pIRES2-EGFP-prnd真核表达载体的构建及其在BHK细胞中的表达

为探讨叠朊蛋白(Doppel)在正常生理条件及相关疾病中的临床及生物学意义,构建BALB/c小鼠Doppel基因prnd的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-prnd,并转染BHK细胞,IFA检测其表达情况。结果表明,Doppel蛋白通过pIRES2-EGFP-prnd在BHK细胞中表达。试验可为进一步研究Doppel蛋白的结构、正常的生理生化功能及其与相关疾病的关系提供重要工具。     

大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展

由于DNA重组技术和蛋白组技术的发展与成熟,外源基因表达技术备受关注。其在生物、食品、工业以及医学领域发挥着举足轻重的作用。以原核生物细胞及真核生物细胞作为表达系统,进行目的基因序列的表达以生产蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制剂等是近年来发酵工业的新型领域。原核和真核表达系统是近年来研究和应用最广泛和最成熟的外源基因表达系统。对近年来关于大肠杆菌表达系统和酵母表达系统的研究进展进行了综述。     

试论高校廉政文化建设重要性及新举措

正廉政文化建设是高校党风廉政建设的重要组成部分,也是惩治和预防高校发生腐败现象的思想保障和文化基础。高校认真开展廉政文化建设,一方面有利于发挥党员干部模范带头作用,规范办学行为,促进高校和谐发展及主动加入国家反腐倡廉主战场;另一方面有利于帮助当代大学生形成正确的价值观、诚信观、职业观。目前,我国高校廉政文化建设存在认识缺位,廉政文化建设单边化、内容形式单一、制度     

中西结合治疗犬传染性肝炎

<正>犬传染性肝炎是由犬腺病毒Ⅰ型引起的一种急性败血性传染病,在犬主要表现为体温升高、肝炎、黄疸、贫血、角膜混浊等特征,部分犬的角膜变蓝,又称"蓝眼病"。在临床上,该病不是单独感染,而是常与犬瘟热发生混合感染,这样便使病情变得更加复杂,更加严重,不易控制。本病几乎在世界各地都有发生,是一种常见的犬病。(一)流行病学发病的初始阶段,病毒主要存在于患病犬的血液中,其次在各种分泌物、排泄物中都存在大量病毒,并可排出体外,造成外界环境     

猪流行性腹泻病毒在微载体培养Vero细胞上的增殖试验

为了探索猪流行性腹泻病毒(PEDV)在微载体培养Vero细胞上的增殖效果,采用2 L生物反应器进行微载体培养Vero细胞和PEDV繁殖,并摸索细胞生长和病毒繁殖的最佳条件,检测病毒滴度,与方瓶培养的病毒滴度进行比较。结果显示:当微载体为5 g,种子细胞数约3.05×107个,采用灌注式培养,Vero细胞经72 h长满单层,细胞数约为3.02×109个,此时用滴度为104.45TCID50/m L的PEDV 1 m L感染Vero细胞,培养96 h,微载体上80%细胞脱落时收毒,培养的PEDV具有较高的病毒滴度。相同病毒在微载体系统与方瓶上进行同步传代,经检测病毒滴度均有提高,但在微载体系统上培养的PEDV最高滴度可达到106.05TCID50/m L,明显高于方瓶培养。本试验为研究PEDV能更好适应Vero细胞,提高PEDV产量提供技术支持。     

信鸽的腺病毒病及其防治

<正>近年来,信鸽的腺病毒病的发病率和感染率现象比较普遍,而且在一定程度上呈现流行趋势,成为影响信鸽养殖朋友的一大养殖困惑,特别是在信鸽比赛过程中,大量信鸽近距离大面积接触,增加了信鸽间疾病传播几率,加快了腺病毒隐性携带信鸽的发病速度,使大量抵抗力低下的信鸽感染腺病毒,进而引起信鸽发病,导致放飞的信鸽迟归或不归。现将信鸽腺病毒病的流行病学、病理变化、防治措施做一简要概括,供广大信鸽养殖朋友参考借鉴,以减少信鸽腺病毒病给广大信鸽养     

VIGS载体在果树中的应用研究进展

病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物中天然存在的一种抵御外源核酸入侵的防御反应,属于转录后基因沉默现象,现在已被开发成通过改造含有目的基因片段的病毒载体来抑制植物内源基因表达的遗传技术。与传统的植物转基因技术相比,VIGS技术具有简便、高效、高通量的优势,近年来在果树基因功能的研究中发挥了重要作用。由于VIGS技术需要借助病毒载体来实现,所以选择适宜的病毒载体是在性状各异的果树中成功构建VIGS体系的关键。本文介绍了在果树中应用的VIGS载体及其在基因功能研究中的应用实例,并分析了病毒载体在诱导果树基因沉默时存在的一些问题及解决方法。     

解淀粉芽孢杆菌GB58对水稻纹枯病的防效及菌剂载体筛选

旨在对解淀粉芽孢杆菌GB58在水稻纹枯病上的盆栽防治效果和最佳菌剂载体进行研究，明确其应用前景。采用盆栽试验测定GB58对水稻纹枯病的病斑高率和在水稻上的定殖能力，测定GB58在菌剂固定载体的吸附能力和吸附稳定性。盆栽试验结果表明，GB58在水稻病株上有良好的定殖效果，定殖数最大达到2.22×10⁷ cfu/g。与喷施井冈霉素处理相比，GB58对水稻纹枯病的防效在病害发生后20、40天分别显著提高了20%、24%。GB58在固体菌剂吸附载体的研究表明：结合菌体吸附量、存活率和抑菌活性进行分析，有机载体吸附效果好于无机载体；同时综合考虑应用价值，选择玉米粉、有机肥为菌剂吸附载体较好。GB58对水稻纹枯病具有较好的生防效果。采用玉米粉和有机肥作为固体菌剂吸附载体，具有经济、高效的特点，有较大的应用价值与开发潜力。     

表达鸡α干扰素重组酿酒酵母菌的构建与鉴定

通过构建鸡α干扰素真核表达载体,以获得能够表达鸡α干扰素的酵母工程菌株。首先根据GenBank公布的鸡α干扰素基因序列设计上、下游引物,以略阳乌鸡基因组DNA为模板,PCR扩增鸡α干扰素基因片段。然后,利用基因重组技术将鸡α-干扰素基因插入真核表达载体,通过菌落PCR和DNA测序确定目标载体,构建成功后转化至酿酒酵母AH109,再通过营养缺陷培养、质粒提取和PCR鉴定带JMB440-ChIFN-α载体的重组酵母菌株。最终通过酵母培养、总蛋白收集、SDS-PAGE电泳和Western blot等,确定鸡α干扰素基因能够与酵母菌株重组,并表达α干扰素,蛋白条带大小约为23ku,与预期结果一致,表明成功构建了表达鸡干扰素基因的工程酵母菌株。     

Effect Comparison of Adenovirus Vector Transfer into Different Buffalo Cells

Buffalo mammary epithelial cell,cumulus cell and fibroblasts were transfected by adenovirus vectors and compared their transfection efficiency.293 cells were transfected with pBHGloxdelE13cre and pDC316-eGFP by liposome,the virus was collected and titer was detected.Buffalo mammary epithelial cell,cumulus cell and fibroblasts were exposed to different multiplicity of infection (MOI) of adenovirus vectors.After 72 h,the cells were observed with inverted fluorescence microscope,and transfection efficiency was calculated.When the MOI was 25,50,100,200 and 400,the transfection efficiency of fibroblasts were 0.7%,7.0%,9.0%,12.5% and 34.0%,the transfection efficiency of cumulus cells were 42.5%,55.3%,57.4%,76.0% and 80.0%,the transfection efficiency of mammary epithelial cells were 88.7%,100%,100%,100% and 100%.The results showed that the transfection efficiency of mammary epithelial cell was the best,followed by cumulus cell,and fibroblast was poor.