视黄醇对内毒素诱发的乳腺炎大鼠抗氧化能力的影响

为研究视黄醇对内毒素诱发乳腺炎大鼠的抗氧化能力的影响,将40只孕鼠随机分为正常对照组(Con,n=8)、阳性对照组(P,n=8)和试验组(T,n=24).自怀孕第10天起,试验组分别灌喂视黄醇(溶解于大豆油)4000 IU/(kg·d)(L,n=8)、8000 IU/(kg·d)(M,n=8)、16000 IU/(kg·d)(H,n=8),对照组灌喂等量的大豆油,连续10 d.产后72 h分别灌注灭菌生理盐水(Con组)和10 μg大肠杆菌内毒素(Escherichia coli endotoxin,LPS)(P和T组)到大鼠第4对乳腺内,12 h处死大鼠,收集血清及乳腺组织.试验结果显示,视黄醇灌喂降低了LPS诱发的乳腺组织中炎性细胞的浸润及组织的损伤;LPS灌注乳腺组织后乳腺组织抗氧化能力降低,灌喂低剂量、中剂量的视黄醇能显著提高乳腺组织和血清总抗氧化能力(P<0.05).研究表明,视黄醇可以通过改善机体的抗氧化机制,对LPS诱发的试验性大鼠乳腺炎发挥一定的预防作用.     

转人乳铁蛋白基因山羊乳对大鼠生长及代谢机能的影响

选用30只100 g左右清洁级SD大鼠,雌雄各半,随机均分为3组,转基因乳组每天2次灌胃转人乳铁蛋白基因(hLF)波尔山羊乳1 mL(蛋白含量0.93 g·mL-1),普通乳组灌胃未经任何处理的普通波尔山羊乳1 mL(蛋白浓度0.93 g·mL-1),生理盐水组灌胃等量灭菌生理盐水;自由采食、饮水,连续15 d;颈部静脉采血致死,收集血清.结果显示:灌胃转hLF基因山羊乳显著提高了雌、雄大鼠的日增重,与生理盐水组相比差异极显著(P<0.01),与普通乳组相比差异显著(P<0.05),而普通乳组与生理盐水组相比差异不显著;灌胃转基因和普通山羊乳对其他表观及生化指标均无显著影响(P>0.05).试验结果表明:短期灌胃转hLF基因山羊乳能够促进大鼠的生长,但对大鼠的代谢机能没有显著影响.     

血清Ⅰ型马立克氏病病毒被膜蛋白UL11在真核细胞内的表达

本研究利用血清Ⅰ型马立克氏病病毒（Marek＇s disease virus serotype 1,MDV-1）被膜蛋白UL11原核表达产物作为免疫原,免疫小鼠制备多抗血清,通过间接免疫荧光试验,结果发现：UL11真核表达时,存在于COS-1和Sf9细胞浆中。而检测MDV的RB1B毒株感染CEF时,却发现UL11高度聚集于空斑中心,且可分布于空斑周围的所有细胞核中。这为研究UL11细胞核内扩散的分子机制,以明确UL11是否参与MDV-1致瘤的过程提供了参考。     

我国实施兽药GMP标准的意义和现实

兽药GMP(Good Manufacturing Practice for Animal Drugs，兽药生产质量管理规范)是指在兽药生产过程中用以确保兽药生产保持一致性，符合质量标准，适用于其使用目的，并符合销售要求的优良的质量管理制度，是用科学合理、规范化的条件和方法来保障生产优良兽药的一套科学管理方法。它要求企业从收进原料开始，一直至制造包装、贴标签、出厂等各项生产步骤和操作部制订出明确的准则和管理方法。     

全菌抗原检测禽霍乱血清抗体ELISA方法的建立

采用C48-1全菌抗原烘干包被聚苯乙烯微量反应板,建立了检测禽霍乱血清抗体的间接ELISA方法。抗原最佳包被浓度为0.5×108cfu/mL,被检血清最佳稀释度为1∶800,确立了用于定量检测ELISA效价的回归方程:y=1.611 2+0.431 4x(r=0.96)。通过阻断试验、交叉试验、重复试验等方法证明本方法在特异性、灵敏性、稳定性上均达到了较为满意的结果,且易于操作,适用于疫病诊断和大规模的血清流行病学调查。     

猪流行性腹泻病毒感染对猪小肠上皮细胞I型干扰素产生通路的影响

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是严重危害仔猪肠道健康的病原之一.用病毒感染复数(MOI)=1.0的PEDV感染猪小肠上皮细胞,通过间接免疫荧光试验,证实PEDV能在猪小肠上皮细胞中增殖.通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测,发现Toll样受体3(TLR3)编码基因、视黄醇诱导基因I/黑色素瘤分化相关基因5(RIG-I/MDA5)的mRNA表达水平分别从感染后2 h、4 h开始显著升高(P<0.05),分别在感染后12 h、24 h达到最高值;线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)编码基因的mRNA相对表达量从感染后6 h开始显著升高(P<0.05),随后基本保持不变.下游接头蛋白质β干扰素TIR结构域衔接蛋白质(TRIF)、肿瘤坏死因子相关因子3(TRAF3)、IκB激酶ε(IKK-ε)和TANK结合激酶1(TBK1)编码基因的mRNA相对表达量在感染后4 h出现显著上升(P<0.05),随后IKK-ε编码基因的mRNA相对表达量在感染后8 h达到最高值,TRIF、TRAF3和TBK1编码基因的mRNA相对表达量均在感染后12 h达到最高值.干扰素调节因子3(IRF3)编码基因的mRNA相对表达量在感染早期无显著变化,在感染后24 h达到最高值(P<0.05).与对照组相比,PEDV感染无法诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)IFN-β编码基因的mRNA相对表达量显著升高,但能有效抑制Poly(I:C)(聚肌胞苷酸)诱导的IFN-β产生.结果表明,PEDV能够在感染早期激活TLRs、RLRs介导的I型IFN产生通路中相关受体及接头蛋白质的基因表达,但最终能抑制干扰素产生,并能在猪小肠上皮细胞中有效增殖.     

苏钟猪ACE2基因克隆及其遗传进化分析

为了克隆苏钟猪的血管紧张素转化酶2(ACE2)基因,根据GenBank发表的ACE2基因序列,设计合成1对引物,从苏钟猪心脏提取总RNA,对ACE2基因进行RT-PCR扩增并测序,然后利用DNAstar软件对序列进行比对分析。产物经琼脂糖电泳分析,呈现1条约641 bp的条带,回收纯化后对扩增的猪心肌ACE2 mRNA进行了测序和比较分析。扩增的猪ACE2核苷酸序列与GenBank中已登录的2只猪ACE2核苷酸序列同源性分别为98.6%和99.2%。同时,利用DNAstar将其与人、牛、大鼠和小鼠等物种相应序列进行比较,结果表明苏钟猪ACE2基因与牛同源性最高,达到87.5%;与人的同源性为82.5%,与斑马鱼的同源性最低,仅为52.3%。对由苏钟猪ACE2基因核苷酸序列推导的氨基酸序列进行同源性比较也得到了同样的结果。     

ACE和ACE2在自发性高血压大鼠肾脏中的表达与作用分析

为观察血管紧张素转化酶(ACE)和血管紧张素转化酶2(ACE2)在自发性高血压大鼠肾脏中的表达及它们与高血压形成的关系,取14周雄性Wistar-京都种大鼠(WKY)和自发性高血压大鼠(SHR)各8只,自由采食和饮水1周后测定大鼠收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和心率(HR),称重后断头处死,取血液和肾脏组织进行如下试验:放免法测定血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量,肾脏组织中ACE、AT1、ACE2和Mas mRNA表达水平的Real-time PCR分析,肾脏组织中ACE2蛋白表达的比较分析。试验结果表明:SHR大鼠SBP和DBP均显著高于WKY大鼠,而心率和体重无显著差异(P>0.05);SHR大鼠血浆中AngⅡ含量和肾脏组织中ACE mRNA表达水平均显著高于WKY大鼠(P<0.05),肾脏组织中ACE2 mRNA和蛋白表达水平均显著低于WKY大鼠(P<0.05),2组大鼠肾脏组织中AT1和Mas mRNA表达没有显著差异(P>0.05)。SHR大鼠肾脏中ACE的mRNA表达显著升高,而ACE2的mRNA和蛋白表达均显著下降。高血压时,肾脏局部组织中ACE和ACE2表达失衡,表现为ACE-AngⅡ-...     

内毒素对山羊乳腺组织中与乳腺炎相关的酶和细胞因子的影响

8只泌乳期的健康睢宁白山羊,产后72 h分别用内毒素和灭菌生理盐水经乳头管灌注左右侧乳房.灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊整体及乳房局部变化.灌注24 h后,处死动物,取乳腺组织,部分用Bou in氏液固定,部分用液氮保存.临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现典型的急性乳腺炎症状.检测两侧乳腺组织中部分与乳腺炎症相关因子的含量及其基因表达水平的结果表明:与灌注生理盐水对照相比,灌注内毒素侧乳腺组织中N-乙酰-β-D氨-基葡萄糖苷酶(NAGase)、髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的活性及IL-1β、IL-6的含量极显著升高(P<0.01),TNFα-含量显著升高(P<0.05);相同条件下对2种处理组织样中3种细胞因子mRNA表达水平进行PCR扩增,灌注内毒素侧能检到明显的目的条带,对照侧未见明显的目的条带.     

CpG-ODN对S.aureus诱导的山羊实验性乳腺炎乳腺的保护作用研究

选择同处于泌乳初期的睢宁白山羊6头，于右乳区经过乳导管灌注10μg／kgCpG—ODN，左乳区则灌入等体积的灭菌100μL0．0lmol／LpH7．2磷酸盐缓冲液（PBs）作为对照，灌注后第3d按同等剂量进行二次灌注；次灌注后第2d，分别于左右乳区经乳导管灌注3mL（2&#215;10^9CFU／mL）金黄色葡萄球菌（S．aurcus），于灌注细菌前（0h），灌注后8h，16h，24h，48h和72h分别收集左右乳区乳汁进行检测。临床症状观察显示，乳腺内灌注3mL（2&#215;10^9CFU／mL）的S．aureus能迅速诱导山羊典型的急性乳腺炎症状。组织学观察显示感染S．aureus后72h乳腺腺泡内仍有嗜中性粒细胞（PMN）浸润，但实验乳区明显减少。乳汁S．aureus数同在感染后24h上升至最高，CpG—ODN能显著降低各个时间点乳汁细菌数。乳汁白细胞介素-6（IL-6）水平同在感染后24h上升至最高，CpG-ODN能显著提高感染后24h乳汁IL．6水平。对照和CpG—ODN处理乳区乳汁肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平分别在感染后24h和16h上升至最高，其中在感染后24h实验乳区比对照下降40．63％（P〈0．051。乳汁N-乙酰-β—D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）水平同在感染后16h达最高（P〈0．01），CpG—ODN能显著提高感染后8h乳汁NAGase水平。上述结果表明CpG—ODN可通过提高乳汁IL-6水平、加速并促进乳汁TNF-α的释放，从而减少了乳汁中S．aureus数量，减轻了炎症介质对细胞的损伤，对缩短炎症过程也有一定的作用，实验结果证实了CpG—ODN对S．aureus感染诱发的山羊乳腺炎的乳腺有保护作用。