中国金鱼遗传多样性研究中AFLP反应体系的优化

探讨了AFLP(Amplified fragment length polymolphism)标记技术在中国金鱼基因组DNA提取、模板浓度、酶切时间的一些优化改进,建立了一套稳定的实验体系,在49对引物组合中筛选出6对多态标记丰富、稳定性好的引物组合,并用这些引物对中国金鱼遗传多样性进行了研究.     

铝、镉胁迫下不同大麦品种根际的铝、镉形态分析

为明确铝(Al)、镉(Cd)单独及复合胁迫下作物根际毒害元素的化学形态及其生物有效性,采用盆栽试验,以耐铝性不同的两个大麦品种(铝敏感品种浙农大9号和耐铝品种Day ten)为试验材料,利用连续提取法和ICP-AES方法分析了拔节期大麦根际的Al、Cd化学形态及其含量.结果表明,所有处理中大麦植株根际溶出Al均主要以毒性较小的酸溶无机Al和腐殖酸Al存在,根际Cd则主要以残留态形式存在.Al、Cd单独胁迫下大麦根际土壤溶液中各形态Al、Cd的溶出量均显著增加,交换态含量占可提取Al、Cd总量的比例增加.其中浙农大9号根际活性Al、Cd含量的增幅均大于Dayton.与单独Al或Cd处理相比,复合胁迫下根际交换态Al和Cd含量增加,其他形态含量下降或变幅不大.     

三角帆蚌dPGAM基因的克隆与表达分析

为探究贝类磷酸甘油酸变位酶(PGAM)基因的功能,以紫色和黄色家系三角帆蚌为试验材料,采用RACE-PCR法克隆得到三角帆蚌1个辅因子依赖型磷酸甘油酸变位酶基因(dPGAM)的cDNA序列,命名为HcdPGAM,并对其进行生物信息学和表达特性分析。结果表明,HcdPGAM基因包含1个750 bp的开放阅读框,编码1个含250个氨基酸的假定蛋白,并含有1个保守的组氨酸磷酸酶结构域;HcdPGAM与其他动物PGAM的氨基酸序列均具有较高的相似性(58.8%82.0%)。实时荧光定量PCR分析显示,HcdPGAM在所检测的紫色蚌和黄色蚌的鳃、外套膜、闭壳肌、消化腺、性腺组织和血淋巴细胞6种组织中均有表达,其中在闭壳肌中的表达量相对较高,且紫色系蚌闭壳肌中的表达水平显著高于黄色系,表明该基因与三角帆蚌的能量代谢与生长发育有关,是贝类分子辅助育种的一种潜在的标记;嗜水气单胞菌诱导可极显著上调HcdPGAM基因的表达水平(24 h和48 h),表明HcdPGAM基因在贝类抗细菌感染的免疫反应相关能量代谢过程中也发挥着重要作用。本研究结果为明确贝类PGAM的功能和筛选三角帆蚌不同颜色家系间的特异性分子标记提供了一定的理论依据。     

水稻根系生长素抗性突变体的筛选及表型鉴定

以经60Co-γ辐射诱变的水稻黄华占突变体库为材料,利用生长素类似物2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)处理对初生根伸长的抑制作用为筛选依据,初筛获得188个候选突变体株系。经二次筛选鉴定,最后成功筛选到4个根系生长素抗性突变体,分别被命名为Osarr1-1(水稻生长素抗性根1-1,Oryza sativa auxin resistant root 1-1)、Osarr2-1、Osarr3-1和Osarr3-2,其中Osarr3-2是从Osarr3-1中分离出来的白化苗。结果表明:在无2,4-D的情况下,Osarr3-1不定根数目明显高于野生型,其余突变体不定根数目与野生型相似;除Osarr1-1不定根伸长小于野生型外,其余突变体不定根伸长与野生型相似;Osarr3-1侧根数目大于野生型,而Osarr3-2的侧根数目小于野生型,其余突变体侧根数目与野生型相似;Osarr1-1和Osarr3-2的侧根伸长小于野生型,其余突变体的侧根伸长与野生型相似。在2,4-D存在的情况下,Osarr1-1、Osarr2-1、Osarr3-1和Osarr3-2的不定根数目和伸长均高于野生型;除Osarr3-2的侧根数目与野生型相似外,其余突变体侧根数目均高于野生型,并且所有突变体的侧根伸长均高于野生型。以上研究结果表明,筛选获得的突变体根系包括初生根、侧根和不定根对2,4-D处理具有较高的抗性。本研究为进一步揭示水稻根系生长发育调控机制提供了良好的遗传学研究材料。     

光合细菌对鱼病原细菌生长的影响

从发病的棒花鱼（Abbottina rivularis）和鲫鱼（Carassius auratus）分离得到7株菌,经人工感染证实其中的B3、J1和J2等3株菌均为病原细菌。B3和J1鉴定为嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）,J2鉴定为豚鼠气单胞菌（Aeromonas caviae）。采用平板扩散法测定了光合细菌嗜酸红假单胞菌Y7（Rhodopseudomonas acidophila Y7）、球形红假单胞菌X3（R．spheroids X3）和桃红荚硫菌S（Tniocapsa roseopersicina S）对病原细菌B3和J2生长的影响。结果表明：在营养琼脂平板上3种光合细菌对两种病原细菌（B3和J2）无明显拮抗作用,但光合细菌能覆盖在病原细菌上生长;3种光合细菌对病原细菌生长有明显的抑制作用,其中球形红假单胞菌X3抑制作用最大,但X3代谢产物对病原细菌生长无明显抑制作用,说明X3对病原细菌的抑制作用来自菌体细胞。X3还能明显抑制水体中的病原菌B3和J2的生长。     

铈对三角帆蚌肝脏抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响

在实验室模拟条件下,研究了不同浓度Ce(NO3)3,对三角帆蚌肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(ICAT)的活性及丙二醛(MDA)含量的变化.实验结果表明各Ce(NO3)3,浓度处理均对肝脏抗氧化酶SOD、CAT活性及MDA含量产生显著影响:1、2.5 mg/L Ce(NO3)3,处理组,随时间延长对三角帆蚌肝脏抗氧化酶SOD、CAT活性影响均表现为先升高后恢复到对照组水平的过程;5、10、20 mg/L Ce(NO3)3处理组,随时间延长对肝脏抗氧化酶SOD、CAT活性影响表现为先升高后显著抑制的过程.MDA含量在Ce(NO3)3,浓度为1、2.5 mg/L时,与对照组相比显著降低,其它组的MDA含量则随着Ce(NO3)3,浓度增加而显著升高.在实际应用稀土元素Ce时,Ce(NO3)3浓度宜控制在2.5 mg/L以下.     

地衣芽孢杆菌对三角帆蚌消化酶活性、免疫指标和抗氧化指标的影响

本研究旨在探明地衣芽孢杆菌对三角帆蚌消化酶活性、免疫指标和抗氧化指标的影响.选取二龄三角帆蚌144只,随机分成4组,按终浓度分别为0(对照)、0.5×106、1.0×106、2.0×106 cfu/mL添加芽孢杆菌菌液,每组设3个平行,每个平行12只蚌,养殖30 d.结果表明:与对照组相比,各试验组增重率显著升高(P<0.05),其中以1.0×106cfu/mL组增重率最高,且显著高于0.5×106和2.0×106cfu/mL组(P<0.05).15 d时1.0×106 cfu/mL组淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性显著升高(P<0.05),30 d脂肪酶和蛋白酶活性恢复到对照组水平.各试验组溶菌酶活性均显著升高(P<0.05),0.5×106、1.0×106cfu/mL组酚氧化酶活性显著升高(P<0.05).随着芽孢杆菌水平的增加,酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性呈上升趋势,15 d时1.0×106、2.0×106 cfu/mL组酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性均显著升高(P<0.05),30 d时恢复到对照组水平.总抗氧化力和超氧化物歧化酶活性显著增加,但0.5×106cfu/mL,组15 d时除外,且1.0×106cfu/mL组与2.0×106cfu/mL组差异不显著(P>0.05).添加1.0×106cfu/mL芽孢杆菌15 d时过氧化氢酶活性显著提高(P<0.05),30 d时恢复到对照组水平.添加芽孢杆菌不影响血清丙二醛的含量(P>0.05).由此得出,水体中添加地衣芽孢杆菌可提高三角帆蚌消化酶、免疫指标和抗氧化指标活性,促进蚌体生长;最适添加水平和间隔时间分别为1.0×106cfu/mL和15 d.     

LAS、Cd~(2+)污染对鲫鱼鳃、肝脏SOD、Na~+-K~+-ATPase活性的影响

以鲫鱼为实验对象,采用不同质量浓度的LAS和Cd2+进行暴露实验,研究亚急性条件下,LAS、Cd2+及其复合污染对鲫鱼鳃、肝脏SOD、Na+-K+-ATPase活性的影响.结果表明:在单一LAS、Cd2+处理条件下,随LAS、Cd2+质量浓度增加,鲫鱼鳃、肝脏的SOD、Na+-K+-ATPase活性与对照组相比均呈浓度-效应关系;复合处理下,污染物质量浓度的不同组合对鲫鱼鳃、肝脏的SOD、Na+-K+-ATPase活性影响不同,其中当Cd2+质量浓度为0.4mg.L-1时,肝脏的SOD、Na+-K+-ATPase活性均随LAS质量浓度的增加而降低,各复合组的SOD、Na+-K+-ATPase活性均显著低于相应质量浓度的单一Cd2+处理组(P<0.05);2.0 mg.L-1Cd2+与5.0 mg.L-1LAS复合组鲫鱼鳃SOD、Na+-K+-ATPase活性、肝脏SOD活性显著低于相应质量浓度的单一Cd2+、LAS处理组(P<0.05).在一定质量浓度的组合下,LAS与Cd2+复合污染在SOD、Na+-K+-ATPase水平上表现为一定的协同作用.     

一株多重耐药中华鳖源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定

从患典型鳃腺炎病中华鳖（Pelodiscus sinensis）肝脏和腹水处进行细菌接种,分离获得一株细菌。综合菌落形态,16 S rRNA 序列进化分析和 API 细菌生化鉴定系统判定,所得菌株为弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）（SX43）。动物回归实验显示,分离株对小鼠的半数致死量（LD50）为106．5 CFU,显示该菌株具有较强的致病性,可从实验幼鳖体内再次分离到相同的病原菌。常用药物的抗菌敏感性测定显示,菌株 SX43对头孢哌酮、头孢曲松、头孢呋辛、复方新诺明、氯霉素高度敏感。     

一株蛭弧菌的分离、纯化与PCR鉴定

以弧菌为宿主菌,从南美白对虾养殖池水中分离纯化到一株蛭弧菌,根据噬菌蛭弧菌hit基因序列设计引物并进行PCR扩增,得到了近710bp的扩增产物,经测序比对鉴定,该产物与噬菌蛭弧菌的hit基因100%同源,表明该菌为噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)。