印度海马资源开发和保护

海马属于海龙目（Syngnathitormes）、海龙科（Syngnathidae）、海龙属（Hippocampus）的小型海洋鱼类。目前全球所见到的海马有34种，其中经济价值较大的有8种。2001年全球干海马贸易量超过70t（超过2500万尾），其中很大部分用作中医药。用作观赏鱼用途的极大部分海马都是野生的，主要来自印尼和菲律宾，出口北美、欧洲和日本。     

基于D-loop和Cyt b序列的大海马遗传变异分析

[目的]对大海马D-loop和Cyt b序列进行遗传变异分析。[方法]基于D-loop和Cyt b部分序列对东山岛(20尾)和泉州市(20尾)养殖场大海马进行遗传变异分析。[结果]获得的D-loop和Cyt b序列分别为707~709 bp和404 bp,且2种序列在2个大海马群体之间极其保守。D-loop和Cyt b序列G+C含量明显低于A+T含量,C含量也低于G含量,Cyt b序列第3位密码子G含量最少。东山岛和泉州市的大海马(各20条)D-loop序列的平均核苷酸差异数分别为0.489和0.958,且分别定义了3种和6种单倍型,东山岛和泉州市的大海马(各20条)Cyt b序列在2个群体之间相似度为100%,只定义了1种单倍型。[结论]研究表明D-loop和Cyt b序列在2个大海马群体中变异较小。     

啮齿类海马神经元的原代培养及方法改进

目的:通过对新生啮齿类海马神经元的分离和培养,尝试建立一个简单、稳定、高效的啮齿类海马神经元原代培养方法,为脊髓损伤的相关分子机制研究提供目的细胞。方法:取新生SD乳鼠的海马组织,通过低浓度胰酶消化制成细胞悬液、4h差速贴壁后使用无血清Neurobasal培养基培养,倒置显微镜观察细胞生长状态,免疫荧光对海马神经元相关微管蛋白-2(MAP2)行特异性染色,结合DAPI核染色鉴定神经元。结果:该方法培养的海马神经元生长状态良好,纯度较高。结论:采用低浓度胰酶消化,差速贴壁及无血清培养啮齿类海马神经元符合体外细胞实验要求,为进一步研究提供良好的目的细胞。     

三斑海马的驯化与苗种培育研究

[目的]通过对三斑海马的驯化与苗种培育试验,丰富三斑海马的生物学基础资料。[方法]从海南本地收集三斑海马亲本,开展人工驯化和苗种培育,并探索其繁殖生物学行为。[结果]亲鱼驯化成活率达到85%,获得三斑海马初孵幼苗2.9万尾,培育1月龄鱼苗1.1万尾,海马最适开口饵料为"小球藻+轮虫+桡足类幼体"。三斑海马亲鱼抱卵量和孵化量存在个体差异,亲鱼抱卵量最少350粒/尾,最多1 020粒/尾,平均660粒/尾。亲鱼孵化量最少220尾,最多720尾,平均580尾。[结论]该研究结果可为海马的苗种繁育和人工养殖提供科学依据。     

中年CD-1小鼠背海马syntaxin 1水平的改变

应用免疫组化技术检测13月龄(中年)和5月龄CD-1小鼠背海马突触前蛋白syntaxin 1的表达水平.结果显示,13月龄小鼠齿状回、CA1及CA3区各层syntaxin 1的相对含量较5月龄均显著下降.表明中年CD-1小鼠背海马syntaxin 1含量全面下调.     

针刺大椎、百会、人中穴对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点海马脑红蛋白表达的影响

目的 观察针刺大椎、百会、人中穴对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时间点海马脑红蛋白（neuroglobin,Ngb）表达的影响,探讨其脑保护作用的部分作用机制。方法 采用线栓法制备MCAO模型,将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、对照点组、穴位组4大组,每组再根据再灌注后时间分为24 h、72 h组,每组5只。完成治疗后,先行神经功能缺损评分再处死大鼠,再采用Western Blot法检测大鼠缺血侧海马Ngb的表达水平。结果 神经功能缺损评分：与假手术组比较,模型组、对照点组及穴位组神经功能缺损评分均升高,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;模型组、对照点组、穴位组三组神经功能缺损评分差异无统计学意义（P>0.05）。与24 h组比较,72 h模型组神经功能缺损评分差异无统计学意义（P>0.05）;72 h对照点组及穴位组神经功能缺损评分均下降,差异有统计学意义（P<0.05）。Ngb：与假手术组比较,模型组Ngb的表达水平明显降低（P<0.01）;与模型组比较,对照点组及穴位组Ngb的表达水平均明显升高（P<0.01）;与对照点组比较,穴位组Ngb的表达水平有升高,但差异无统计学意义（P>0.05）。与24 h组比较,72 h假手术组、模型组及对照点组Ngb的表达水平均有下降,但差异无统计学意义（P>0.05）;72 h穴位组Ngb的表达水平下降明显,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 针刺能降低脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损评分,并可上调海马Ngb的表达水平,从而实现脑保护作用。     

电针“委中”对多裂肌损伤模型大鼠钙调蛋白信号通路的影响

目的 探讨多裂肌损伤后,电针"委中"干预对多裂肌损伤过程中钙调蛋白信号通路的影响。方法 SD大鼠随机分为空白组、模型1 d组、模型3 d组、电针1 d组、电针3 d组,每组8只。电针组双侧"委中"电针,于治疗的第1、3天各组同步取材,采用酶联免疫吸附法检测多裂肌、脊髓、海马组织中CaM、CaMKⅡ、iNOS的含量。结果 模型1 d和3 d组,多裂肌、脊髓、海马CaM、CaMKⅡ含量显著高于空白组（P<0.01）;多裂肌、脊髓、海马iNOS含量高于空白组（P<0.05或P<0.01）。电针1 d后,多裂肌、脊髓、海马CaM、CaMKⅡ、iNOS含量显著低于模型1 d组（P<0.05或P<0.01）。电针3 d后,多裂肌、脊髓、海马CaM、CaMKⅡ、iNOS含量低于模型3 d组（P<0.05或P<0.01）。电针3 d后,脊髓、海马CaM、CaMKⅡ及多裂肌CaMKⅡ含量显著低于电针1 d组（P<0.01）,多裂肌CaM、iNOS和脊髓、海马iNOS含量与电针1 d组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 多裂肌损伤早期,电针"委中"干预可通过抑制CaM、CaMKⅡ的过度激活,减少组织中iNOS的过多产生,减轻组织炎症损伤。     

盐生植物海马齿中与K^＋离子胁迫有关的基因功能初步鉴定

盐生植物海马齿常年生长在海边沙地,能忍耐高盐干旱。本研究对从海马齿植物盐胁迫下的差减文库（SSH文库）中分离的3个全长基因SRTG152-I、SRTG152-Ⅱ和SRTG152-Ⅲ（GenBank：FJ457924,FJ457925和FJ457926）进行了微生物表达和耐盐分析。3个全长基因分别插入pET-22bf＋）表达载体,经过1mmol／L的IPTG在37℃下诱导3h,它们均获得了成功表达。耐盐性功能分析表明,3个基因对Ca^、Mg^2＋和Na^＋离子没有抗性,而在900mmol／L高浓度U离子的胁迫下与对照相比赋予菌株一定的U离子抗＋性。所以,我们初步推测这3个全长基因SRTG152-I、SRTG152-Ⅱ和SRTG152-Ⅲ是一类与U离子的抗性相关的基因。     

高糖培养对乳鼠海马神经元存活及c-fos蛋白表达影响

目的探讨高糖培养对乳鼠海马神经元存活及c-fos蛋白表达影响。方法无血清体外培养方法获得新生SD乳鼠海马神经元,分为正常组和高糖6、12、18、24h共5组。分别用PI/Hoechest33342染色法、免疫荧光细胞化学法检测检测海马神经元存活率及c-fos蛋白表达。结果高糖24h组海马神经元存活率明显低于正常组及高糖6、12、18h组(P<0.01)。高糖处理后,c-fos蛋白表达在6h开始出现,12h达高峰,此后逐渐下降(P<0.01)。结论高糖培养导致的乳鼠海马神经元存活率下降与c-fos蛋白表达有关。     

纳米银对原代培养海马神经细胞凋亡的研究

[目的]探讨纳米银对原代培养海马神经细胞的影响。[方法]用吖啶橙染色观察细胞形态及染色质的变化,用Fluo3荧光染料检测细胞内游离Ca2+浓度变化,并利用ELLSA试剂盒检测Caspase-3凋亡酶活性。[结果]与正常对照组相比,经50μg/ml纳米银处理36h后,海马神经细胞的凋亡率达到最高((48.3±0.33)%),凋亡酶活性增强,并且细胞内游离的Ca2+荧光强度达到41.70±18.78。结论50μg/ml纳米银作用36 h可导致海马神经元凋亡。