脂肪酸合成酶基因在皮下脂肪中表达及其与血清Leptin的关系

动物的体脂沉积所需要的脂肪酸大多是来自脂肪酸的全程合成,即由脂肪酸合成酶(FAS)催化乙酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶A合成甘油三脂(TAG)(Simith et al.,2003)。FAS表达水平的升高显著增加甘油三脂在体内的沉积而导致肥胖(Semenkovich,1997)。leptin是ob基因表达产物,是一种能调节     

Cloning of Heart-type Fatty Acid-binding Protein (H-FABP ) Gene of Swine and Difference of Its Expression at Different Stages

从1, 30, 50, 70和90 kg左右的杜长大猪肌肉组织中提取基因组RNA，用RT-PCR扩增猪心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP）基因，获得1条211 bp的片段，以pGEM-T 为载体，将该基因片段克隆到大肠杆菌(Escherichia coli ) DH5α中。从筛选到的阳性克隆中分离出脂肪酸结合蛋白基因，测定其序列。分析表明,该片段为脂肪酸结合蛋白基因cDNA的部分序列，与已报道的猪肌肉组织中的H-FABP cDNA部分序列同源性达到99%。以H-FABP基因片段的克隆为基础，构建了优化的半定量RT-PCR法，以18S rRNA为内标，研究不同生长阶段猪肌肉组织中H-FABP基因表达的差异。结果表明，从出生到50 kg，猪H-FABP基因表达呈下降趋势；50～90 kg阶段, H-FABP基因的表达又有所上升。     

降解胶原蛋白对生长猪消化和增重的影响

未经鞣制的牛皮边料在0.30MPa(140℃)条件下处理40min,然后加入0.6％中性蛋白酶(1:10000),在39℃下酶解3小时,最后干燥、粉碎制成饲用蛋白粉。蛋白粉的体外消化率达88.5％,粗蛋白含量为75.2％,赖氨酸和蛋氨酸含量低于秘鲁鱼粉,其他氨基酸含量接近或高于秘鲁鱼粉。生长猪饲养试验表明,用蛋白粉完全代替饲粮中的秘鲁鱼粉(5％),对猪的日增重和料重比均无显著影响(P>0.05),而单位体增重饲料成本降低10％;用蛋白粉部份代替秘鲁鱼粉(3％)时的效果最佳。生长猪消化试验表明,蛋白粉代替秘鲁鱼粉对饲粮养分消化率无显著影响。     

猪腺苷酸活化蛋白激酶α基因(AMPKα)特异性siRNA载体的构建及干扰效果评价

腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK),在真核细胞生物中广泛存在,是调控机体能量代谢的关键酶.本研究旨在构建并筛选猪(Sus scrofa)AMPKα基因的有效siRNA干扰载体,并探讨AMPKα基因对脂肪分解关键酶基因表达的影响.根据猪AMPKα基因(GenBank登录号:NM-001167633)全长cDNA序列,设计合成其特异性发夹siR-NA干扰片段,将其克隆插入pSilencer 4.1-CMV neo Vector干扰载体中,构建猪AMPKα基因的siRNA真核表达载体RA1和RA2,并通过PCR、双酶切和测序对其进行鉴定.构建成功后转染猪肌内脂肪前体细胞并检测其干扰效果及对脂肪分解关键酶一一激素敏感脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)、脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)和肉毒碱棕榈酰转移酶(carnitine palmitoyl transferase,CPTl)基因表达的影响.结果表明,所构建的猪AMPKα基因的特异性siRNA表达载体RA1和RA2均可降低猪AMPKα mRNA表达(P＜0.05),而且RA2干扰效果优于RA1.用RA2干扰AMPKα后,猪肌内脂肪前体细胞中AMPKα及脂肪分解关键酶HSL、ATGL和CPT1基因表达量显著下降(P＜0.05).提示,抑制AMPKα基因表达后,猪肌内脂肪前体细胞中脂肪分解和脂肪酸氧化速率降低.本研究结果为深入探讨AMPKα对猪脂肪代谢的影响机制及通过营养调控基因表达进而调控猪体脂沉积提供基础资料.     

猪肌内前体脂肪细胞的体外培养

本研究建立了猪肌内前体脂肪细胞的体外培养模型,以期为更深入研究猪肌内脂肪代谢提供新的实验方法。实验采集出生5d仔猪的背最长肌组织,Ⅱ型胶原酶消化2h后400目筛网过滤,然后1500r/min离心,沉淀用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(完全培养基)重悬后差速贴壁2h,弃去原有培养基,加入新的含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(完全培养基)进行培养。细胞经传代且完全融合48h后,在完全培养基中添加0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX),1μmol/L地塞米松(DEX),10mg/L胰岛素(INS)进行诱导培养48h,再换以含10mg/L胰岛素的完全培养基培养48h,最后换完全培养基继续培养,直至90%的细胞出现脂滴。培养结果:细胞贴壁生长,呈短梭状或棱形,经诱导培养后细胞充脂率高。经形态学观察、生长曲线及油红O脂肪染色法鉴定,证明是肌内前体脂肪细胞。普通PCR及实时荧光定量PCR均检测到了脂联素基因的表达。本研究通过差速贴壁法成功培养了猪肌内前体脂肪细胞,并通过诱导培养重现了其分化、成熟的全过程。     

抗菌肽与抗生素对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的体外协同抗菌效果研究

本试验旨在研究抗菌肽与抗生素联合使用对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌的作用效果.通过最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)测定,联合药敏试验,研究牛乳铁蛋白肽(Lactoferricin B,LFcin B)、天蚕素A(Cecropin A)及金霉素、新霉素对大肠杆菌(Escherichia coli ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(Staphylo-coccus aureus ATCC25923)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis CMCC50013)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa CMCC10014)的体外协同抗菌效应.结果表明:Cecropin A与LFcin B联合使用对所试革兰氏阴性菌均表现为协同作用,两者联用时的MIC分别是单用时的1/4和1/8～1/4;金霉素与LFcin B联合使用对革兰氏阴性菌和阳性菌表现为协同作用,两者联用时的MIC是单用时的1/8～1/4;另外,Cecropin A与金霉素联合使用对革兰氏阴性菌也表现为协同作用.4种药物的两两合用对受试菌株均不表现拮抗作用.结果提示,LFcin B、Cecropin A及金霉素联合使用对革兰氏阴性菌及阳性菌具有协同作用.     

氨气对肉鸡生产性能、血液常规指标和腹水症发生率的影响

为探讨氨气对肉鸡生产性能、血常规指标和腹水症发生率的影响。试验选择240只1日龄AA肉公鸡,随机分成4个处理组,每个处理组设6个重复,每个重复10只鸡。各处理组试验肉鸡分别饲养在4个独立的、但环境可控制的实验舱内。4个环控仓氨气浓度设计:0～3周龄分别为0、13、26mg/kg和52mg/kg;3～6周龄分别依次调整为0、26、52mg/kg和80mg/kg。结果表明:氨气浓度对0～3周龄肉鸡的日增重、日采食量和死亡率均无显著影响(P>0.05),但52mg/kg氨气组可显著降低饲料转化效率(P<0.05);在3～6周龄,80mg/kg氨气组可显著降低肉鸡的日增重和日采食量(P<0.05),饲料转化率和死亡率在数值上随氨气浓度的提高有上升趋势,但差异不显著(P>0.05)。氨气浓度对3周龄和6周龄肉鸡血常规,6周龄肉鸡心脏指数和腹水发生率均无显著影响(P>0.05),但红细胞数量、红细胞压积和红细胞平均体积随氨气浓度的提高在数量上有所增加。高浓度氨气(80mg/kg)有诱导肉鸡腹水症发生的趋势。综合考虑氨气浓度和肉鸡生产性能变化趋势,现代肉鸡在0～3周龄舍内氨气浓度应不超过13mg/kg,在3～6周龄氨气浓度应不超过20mg/kg。     

高效液相色谱法测定猪粪便细菌群作用下L-色氨酸体外代谢产物

运用高效液相色谱法,通过对流动相组成、梯度、检测器波长、进样量等检测条件的对比,建立同时测定L-色氨酸体外代谢体系中L-色氨酸、吲哚-3-乙酸、粪臭素和吲哚含量的理想检测条件为乙腈和水作为流动相,梯度洗脱,流速1mL/min,柱温30℃,进样量15μL,荧光检测器激发波长为280nm,发射波长为360nm。L-色氨酸、吲哚-3-乙酸、粪臭素和吲哚的线性范围分别为2.15～137.29、1.15～73.386、1.2～76.68、1.57～100.3μmol/L,具有良好的相关性,相关系数R2为0.9970～0.9999,方法的平均回收率在85.28%～102.38%之间,日内和日间精密度均不超过6.9%。该方法简单、快速、准确、灵敏度高且重现性好,适用于猪粪便菌群作用下L-色氨酸体外代谢产物含量的测定。     

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中沃尼妙林和泰妙菌素

本试验旨在建立一种高效快速测定饲料中沃尼妙林和泰妙菌素的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱方法。用甲醇提取饲料中的沃尼妙林和泰妙菌素,经过Oasis MCX固相萃取柱净化后,由C18色谱柱分离,流动相为水(含0.1%甲酸)-乙腈(含0.1%甲酸),梯度洗脱,以电喷雾离子源(ESI)正离子扫描方式,在多反应监测(MRM)模式下进行测定,外标法定量。结果表明:本试验建立的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法对饲料中沃尼妙林和泰妙菌素的检测限分别为25.0和5.0 ng/g。沃尼妙林和泰妙菌素浓度在0.01~5.00μg/m L范围内线性关系良好,相关系数(R2)均大于0.99。在3个添加水平(2.5、25.0、125.0 mg/kg)下,沃尼妙林的回收率为85.17%~94.55%,相对标准偏差(RSD)为2.56%~7.65%,泰妙菌素的回收率为84.69%~99.36%,RSD为1.57%~4.95%。结果表明,本试验建立的固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法操作简单、准确度高,可应用于饲料中沃尼妙林和泰妙菌素的快速定量测定。