Sirt1基因稳定低表达的LMH细胞系构建

为构建Sirt1基因低表达的LMH细胞系,根据鸡Sirt1基因的3′UTR序列设计gSmiR30、gSmiR70和gSmiR91 3个miRNAs,以质粒pLNCX-gSmiRn(n为30、70或91)分别过表达这3个miRNAs 48 h后,依次检测其对CHO-K1细胞中报告载体psiCHECH2-gSirt1-UTR672所表达的荧光素酶活性的影响以及对LMH细胞中Sirt1基因表达的干扰情况;然后选用干扰效果较好的pLNCX-gSmiR30包装的反转录病毒感染LMH细胞,以终浓度1μg·mL~(-1)的G418筛选稳定过表达gSmiR30的LMH-gSmiR30细胞系,荧光定量PCR和Western blot检测Sirt1基因的表达。结果表明:人工设计的3个miRNAs可抑制含靶位点的海肾荧光素酶活性在97%以上;且LMH细胞中Sirt1的mRNA表达水平均能被这3个miRNAs下调40%以上;筛选得到的LMH-gSmiR30细胞中绿色荧光蛋白的表达率在99%以上,细胞内Sirt1基因的mRNA水平下降75%, SIRT1蛋白也明显减少。这一研究成功获得了Sirt1基因低表达的LMH-gSmiR30细胞系,为进一步研究Sirt1基因在鸡肝脏中的功能提供了一种很好的细胞模型。     

浦东鸡遗传多样性和进化的微卫星分子标记分析

利用15个微卫星DNA分子标记对浦东鸡及其它6个鸡品种的群体遗传多样性和进化关系进行了检测分析。结果表明,在15个微卫星位点上群体平均观测杂合度为0.5957,期望杂合度为0.6025,多态信息含量为0.5757;7个品种鸡群的遗传距离差异程度较大(0.1872～0.6003)。其中,浦东鸡同其它6个群体间存在显著的遗传差异。试验结果在一定程度上反映了浦东鸡独特的遗传组成和品种形成过程,而且所选择的15个微卫星DNA分子标记能够有效地分析鸡群的遗传基础。     

环丙沙星在鸡蛋中的残留消除规律

用高效液相色谱法检测鸡蛋中环丙沙星的残留量。鸡蛋经乙腈溶液提取,提取液真空干燥后用流动相溶解。以0.015mol·L-1四丁基溴化铵/乙腈(体积比为94/6)作流动相,用SymmetryC18柱(5μm,3.9mm×150mm),在激发波长280nm、发射波长455nm处用荧光检测器检测。结果表明:环丙沙星以0.05、0.50和1.00mg·kg-1分别添加到空白鸡蛋样品中,测得的鸡蛋样品中环丙沙星回收率分别为(82.2±6.8)%、(84.5±5.9)%和8(7.9±4.7)%,相对标准差均低于8.3%。用该法测定的鸡蛋中环丙沙星最低检测限为0.01mg·kg-1。各试验组产蛋鸡给药剂量分别按体重10.0、20.0mg·kg-1内服环丙沙星水溶液,每天给药1次,连续5d,鸡蛋中环丙沙星残留量逐渐增大,服药5d后停药,鸡蛋中环丙沙星残留消除缓慢,休药8-9d时鸡蛋中环丙沙星残留量低于0.03mg·kg-1,休药9-10d时鸡蛋中环丙沙星残留量均低于最低检测限;且随着环丙沙星给药剂量的增大,环丙沙星在鸡蛋中的残留量也相应增大。     

肉鸡血浆VLDL浓度与肥度性状和体重的相关研究

以一世代和二世代高、低脂系肉鸡为素材,测定了42,45和49日龄肉鸡血浆极低密度脂蛋白（VLD）浓度和体重,并于二世代时屠宰72只49日龄肉鸡（公、母各半）,测定其肥度性状。结果：血浆VLDL浓度和肥度性状变异大,变异系数分别为34％～60％和21％～27％;血浆VLDL浓度为中等遗传力,因此对血浆VLDL浓度选择宜采用家系和个体选择结合的方法;血浆VLDL浓度和腹脂重（率）呈显著正表型相关,其遗传相关为中等至较高水平;血浆VLDL浓度与体重表型相关很弱,而遗传相关为中等,公、母鸡腹脂重与体重呈显著正表型相关。腹脂率与体重表型相关均不显著。表明对血浆VLDL浓度低向选择,在降低腹脂的同时,体重也将下降。为防止体重的下降,应对血浆VLDL浓度和体重同时进行选择。     

中草药饲料添加剂的功能及其在鸡生产中的应用

对中草药饲料添加剂在鸡生产中促进肉仔鸡生长、提高肉品质、增强免疫力、预防和治疗腹水症,提高蛋鸡生产性能和蛋品质水平、解决蛋鸡生产中的热应激等问题做一综述。     

鹅Myostatin基因单核苷酸多态性检测及群体遗传分析

肌肉生长抑制素是TGF-β超家族的新成员，其主要在骨骼肌中特异性表达，且对骨骼肌的生长发育起负调控作用。本研究采用PCR-SSCP和DNA测序的方法检测了鹅Myostatin基因的单核苷酸多态性，并对浙东白鹅、五龙鹅、扬州鹅、朗德鹅、莱茵鹅、豁眼鹅、吉林农大白鹅、狮头鹅、皖西白鹅、籽鹅等不同品种（系）鹅单核苷酸多态性进行了群体遗传分析。结果表明：（1）在检验的12对Myostatin基因的引物中，发现3对引物的扩增片段具有多态性，分别为启动子区域T769G、C543T的突变，内含子1的A1632G突变。（2）不同鹅品种（系）群体遗传学分析表明，启动子区域引物P3扩增片段多态性位点在各群体中等位基因A的频率均高于B，且等位基因频率均高于0．77，表现为优势等位基因；引物P4扩增片段多态性位点在扬州鹅、朗德鹅、狮头鹅群体中等位基因D的频率均高于C的频率，等位基因D的频率分别为0．6250、0．5488、0．6474，而在其余群体中均表现为等位基因C的频率高于D的频率。     

丁酸梭菌在畜禽生产中的应用研究进展

丁酸梭菌(Clostridium butyricum)具有调节肠道微生态平衡、产生消化酶和维生素等营养物质、提高动物免疫力、抗细胞凋亡、抗肿瘤等多种生理功能。此外,丁酸梭菌属于厌氧芽孢杆菌,对饲料加工过程中的高温、高压以及动物胃肠道环境有较好的耐受性。因此,丁酸梭菌是一种适合在畜禽生产中添加的益生菌。本文总结了丁酸梭菌的生物学特性、生理功能和对畜禽生产的影响及其作用机理,为丁酸梭菌的进一步研究和开发应用提供参考。     

珠蛋白肽对早期断奶仔猪生长性能和血液指标的影响

120头35日龄的长×大二元去势公猪随机分成3组,分别为基础日粮组、基础日粮+0.5%小肽组、基础日粮+1.0%小肽组,每组设4个重复,每个重复10头仔猪,试验期28d。结果表明:与对照组相比,0.5%小肽组平均日增重提高了10.9%(P<0.05),腹泻率降低52.1%(P<0.05);IgG、总蛋白、球蛋白、谷丙转氨酶分别提高了59.1%、19.8%、29.1%、49.2%(P<0.05),尿素氮浓度降低20.1%(P>0.05)。以上结果显示,珠蛋白肽能提高早期断奶仔猪生长性能,增强机体的免疫机能。     

鹅SCD1基因真核表达载体构建及在肝细胞中的表达

构建硬酯酰辅酶A去饱和酶1(Stearoyl-CoA Desaturase l,SCD1)真核表达质粒pcDNA3.1(+)/SCD1,转染鹅原代肝细胞验证其对细胞中脂肪代谢的影响。根据鹅SCD1基因设计带有酶切位点引物,RT-PCR扩增SCD1基因,克隆至pMD-19T载体,亚克隆至pcDNA3.1载体,构建重组真核表达载体pCDNA3.1(+)/SCD1。酶切及序列测定测序正确后转染鹅原代培养肝细胞,荧光定量PCR检测SCD1基因的表达,并用油红O染色检测细胞中脂滴情况。结果:成功构建SCD1基因真核表达载体,转染鹅原代培养肝细胞后SCD1基因获得了表达,与脂肪代谢相关基因SREBP表达上调,同时检测到细胞中脂滴明显增多。结论:构建了重组质粒pCDNA3.1(+)/SCD1,并在鹅原代培养细胞中获得表达,为进一步研究SCD1基因在鹅肝脏脂肪代谢中的作用奠定基础。