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嗜水气单胞菌外膜蛋白(OMP)的原核表达及其对BALB/c小鼠的免疫保护研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为确定嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)AS1.927株外膜蛋白(OMP)的原核表达产物是否具有抗原性及其对小鼠的免疫保护力.本研究根据GenBank上嗜水气单胞菌外膜蛋白ompA基因序列(GenBank登录号:AF146597)设计1对引物,克隆出ompA全长基因1020 bp(GenBank登录号:EU309491),经Sal Ⅰ和Xhol Ⅰ双酶切后连接pET-30a(+),转化大肠杆菌(Escherichia cDli)BL21,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE及Westernblot分析鉴定.结果显示重组基因工程菌E.coli[pET-30a-ompA]表达的融合蛋白分子量约为40.7kD,可以被鼠抗嗜水气单胞菌外膜蛋白抗血清识别.将重组基因工程菌Ecoli[pET-30a-om-pA]口服免疫BALB/c小鼠(Mus mussulus);末次免疫1周后用放射免疫分析小鼠肠粘膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平,检测结果揭示,该重组基因工程菌能提高sIgA的分泌(P<0.05);同时在小鼠血清中测出特异性抗体IgG(P<0.05).末次免疫2周后用100 LD50的Ah AS1.927(3.3×105> cfu/mL)腹腔注射攻击小鼠,口服重组菌对小鼠的相对免疫保护力(relative percent survival,RPS)为75%,表明重组基因工程菌可诱导小鼠对AhAS1.927产生一定的免疫保护作用. 相似文献
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选择绍兴地区不同方位的4个乡镇(东浦镇、福全镇、马山镇、鉴湖镇)作为监测点,分析了农村生活污水对河道水质的影响.在采样点直接进行pH、透明度、ORP、TDS和溶解氧等测量,将采集的水样在实验室进行COD、BOD5、TN、TP、亚硝酸盐氮、硝酸盐氮、氨氮、正磷酸盐的含量测定.结果表明监测点的水体透明度为62~79cm,溶解氧1.325~3.150mg/L,TDS为112~219mg/kg,pH6.80~7.43,ORP为-0.67~15mV,硝酸盐氮为0.82~2.59mg/L,亚硝酸盐氮为0.82~2.59mg/L,氨氮为2.83~4.31mg/L,正磷酸盐为0.018~0.32mg/L,总氮为0.061~0.13mg/L,总磷为0.0225~0.0339mg/L,COD为0~63.1395mg/mL,BOD5为18.47~22.25mg/L.采用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)1∶1混合的微生态制剂处理农村污染水体,持续15d,结果表明不同浓度的微生态制剂对污染水体均有治理效果,0.15g/L菌粉组去除效果最佳. 相似文献
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嗜水气单胞菌外膜蛋白(OMP)在乳酸乳球菌中的表达及其对BALB/c小鼠的免疫保护效果 总被引:1,自引:0,他引:1
乳酸球菌(Lactococcus lactis)是一种安全级微生物,为活载体疫苗传递抗原的理想选择.嗜水气单胞菌(A eromonas hydrophila,Ah)能引起鱼类等多种动物的败血病,因其血清型众多,寻找共同保护性抗原是进行疫苗研究的重点.为探究嗜水气单胞菌AS1.927株外膜蛋白(OMP)在乳酸乳球菌中的表达和检测其表达产物对小鼠的免疫保护效果,本研究将己克隆的ompA基因经BamH Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切后连接载体pNZ8048,转化乳酸乳球菌NZ9000,nisin诱导表达,并进行SDS-PAGE分析鉴定.结果显示,重组基因工程菌L.lactis[pNZ-ompA]表达的融合蛋白分子量约为36.2 kD,成熟蛋白分子量约为33.7 kD.将重组基因工程菌L.lac tis [pNZ-ompA]口服免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),用放射免疫法检测末次免疫一周后的各组小鼠肠粘膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的水平以及用间接ELISA法检测小鼠血清特异性抗体IgG,结果发现,该重组基因工程菌能显著提高sIgA的分泌(P<0.05);同时在小鼠血清中的特异性抗体含量也显著高于对照组(P<0.05).末次免疫两周后用100 LD50的Ah AS 1.927(3.3×105 cfu/mL)腹腔注射攻击小鼠,口服重组菌对小鼠的相对免疫保护力(relative percent survival,RPS)为87.5%,表明重组基因工程菌可诱导小鼠对AhAS1.927产生一定的免疫保护作用.该结果将为开发安全有效的口服基因工程鱼用疫苗提供一定的实验基础. 相似文献
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鱼食性与肠道菌群关系的初步研究 总被引:11,自引:0,他引:11
对淡水养殖池中的乌鳢、鲢鱼、鳊鱼、鲫鱼不同食性鱼的后肠菌群进行了定性、定量分析,结果表明:四种鱼的后肠壁和后肠内容物都是厌氧菌总数远大于好氧菌总数;后肠内容物菌数远大于后肠壁菌数;不同的鱼,后肠壁的好氧菌总数差别很大,而厌氧菌总数差别不大;后肠内容物中的厌氧菌总数和好氧菌总数为:乌鳢>鲫鱼>鲢鱼>鳊鱼;而后肠壁细菌含量与食物没有明显的关系;后肠内容物和后肠壁中的双歧杆菌数为:乌鳢>鲫鱼>鲢鱼>鳊鱼。表明后肠内容物中的细菌总数、后肠内容物和后肠壁中的双歧杆菌数都与食性相关。大肠杆菌、肠球菌和乳酸菌在后肠的分布没有规律,说明它们与食物相关性不强。 相似文献
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地衣芽孢杆菌对三角帆蚌消化酶活性、免疫指标和抗氧化指标的影响 总被引:5,自引:2,他引:5
本研究旨在探明地衣芽孢杆菌对三角帆蚌消化酶活性、免疫指标和抗氧化指标的影响.选取二龄三角帆蚌144只,随机分成4组,按终浓度分别为0(对照)、0.5×106、1.0×106、2.0×106 cfu/mL添加芽孢杆菌菌液,每组设3个平行,每个平行12只蚌,养殖30 d.结果表明:与对照组相比,各试验组增重率显著升高(P<0.05),其中以1.0×106cfu/mL组增重率最高,且显著高于0.5×106和2.0×106cfu/mL组(P<0.05).15 d时1.0×106 cfu/mL组淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶活性显著升高(P<0.05),30 d脂肪酶和蛋白酶活性恢复到对照组水平.各试验组溶菌酶活性均显著升高(P<0.05),0.5×106、1.0×106cfu/mL组酚氧化酶活性显著升高(P<0.05).随着芽孢杆菌水平的增加,酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性呈上升趋势,15 d时1.0×106、2.0×106 cfu/mL组酸性磷酸酶和碱性磷酸酶活性均显著升高(P<0.05),30 d时恢复到对照组水平.总抗氧化力和超氧化物歧化酶活性显著增加,但0.5×106cfu/mL,组15 d时除外,且1.0×106cfu/mL组与2.0×106cfu/mL组差异不显著(P>0.05).添加1.0×106cfu/mL芽孢杆菌15 d时过氧化氢酶活性显著提高(P<0.05),30 d时恢复到对照组水平.添加芽孢杆菌不影响血清丙二醛的含量(P>0.05).由此得出,水体中添加地衣芽孢杆菌可提高三角帆蚌消化酶、免疫指标和抗氧化指标活性,促进蚌体生长;最适添加水平和间隔时间分别为1.0×106cfu/mL和15 d. 相似文献