分泌抗山羊γ干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备与鉴定

为筛选分泌山羊γ干扰素(IFN-γ)单克隆抗体的杂交瘤细胞,以原核表达的山羊rIFN-γ蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾脏细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,以间接ELISA方法筛选分泌山羊IFN-γ单克隆抗体杂交瘤细胞,采用山羊外周血淋巴细胞产生的IFN-γ包被酶标板对IFN-γ的特异性进行鉴定,用试纸条对IFN-γ单克隆抗体类别和亚型进行鉴定。结果获得了1株能特异性识别山羊IFN-γ的杂交瘤细胞3C,3C分泌的单克隆抗体能够特异性识别天然结构的山羊IFN-γ,单克隆抗体类别为IgG,轻链为κ型。     

河南省猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查

为了解河南省猪繁殖与呼吸综合征在河南的流行状况、发病原因,开展了问卷调查、现场调查、实验室组织样品检测等研究。结果表明,河南省大部分地区存在猪繁殖与呼吸综合征,各地区间没有差异,临床发病多在冬春季节,以30~70 d仔猪发病率最高（41%）;165个猪场送检的组织样品中,65个猪场为阳性,阳性率达34.4%。提示猪繁殖与呼吸综合征在河南危害严重,应采取多种措施积极防制。     

卵清蛋白特异性免疫耐受的诱导及鉴定

【目的】建立对卵清蛋白(OVA)免疫耐受的Babl/c小鼠模型。【方法】分别设立A、B、C、D、E、F试验组及相应对照组。A、B组小鼠口服OVA,隔天1次,共服5次,口服剂量分别为50或100μg/只;C、D、E、F组小鼠经尾静脉注射OVA 1次,剂量分别为5,10,50和100μg/只;分别于口服完成7 d后或尾静脉注射5 d后免疫小鼠,免疫后15 d,MTT法测定小鼠OVA特异性淋巴细胞增殖情况,间接ELISA测定小鼠血清抗OVA的IgG水平。C、D组小鼠分别进行二、三次免疫并检测抗体。【结果】A、B组小鼠淋巴细胞增殖的刺激指数(Simulate index,SI)分别为0.603±0.03和0.715±0.08,增殖效果不佳;C、D组小鼠SI值分别为0.096±0.01和0.083±0.01,淋巴细胞不增殖;E、F组小鼠淋巴细胞增殖效果与正常小鼠无差异。第一次免疫后,各组小鼠OVA抗体效价与相应对照组小鼠的OVA抗体无显著差异;C、D组在二免、三免后抗体水平持续下降,不呈现再次应答规律。【结论】小鼠口服小剂量OVA可以建立不完全细胞免疫耐受,经尾静脉注射小剂量OVA可以建立完全免疫耐受。     

奶山羊IL-22的原核表达

根据signal IP3.0信号肽分析软件分析结果,设计IL-22不含信号肽表达引物,PCR扩增获得奶山羊IL-22基因,连接表达载体pET-32a,重组质粒转化BL21感受态细胞。对阳性克隆进行诱导表达,对诱导温度、IPTG诱导浓度、诱导时间等条件进行优化,在最佳条件大量诱导蛋白表达。结果显示,在37℃、IPTG浓度为0.1mmol/L、诱导5 h可获得IL-22最大表达量,目的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经洗涤、变性和复性,纯度可达90%以上。本研究为进一步探讨IL-22在奶山羊乳腺免疫中的作用奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征的套式PCR方法建立及应用

通过设计2对引物,建立了PRRSV的套式PCR方法,PRRSV细胞毒稀释10 000倍,依然能扩增出相应的片断,多次重复能得到一致的结果,非PRRSV病毒(猪瘟病毒、猪乙型脑炎病毒)均未扩增出相应片断.应用该方法对各地样品进行检测,表明建立的套式PCR方法适合进行流行病学调查.     

IL-17介导山羊传染性胸膜肺炎小鼠模型肺部炎症反应研究

为阐明IL-17等相关炎性因子在山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumoniae,CCPP)中的作用,将20只6周龄~8周龄SPF雌性Balb/c小鼠随机分成试验组和对照组,每组10只,建立CCPP小鼠模型,按时间点处死小鼠后采集血液和肺组织,进行组织病理学分析和肺部山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)载量检测鉴定模型。应用real-time PCR检测肺部IL-17及其相关细胞因子、趋化因子及其受体的mRNA水平,应用ELISA检测血清和肺组织匀浆上清液中IL-17蛋白水平,应用流式细胞术检测肺组织中中性粒细胞和巨噬细胞数量变化。结果显示,试验组小鼠精神状态不佳,肺部病理损伤严重,Mccp载量为5.9×10^4 copies/μL,与对照组相比有极显著差异(P<0.001);与对照组小鼠相比,试验组小鼠肺组织IL-17相关炎性因子mRNA表达升高,血清和肺组织匀浆上清液中IL-17蛋白水平显著升高(P<0.001,P<0.01),肺部中性粒细胞和巨噬细胞数量极显著增加(P<0.01,P<0.001)。说明成功构建了CCPP小鼠模型,在Mccp诱导小鼠肺部炎症早期,IL-17参与肺部炎症反应。     

7株猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆及序列分析

根据GenBank中猪圆环病毒2型的ORF2序列,设计l对引物,运用PCR方法,对中国动物卫生与流行病学中心监测室从福建、湖南和辽宁3省分离的7个毒株进行ORF2基因扩增.将其克隆到pGEM-T easy载体,筛选阳性重组质粒进行测序.应用DNAstar软件将测序结果与国内外参考毒株进行比对,并对Cap蛋白的细胞表位、糖基化位点等进行分析.结果表明,HUN、HUN-2和LN-19分离株ORF2基因大小为702 bp,编码233个氨基酸;FJ-3、FJ-4、HUN-11和LN-3的ORF2基因大小为705 bp,编码234个氨基酸.Cap蛋白5个表位区A(47～63)、B(65～87)、C(113～139)、D(165～200)和E(C端最后4个氨基酸)均发生一定变异.同源性分析表明,24株序列同源性为90.5%～99.9%,FJ-3与美国株同源性最低(90.5%),HUN和AF055393、DQl80392同源性最高(99.9%);FJ-3和FJ-4为94.5%,HUN-11和HUN-2为94.3%,HUN和HUN-2为99.3%,HUN和HUN-11为95%,LN-3和LN-19为94.7%,表明各地区ORF2基因比较稳定,但也存在一定差异.     

己烯雌酚半琥珀酸的合成

将己烯雌酚与丁二酸酐按一定比例溶解于无水吡啶中 ,室温下反应 3 4h。反应产物用稀盐酸溶液洗涤 ,将所得沉淀干燥后经分离纯化 ,对纯化产物进行高分辨质谱、红外光谱鉴定。结果表明 ,高分辨质谱测定出纯化物的分子量为 3 86.195 9,红外光谱鉴定出纯化物的官能团和己烯雌酚半琥珀酸相符 ,从而证明所合成的产物就是己烯雌酚半琥珀酸。本研究为己烯雌酚免疫原的合成奠定了基础     

CD58分子在新城疫疫苗免疫中的佐剂效应探讨

应用从猪红细胞提取的 CD58分子协同新城疫 疫苗 ,免疫 18日龄尼克红公鸡 ,以β-微量法测定ND抗体效价。并在免疫后 39d用 F4 8E9强毒株攻毒。结果表明 ,CD58能促进 ND抗体的提前产生 ,使应答负期明显缩短 ,并且试验组 ND抗体效价显著高于对照组 (P<0 .0 5 ,或 P<0 .0 1)。攻毒后 7d内 ,试验组鸡死亡率为 16 .7% ,对照组为 5 3.3%。     

人工感染新城疫鸡红细胞免疫功能及sCD2的变化

１５只１０～１２月龄的健康罗丝鸡经人工感染ＮＤＶ（Ｆ＿（４８）Ｅ＿８）后，以红细胞Ｃ＿３ｂ受体花环试验、红细胞免疫复合物花环试验、Ｅ＿１花环试验及反向Ｅ玫瑰花环试验测定其红细胞、Ｔ细胞免疫功能及外周血中可溶性ＣＤ＿２（＿ｓＣＤ＿２）含量的变化。结果表明，鸡感染ＮＤＶ后，在Ｃ＿３ｂ受体花环率、Ｅ＿１花环率不断下降的同时，外周血中，ＣＤ＿２含量持续上升导致６只鸡死亡；９只鸡在感染的中后期伴随着Ｃ＿３ｂ受体花环率及Ｅ＿１花环率的回升，．ＳＤ＿２含量趋向正常水平而耐过。认为高含量。ＣＤ＿２不仅与Ｔ细胞免疫功能受抑制密切相关，还可能与红细胞免疫功能受抑有关。