非洲猪瘟病毒CRISPR/Cas9敲除技术研究进展

非洲猪瘟(african swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,严重危害着全球养猪业。目前尚无商品化ASFV疫苗用于ASF的防控。传统ASFV疫苗研究存在不同程度的局限性。通过建立ASFV的CRISPR/Cas9基因敲除技术平台,将为非洲猪瘟病毒基因功能研究提供便捷的工具。     

MDV CVI988/Rispens弱毒株VP22基因克隆和序列分析

血清I型马立克氏病病毒(MDV-1)的UL49h基因编码病毒被膜蛋白VP22在病毒的复制和传播过程中具有非常重要的作用.根据已发表的MDV-1 GA株的序列,从CVI988/Rispens弱毒株感染的鸭胚成纤维细胞中扩增VP22基因片段,结果获得大小为732 bp的PCR产物.将PCR产物克隆T载体并测序分析,结果发现,与经典强毒GA株相比,弱毒株CVI988的VP22存在3个定点突变和一个缺失性突变.缺失的位点亲水性强,并位于VP22主要的抗原决定簇区.结果证明强毒株与弱毒株的VP22存在明显差异,为利用CVI988 VP22的蛋白传导域传导目的蛋白奠定了理论基础.     

鸭腺病毒3型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

为进一步研究鸭腺病毒3型（DAdV-3）Fiber-2蛋白，研究通过PCR扩增fiber-2基因，构建p ET32a-DAdV3-fiber2原核质粒，表达并纯化蛋白，以纯化的蛋白为免疫原，免疫6周龄雌性BALB/c小鼠制备抗Fiber-2单克隆抗体杂交瘤细胞，采用间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行鉴定，并用于DAdV-3 Fiber-2杆状病毒表达产物的鉴定。结果显示：原核表达获得1.77 mg/mL Fiber-2蛋白，筛选获得2株阳性单克隆细胞株2E10E4和4F7F10，两株单克隆抗体均为IgG 1型，轻链类型为κ；DAdV-3感染的LMH细胞中存在特异性荧光，免疫印迹试验确认在约59 ku处出现特异性条带；采用制备的单克隆抗体确认了表达Fiber-2蛋白的重组杆状病毒。研究获得了针对DAdV-3 Fiber-2蛋白的单克隆抗体，为深入探究Fiber-2在DAdV-3感染机制中的作用以及为建立DAdV-3抗原免疫测定技术奠定了基础。