长春花4种提取物肝癌细胞毒活性的研究

用溶剂萃取法对长春花地上部分的95%乙醇提取物进行分段处理,以肝癌细胞系SMMC-7721为筛选模型,利用MTT法测定各提取物的体外肿瘤细胞毒活性,对长春花的肝癌细胞毒活性部位进行了筛选。结果表明:长春花乙醇总提取物和正丁醇提取物对体外肝癌细胞表现出较强的抑制活性,石油醚提取物﹑乙酸乙酯提取物和水提取物则没有活性。说明正丁醇提取物部分是长春花体外肝癌细胞毒活性部位。     

高良姜花和果实的挥发油化学成分

采用水蒸气蒸馏法提取高良姜花和果实的挥发油,采用GC-MS法测定其化学成分,并采用琼脂滤纸片法测定其抗菌活性.结果表明,高良姜新鲜的花和果实中的挥发油含量分别为0.003％和0.209％;花挥发油中的主要成分为Caryophyllene oxide (40.63％)和β-caryophyllene(11.14％),果实挥发油中的主要成分为α-cadinol(41.20％)和τ-cadinol(22.88％);花和果实的挥发油对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生长均有一定的抑制活性.     

磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子抑制消减文库的构建和初步分析

为了研究和探索磺胺氯吡嗪抗弓形虫的作用机理,构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫的抑制性消减文库.将刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子腹腔注射(10000个/只鼠)感染昆明系小鼠,大量收集并纯化速殖子.用250 mg/mL磺胺氯吡嗪PBS溶液和PBS分别浸泡速殖子,37℃恒温箱孵育2h,分别提取虫体的总RNA和mRNA,以PBS处理的正常虫体cDNA为驱动组,以药物处理虫体cDNA为实验组,构建药物处理前后弓形虫速殖子的抑制性消减文库,对部分阳性克隆进行测序和序列分析.结果显示,提取的虫体总RNA纯度高,合成的双链cDNA经RsaⅠ酶切反应较完全;从消减文库中随机选择100个阳性克隆进行PCR扩增,其插入片段长度在200～750 bp之间,文库的重组率达93％以上;随机挑取30个阳性克隆进行测序,获得11个单一序列,Blast分析显示有7个单一有效EST序列与已知蛋白质相似性较高.结果表明,已成功构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子的抑制性消减cDNA文库,并对部分阳性克隆进行了初步分析,为深入研究磺胺氯吡嗪的抗弓形虫机制和寻找药物作用的关键靶分子奠定了基础.     

上海市鸽球虫感染情况初步调查与种类鉴定

为了调查上海市鸽球虫的感染情况和种类,分别采集奉贤区肉鸽场和信鸽场的110份和44份粪便,以及南汇区肉鸽场的100份粪样,采用麦氏虫卵计数法对粪便球虫卵囊进行计数,收集阳性粪便中的卵囊,经孢子化后进行种类鉴定。结果显示,上海市鸽球虫的平均感染率为52.8%(134/254),平均每克粪便卵囊数(oocyst per gram,OPG)为50 159个,为中度感染。肉鸽感染率(55.2%)和平均OPG(52 110个)均高于信鸽(40.9%和37 583个),奉贤肉鸽感染率(60.9%)高于南汇(49.0%),但南汇肉鸽的OPG(88 634个)明显高于奉贤(25 400个)。从肉鸽阳性粪便中鉴定出5种球虫,即拉氏艾美耳球虫(Eimerialabbeana)、鸽艾美耳球虫(E.columbae)、原鸽艾美耳球虫(E.columbarum)、杜氏艾美耳球虫(E.duculai)以及卡氏艾美耳球虫(E.kapotei),拉氏艾美耳球虫为优势种。在信鸽阳性粪便中鉴定出4种球虫,即拉氏艾美耳球虫、杜氏艾美耳球虫、鸽艾美耳球虫以及原鸽艾美耳球虫,原鸽艾美耳球虫为优势种。本次调查表明上海市肉鸽和信鸽的球虫感染率和粪便OPG均偏高,调查结果为及时做好鸽球虫病的防治提供了基础数据。     

几种药物抗小鼠弓形虫感染的初步效果

为寻找有效的抗弓形虫药物,选择了临床上使用较多的6种药物进行抗小鼠弓形虫感染初步实验。用刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）长宁株（CN株）速殖子,按1×104/鼠腹腔接种昆明系雄性小白鼠,接种后4 h用药组通过灌服或饮水用药,每鼠剂量分别为阿奇霉素（Azithromycin）150、120、90 mg/（kg·d）,泰妙菌素（Tiamulin）100 mg/（kg·d）,克拉霉素（Clarithromycin）15 mg/（kg·d）,磺胺氯吡嗪钠（Sulfachloropyrazine sodium）150、120、90 mg/（kg·d）,甲硝唑（Metronidazole）150 mg/（kg·d）,甲氧苄胺嘧啶（Trimethoprim）10 mg/（kg·d）,连续用药5~6 d,接种后10 d结束实验。结果阿奇霉素、磺胺氯吡嗪钠组的平均存活天数明显高于感染不用药组（P〈0.05）,泰妙菌素、克拉霉素、甲硝唑、甲氧苄胺嘧啶组在所用剂量下的存活天数与感染不用药组无明显差异（P〉0.05）;用药后4－7 d,取腹腔液镜检速殖子,与感染不用药组相比,阿奇霉素组减少70%以上,磺胺氯吡嗪钠组减少99%以上。研究结果提示,磺胺氯吡嗪钠具有良好的抗弓形虫效果,其推荐剂量与用药疗程还有待进一步研究。     

枸骨的化学成分和药理活性研究进展

[目的]概述从枸骨（Ilex cornuta Lindl.et Paxt.）中分离得到的化学成分及其药理作用研究进展,并探讨了今后研究的主要方向。[方法]搜集整理现有的有关枸骨化学成分和药理作用的研究结果。[结果]文献报道,从枸骨中共分离得到40个化合物,主要为三萜皂苷及其苷元、黄酮及其苷类、多酚类及其衍生物、脂肪酸类和其他类（包括链状倍半萜tanacetene、胡萝卜苷和苦丁茶糖脂素甲、乙等）,其中,三萜皂苷及其苷元18个,黄酮及其苷类5个,多酚类及衍生物5个,脂肪酸类7个,其他类6个。枸骨提取物的药理活性主要有降血脂、抗菌和抗生育等作用。其中,单体化合物熊果酸具有镇静、消炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖,提高免疫作用、抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用等多种生物效应;槲皮素和金丝桃苷具有较强的镇痛、增强脑组织血流量和抗脑缺血性损伤等活性;枸骨苷4对脑垂体后叶素诱发的大鼠心肌缺血有一定的保护作用,可显著降低心肌收缩力;腺苷对冠脉血流有增加作用,3,4-二咖啡酰鸡纳酸对前列腺环素（PGI2）的释放有较显著促进作用。[结论]该研究可以为更好地开发和利用枸骨资源提供参考。     

GC-MS分析4种奇楠沉香中致香的倍半萜和2-(2-苯乙基)色酮类成分

采用乙醚浸提法提取了4种奇楠沉香样品(海南产白奇楠、海南产紫奇楠、海南产绿奇楠和越南产绿奇楠),4个样品的得率分别为:20.3%、27.6%、48.0%、40.2%。应用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析测定4个样品乙醚提取物的化学成分及相对含量,从4种奇楠沉香中共鉴定了37个化合物,其中倍半萜类化合物共20个,据报道有香味描述的有7个;2-(2-苯乙基)色酮类化合物11个,在海南产白奇楠、海南产紫奇楠、海南产绿奇楠和越南产绿奇楠乙醚提取物中相对含量分别达到74.55%、95.59%、93.90%、89.57%,其中,化合物2-(2-苯乙基)色酮和化合物2-[2-(4-甲氧基苯)乙基]色酮在这4种奇楠中相对含量之和分别达到了66.47%、82.09%、84.71%、71.98%。结果表明,奇楠沉香乙醚提取物中含少量的多种骨架类型的芳香倍半萜,富含2-(2-苯乙基)色酮类化合物,特别是化合物2-(2-苯乙基)色酮与2-[2-(4-甲氧基苯)乙基]色酮。     

柔嫩艾美耳球虫子孢子高表达新基因的克隆、表达及分析

为克隆和研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)新基因,本研究在所获得的ESTs序列的基础上,应用RACE技术克隆获得了1个在子孢子阶段高表达新基因的全长cDNA序列(GU553107),命名为ZB7-C11,该基因全长1439bp,ORF为525bp,编码174个氨基酸,预测表达蛋白的分子量约为18.7ku。Real-timePCR对E.tenella不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)表达量进行分析显示,该基因在子孢子阶段的表达高于其它阶段。另外,将ZB7-C11克隆于pGEX-4T中构建重组质粒pGEX-4T-C11,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达6h后其表达量最高,并且重组蛋白分子量约44.7ku大部分以可溶性存在。Westernblot分析显示该重组蛋白可被抗E.tenella的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。     

柔嫩艾美耳球虫表面抗原（EtSAG）基因的分离及鉴定

利用本实验室前期获得的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）孢子化卵囊和未孢子化卵囊差异表达ESTs序列,选取编号为BW4-C03的孢子化卵囊,采用RACE技术,获得该基因全长序列。经BLAST分析,该序列与柔嫩艾美耳球虫表面抗原有72%以上的同源性,命名为EtSAG。利用荧光定量PCR（Real-time PCR）检测发现该基因在孢子化卵囊的转录拷贝数最高,且随着孢子化时间的延长,转录拷贝数逐渐增加。采用原核表达载体pET-28C表达该基因,得到的融合蛋白大小约为36 kDa,符合预期大小。经Western blot分析,该重组蛋白可被兔抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。本研究结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。     

弓形虫疫苗的研究进展与展望

<正>弓形虫病是一种重要的机会致病性人兽共患寄生虫病,它给畜牧业造成了巨大的经济损失,同时对公共卫生安全也提出了严峻的挑战。由于它具有较大危害性且至今无理想治疗药物,因此越来越多研究者关注弓形虫疫苗的研究。目前疫苗研究虽已取得了较大进展,但仍然无法完全预防和控制弓形虫病的感染和传播。如何控制牲畜感染弓形虫病带来的经济损失,如何降低人类因食用感染弓形虫病的动物制品而带来的公共卫生安全风险,