堆型艾美耳球虫早熟株和母株对8种抗球虫药的敏感试验

[目的]探讨堆型艾美耳球虫早熟株和母株对常用抗球虫药的敏感性。[方法]选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西8种抗球虫药,进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（POAA）、病变记分减少率（RLS）、相对卵囊产量（ROP）和抗球虫指数（ACI）4项指标进行综合评定。[结果]堆型艾美耳球虫早熟株和母株均对地克珠利、氯苯胍、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感,对盐霉素轻度敏感,对二硝托胺不敏感。[结论]遗传背景相同的虫株,其药物敏感性也相同。     

健康养殖中的设施标准研究进展

为完善标准体系,指导全国养殖设施标准制修订工作,实现技术创新与标准化的结合,以满足中国渔业可持续发展的需要,通过调研,收集国内外相关资料,梳理现行与水产健康养殖有关的标准,并分类组织研讨,按照中华人民共和国标准化工作导则《标准体系表编制原则和要求》和《综合标准化工作指南》建立养殖设施标准体系,回顾了健康养殖的发展过程,简要介绍了健康养殖中设施标准的现状,指出了今后发展方向。     

柔嫩艾美耳球虫表面抗原（EtSAG）基因的分离及鉴定

利用本实验室前期获得的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）孢子化卵囊和未孢子化卵囊差异表达ESTs序列,选取编号为BW4-C03的孢子化卵囊,采用RACE技术,获得该基因全长序列。经BLAST分析,该序列与柔嫩艾美耳球虫表面抗原有72%以上的同源性,命名为EtSAG。利用荧光定量PCR（Real-time PCR）检测发现该基因在孢子化卵囊的转录拷贝数最高,且随着孢子化时间的延长,转录拷贝数逐渐增加。采用原核表达载体pET-28C表达该基因,得到的融合蛋白大小约为36 kDa,符合预期大小。经Western blot分析,该重组蛋白可被兔抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。本研究结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。     

上海市市售青蛙寄生蠕虫感染情况初步调查

为了解上海市市售青蛙蠕虫的感染情况,对52只黑斑蛙(Rana nigromaculata)进行剖检,按脏器检查、收集寄生虫虫体,统计寄生虫的感染率与感染强度。结果显示,青蛙蠕虫感染率为90.38%,平均感染强度为20.21条。不同种类寄生虫的感染情况明显不同,线虫、吸虫、绦虫和棘头虫的感染率分别为50.00%、86.54%、17.31%和51.92%,感染强度分别为3.38、15.00、5.11和5.22条。不同脏器寄生虫的感染情况不同,肠道的寄生虫感染率最高,为90.38%;肠道、肌肉与皮下寄生虫的感染强度分别为15.34和11.38条,明显高于其他器官。不同种类寄生虫的寄生虫部位明显不同,线虫、吸虫和棘头虫主要来源于肠道,绦虫主要来源于肌肉与皮下。通过对检出虫体的形态进行初步观察,吸虫、线虫、绦虫和棘头虫种类分别约有6、3、1和2种,但具体种类尚需进一步鉴定。本调查结果为掌握上海市市售青蛙寄生虫感染状况和做好寄生虫病防控提供了基础数据。     

上海市市售蟾蜍寄生蠕虫感染情况初步调查

为了解上海市市售蟾蜍寄生蠕虫的感染情况,对60只中华大蟾蜍进行剖检,按脏器检查、收集寄生虫虫体,统计寄生虫的感染率与感染强度。结果显示,蟾蜍寄生虫感染率为100%,平均感染强度为28.23条。不同种类寄生虫的感染情况明显不同,线虫、吸虫、绦虫和棘头虫的感染率分别为93.33%、73.33%、8.33%和15.00%,感染强度分别为17.52、14.48、10.40和2.67条。不同脏器寄生虫的感染情况不同,肠道和肺脏的寄生虫感染率最高,分别为100%和88.33%;肠道、肺脏、肌肉寄生虫的感染强度分别为15.63、12.28和11.33条,明显高于其他器官。不同种类寄生虫的寄生虫部位明显不同,线虫主要来源于肺部和肠道,吸虫和棘头虫主要来源于肠道,绦虫主要来源于肌肉。通过对检出虫体的形态进行初步观察,吸虫、线虫、绦虫和棘头虫种类分别约有3、4、1和1种,但具体种类尚需进一步鉴定。本调查结果为掌握上海市市售蟾蜍寄生虫感染状况和做好寄生虫病防控提供了基础数据。     

柔嫩艾美耳球虫A08基因的阶段表达分析与毕赤酵母表达系统构建

对A08蛋白基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)的转录情况进行分析,同时以A08蛋白cDNA为模板扩增出1 083 bp的目的基因片段,将该基因连接到pGEM-T-easy载体上,经序列测定和双酶切鉴定表明为A08基因.用EcoRI和NotI酶切回收目的片段连接至用同样酶切的真核表达载体pPIC9k上,构建了重组质粒pPIC9k-A08,转化大肠杆菌TOP10后,提取质粒,经酶切鉴定正确后用SacI将重组质粒线性化,再电转入毕赤酵母GS115菌株,G418筛选抗性重组子,经PCR鉴定正确重组子后做甲醇诱导表达.RT-PCR结果显示该基因在子孢子阶段的转录拷贝数显著高于其他发育阶段,是一个子孢子高表达基因.重组酵母诱导表达产物经SDS-PAGE检测证实,柔嫩艾美耳球虫A08基因在毕赤酵母中获得表达.Western-blot初步分析表明,表达产物具有免疫学反应活性.     

一种柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白单抗的制备及初步应用

利用原核表达的柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白（EtRP）的重组蛋白免疫BALB／c小鼠，经4次免疫后取脾脏制备免疫脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，经间接ELISA和Western blot筛选获得一株抗EtRP蛋白的特异性单克隆抗体细胞株，命名为2E3，亚类鉴定为IgG2a。细胞上清和小鼠腹水的效价分别为1：40和1：2．56×10^4。利用该单抗对EtRP在柔嫩艾关耳球虫子孢子中的分布进行分子定位，结果显示该蛋白主要分布于子孢子的顶端；而当子孢子在DMEM培养基中41℃孵育1h后，该蛋白则分布于整个虫体。研究结果表明，成功制备了EtRP单克隆抗体，为进一步研究球虫相关蛋白功能奠定了基础。     

奶牛球虫流行病学调查研究

自半开发式分隔栏引入养牛业后,球虫病便成为养牛业最严重的疾病之一。本文对内蒙古、上海三个奶牛场球虫病流行情况进行了调查研究。结果表明,该3个牛场优势流行种均为牛艾美尔球虫、椭圆艾美尔球虫和邱氏艾美尔球虫。此3个牛场奶牛一般从4~5周龄开始感染球虫,感染率随周龄增加而增大,上海2牛场在第14周龄感染率达最高,以后随之减少,内蒙古1牛场在第14周龄感染率达最高,以后随之减少。据此,再结合不同环境和饲养管理条件,可以确定不同牛场的最佳治疗时机。     

上海市郊家鸭球虫感染情况调查研究

为了解上海市郊家鸭球虫感染状况,于2008年9～10月,从上海市郊10个鸭场采集了457份粪样,采用饱和盐水漂浮法检查球虫卵囊,并将球虫卵囊置于2.5%重铬酸钾溶液中培养至孢子化,根据形态与结构进行种类鉴定.结果发现,10个鸭场的球虫阳性率为100%,总感染率为61%(278/457).按不同月龄统计,3月龄以内感染率为100%,6,3～6月龄感染率为82%,6～9月龄感染率为70%,9～12月龄感染率为47%,12月龄以上感染率为54%.每克粪便卵囊数(OPG)为300～112 200,平均OPG为4 841.3月龄以内鸭的球虫感染强度最高,平均OPG为37 015.观测了100个孢子化卵囊,鉴定出艾美耳科球虫3属10种,其中艾美耳属(Eimeria)5种(占36%)、温扬属4种(占52%),等孢属1种(占12%).调查表明,上海市郊鸭群普遍感染球虫,3月龄以内鸭的感染率和感染强度最高,是鸭球虫病预防控制的重点;鉴定出的10种球虫中,未检出致病性强的毁灭泰泽球虫(Tyzzeria perniciosa).     

柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导

为了研究耐药性柔嫩艾美耳球虫产生耐药性的机理,本研究在实验室条件下,采用药物浓度递增的方法,以15 mg/kg为起始诱导浓度,对柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药性进行诱导。经过10次传代,获得了对60 mg/kg盐霉素耐药的柔嫩艾美耳球虫虫株。以抗球虫指数、最适抗球虫活性百分率、病变记分减少率和相对卵囊产量四项指标综合判定柔嫩艾美耳球虫对盐霉素的耐药性。其中抗球虫指数为156.92,最适抗球虫活性百分率为32.38,病变记分减少率为53.85,相对卵囊产量为28.17。结果显示,成功获得了柔嫩艾美耳球虫对盐霉素完全耐药的虫株,为进一步从分子水平研究球虫抗药性奠定基础。