光皮桦LFY同源基因的克隆及表达分析

以珍贵用材树种光皮桦（Betula luminifera）为材料,采用同源克隆与RACE的方法,克隆获得LFY同源基因,命名为BlLFY（GenBank号：KP970616）。BlLFY基因cDNA全长1 305 bp,开放阅读框（ORF）长1 212 bp,编码403个氨基酸。基因结构分析显示,BlLFY基因具有2个内含子和3个外显子,与其它植物同源基因具有一致的基因结构。多序列比对和系统进化分析表明,BlLFY基因编码蛋白具有典型的N-domain和C-domain,与板栗（Castanea mollissima）及核桃（Juglans regia）等木本植物的LFY具有最高的同源性和进化关系。进一步的表达模式分析结果表明,BlLFY基因在光皮桦植株进入成年期时表达水平最高,在开花植株的营养器官和生殖器官中均有表达,且贯穿雌、雄花序发育的整个过程,但在雌花序中的表达明显高于雄花序,说明BlLFY基因可能与花期转换和花器官的发育有关,但在雌、雄花序发育过程中的调控作用可能不同。     

矮生杉木的解剖特性

为揭示杉木Cunninghamia lanceolata矮生的原因,以矮生杉木和正常杉木为材料,对其生长特性、枝条和叶片解剖结构进行了比较研究。结果表明:矮生杉木在枝条年生长量方面极显著低于正常杉木,其中矮生杉木主干、主枝年伸长量均值分别为25.54和24.59 cm,正常杉木相应均值分别为89.61和57.52 cm;在枝皮率方面,矮生杉木和正常杉木的均值分别为76.50%和37.70%,差异极显著;在管胞平均面积方面,矮生杉木（241.901 6 μm2）极显著小于正常杉木（308.894 6 μm2）,然而,矮生杉木的平均管胞密度（3 375 个·mm －2）却极显著高于正常杉木（2 456 个·mm －2）;矮生杉木的枝条单位长度的叶片数量（主干为14 片·cm －1,主枝为10 片·cm －1）极显著多于正常杉木（主干和主枝均为7片·cm －1）;但两者在栅海比（衡量植物生长势的一个指标）方面无明显差异。图2表3参13     

矮生杉木的解剖特性

为揭示杉木Cunninghamia lanceolata矮生的原因,以矮生杉木和正常杉木为材料,对其生长特性、枝条和叶片解剖结构进行了比较研究。结果表明：矮生杉木在枝条年生长量方面极显著低于正常杉木,其中矮生杉木主干、主枝年伸长量均值分别为25．54和24．59cm．正常杉木相应均值分别为89．61和57．52cm;在枝皮率方面．矮生杉木和正常杉木的均值分别为76．50％和37．70％,差异极显著;在管胞平均面积方面,矮生杉木（241．9016μm^2）极显著小于正常杉木（308．8946μm^2）。然而,矮生杉木的平均管胞密度（3375个·mm^-2）却极显著高于正常杉木（2456个·mm^-2）;矮生杉木的枝条单位长度的叶片数量（主干为14片．cm^-1,主枝为10片．cm^-2）极显著多于正常杉木（主干和主枝均为7片·cm^-1）;但两者在栅海比（衡量植物生长势的一个指标）方面无明显差异。图2表3参13     

光叶石楠组培快速繁殖

以光叶石楠Photinia glabra 当年生枝的茎段为材料, 进行植物生长调节物质对光叶石楠腋芽诱导、增殖、分化、生长及生根的对比试验。结果表明:MS +0.5 mgL-1BA +1.0 mgL-1KT +0.1 mgL-1NAA 为腋芽诱导的最适培养基, 腋芽诱导率达93.3 %;MS +1.0mgL-1BA +0.1 mgL-1NAA 为芽增殖最适培养基。1/2 MS +0.1 mgL-1 IBA 和1/2 MS +0.1 mgL-1NAA 为光叶石楠试管苗生根较为合适的培养基, 生根率分别为83.3 %和93.0 %, 试管苗移栽成活率达90 %以上。表3 参5     

花叶络石的组织培养

通过对植物生长调节物质种类、质量浓度及配比对花叶络石Trachelospermum jasminoides `Variegatum' 茎段和腋芽诱导、增殖、腋芽增殖、最佳继代时间和生根的影响进行探讨, 旨在建立花叶络石组织培养的再生体系, 为其产业化生产提供技术平台。结果表明:花叶络石较理想的腋芽诱导培养基为MS +BA 3.0 mgL-1 +NAA 0.1 mgL-1 , 其诱导率为88 %;最佳的腋芽增殖培养基为MS +BA1.5 mgL-1 +NAA 0.1mgL-1 , 增殖系数为6 , 继代周期以25 d 为佳, 最佳的生根培养基为1/2MS 或1/2 MS +BA 0.1 mgL-1 +NAA 0.1 mgL-1 , 生根率均达到90 %以上。表4 参6     

百山祖冷杉SSR体系的建立及人工辅助授粉子代的初步鉴定

应用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法提取百山祖冷杉Abies beshanzuensis叶片DNA,建立百山祖冷杉简单重复序列（SSR）反应体系。在体系建立过程中,采用单因素法分别对影响聚合酶链反应（PCR）的因素进行分析。结果表明：在20.00 μL反应体系中,模板DNA用量、镁离子（Mg²⁺）浓度、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸（dNTPs）浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量分别是60 ng,3.75 mmol·L^－1,0.15 mmol·L^－1,0.40 μmol·L^－1,16.67 nkat（1.0 U）时结果最好。随机挑取其中1对引物扩增的多态性片段进行克隆测序,序列经比对后得到的一致性值达到94%,表明其他杉科植物的SSR引物可以在百山祖冷杉中应用。通过引物筛选,得到15对引物可在百山祖冷杉中扩增得到多态性条带,其中4对引物扩增得到的部分片段在百山祖冷杉和日本冷杉Abies firma间有明显区别。这些结果表明,利用SSR分子标记技术能够用于百山祖冷杉人工辅助授粉子代的初步鉴定。图7表2参16     

4种楠木AFLP反应体系优化建立

采用核酸电泳缓冲液（TNE）结合十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）提取的高质量楠木Phoebe基因组脱氧核糖核苷酸（DNA）可满足扩增片段长度多态性（AFLP）分析的要求。利用浙江楠Phoebe chekiangensis基因组DNA优化建立楠木AFLP反应体系如下:酶切反应300 ng基因组DNA,0.3 L缓冲液4,0.3 L牛血清白蛋白（100 BSA）,50 nkat EcoR,25 nkat Mse,双蒸水加至30.0 L放置37 ℃恒温箱酶切4 h,聚合酶链式反应（PCR）仪上65 ℃15 min;连接反应20.0 L酶切产物,2.5 L T4缓冲液,666.8 nkat T4 连接酶,5 pmol EcoR接头,10 pmol Mse接头,双蒸水加至25.0 L,16 ℃连接过夜（10 ~14 h）;预扩增反应2.0 L连接产物,2.0 L 10 缓冲液,31.25 nmol镁离子,16.67 nkat TaqDNA聚合酶,4 pmol脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）,预扩增引物（E＋A,M＋C）各6 pmol,双蒸水加至20.0 L;选扩增反应稀释40倍的预扩产物2.0 L,2.0 L 10缓冲液,31.25 nmol镁离子,4 pmol dNTP,16.67 nkat TaqDNA聚合酶,选扩增引物（M＋CNN）15 pmol,选扩增引物（E+ANN）12 pmol,双蒸水加至20.0 L。利用上面体系在64对选扩引物中筛出13对适于浙江楠AFLP分析的最佳引物组合。图5表3参24     

乳白石蒜17份种质资源的RAPD分析

为分析不同种源乳白石蒜材料的亲缘关系,利用RAPD标记对乳白石蒜的17份样品的遗传多样性进行了分析。结果表明:从200个随机引物中筛选出33个多态性较高的引物,扩增出623条DNA带,其中527条为多态带,占84.6%,平均每个引物扩增的DNA带数为18.88条。根据RAPD扩增结果,将乳白石蒜各样品进行聚类,在阈值为0.352时划分为3类。分子聚类结果与原产地和花形态特征具有一定的联系。     

甘薯维生素C和胡萝卜素含量的基因型、环境及基因型与环境互作效应的分析

 为探明甘薯维生素C和胡萝卜素含量的基因型与环境效应 ,精选 11个有代表性的甘薯品种 (系 ) ,分别在 5个产地进行多品种多试点有重复的品质稳定性研究。结果表明 ,在随机效应中 ,甘薯维生素C的试点效应最为明显 ,而胡萝卜素则以基因型与试点互作效应最为明显。这表明需针对甘薯不同品质特点筛选和确定不同品种所适宜种植的地区 ,或不同地区所适宜种植的品种 ,以实现优质品种优质生产目的。     

矮化杉木蛋白质组的差异凝胶电泳分析

建立具有高分辨率和稳定性的矮化杉木Cunninghamia lanceolata叶片蛋白质的双向电泳图谱,研究杉木矮化突变的机理。取同一生长环境下的野生型杉木及矮化突变型杉木新梢顶端的叶片,液氮研磨成粉末后用改良TCA-丙酮沉淀法提取总蛋白,分别用CY2和CY3标记,用DIGE技术进行分析。与野生型杉木相比,在矮化突变型杉木的叶片组织中,有14个蛋白质表达水平显著增加,另外15个蛋白质表达水平显著下降。所得的29个差异蛋白质可能与杉木矮化突变的发生有关。图3表3参9