坦布苏病毒甲基转移酶进行真核表达,并对其生物学功能进行鉴定,以GenBank中收录的DTMUV JS804株基因序列为模板,设计针对MTase的特异性引物,提取TMUV RNA,反转录得到cDNA,以其为模板进行扩增,得到MTase的基因片段,然后亚克隆至pCMV-Flag真核表达载体中,构建重组质粒pCMV-Flag-MTase,提取去除内毒素的重组质粒,并转染至BHK-21细胞,通过间接免疫荧光观察和Western Blot鉴定该蛋白的表达.结果显示,质粒pCMV-Flag-MTase经双酶切鉴定证明构建正确,通过间接免疫荧光与Western Blot检测,重组质粒在BHK-21细胞内正常表达,表达的蛋白与天然坦布苏病毒MTase具有相同的反应原性. 相似文献
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以灭活的H9亚型禽流感NJ01病毒株作为抗原,按常规方法免疫BALB/c鼠,最后一次免疫后第3 d取脾细胞与SP2/0细胞进行融合,采用H I进行筛选,检出18个阳性孔,阳性率为4.69%。对其中的3个阳性值较高的孔进行3次克隆,最终获得3株单克隆细胞,分别命名为1E1、2E10和3G2。通过与新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒、H5亚型禽流感病毒进行H I试验,证明1E1、2E10和3G2分泌的抗体具有特异性。经连续1个月的体外培养和两次冻存复苏仍能稳定地分泌抗H9亚型禽流感H I抗体,3株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均为IgG1,杂交瘤细胞的染色体数目为92~108条,平均97条。杂交瘤细胞培养上清和腹水对H9亚型禽流感病毒的H I值分别为25~28和212~214,PD50分别10-2~10-1.67和10-4~10-3.33。单克隆抗体的制备为禽流感的快速诊断、预警预报和病毒的抗原性分析等奠定了基础。 相似文献
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85.
86.
红富士苹果劣质低产园改造技术研究 总被引:2,自引:0,他引:2
红富士苹果引进以来,发展迅速。由于投入不足,管理技术不同到位,造成产量低,质量次,成为苹果生产上较严重的现实问题。 相似文献
87.
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产蛋下降综合征病毒单克隆抗体的制备 总被引:2,自引:1,他引:1
以粗提的EDS-76病毒(NE-4株)作为抗原,按常规方法免疫BALB/c鼠,最后一次免疫后第3天取脾细胞与SP2/0细胞进行融合,采用间接ELISA和HI进行双重筛选,共检出25个阳性孔,阳性率为14.88%。对其中的11个阳性值较高的孔进行3次克隆,最后获得的11株杂交瘤细胞,经长期体外培养和冻存后复苏仍能稳定地分泌抗体;ELISA阻断试验和与其他病毒的交叉试验证明,其分泌的抗体具有高度特异性。经鉴定,11株McAb均为IgG,均无免疫沉淀特性,腹水和细胞培养上清的ELISA效价分别为1:3200~1:51200和1:128~1:2048。杂交瘤细胞的染色体数目为80~112,平均92。尤为重要的是,11株杂交瘤细胞中有4株分泌抗EDS-76病毒血凝素决定簇的中和单抗,细胞培养上清和腹水的HI价分别为210~2 ̄(12)和2 ̄(22)~2 ̄(24),腹水的中和效价为1:1280~1:5120。 相似文献
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90.