大豆猝死综合症病原菌北美种的PCR鉴定

 应用等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,建立了大豆猝死综合症(sudden death syndrome of soybean,SDS)病原菌北美种Fusarium virguliforme与其近似种Fusarium phaseoli(菜豆根腐病菌)的鉴别方法。针对翻译延长因子(EF-1α)基因上的3个SNP(单核苷酸多态性)位点,参照引物设计原则和等位基因特异引物(allele-specific primer,ASP)的要求设计了1对引物Fsg-α-1/2,能特异地扩增F.virguliforme,产生327 bp的电泳条带。另外,根据ITS区序列设计了1对通用引物Fu1/2,能扩增F.virguliforme和F.phaseoli,产生452 bp的电泳条带。本实验在传统的AS-PCR基础上进行改进,引入Fu1/2作为阳性质控引物,将ASP的特异性与双重PCR的严谨性相结合,建立了简便可靠的SDS病原菌鉴定方法。     

植原体病害研究概况

植原体原名类菌原体,是一类重要的植物病原物,归属于细菌,无细胞壁,专性寄生于植物韧皮部。在菌体大小、结构以及遗传进化上与菌原体、螺原体十分相似。世界范围内植原体已引起千余种植物病害,主要表现为丛枝、黄化、节间缩短等。植原体病原主要依靠吸食植物韧皮部的昆虫介体传播,如叶蝉、木虱等。本文主要对植原体的病原学、遗传进化与基因组、致病机理以及防控进行综述。     

应用PCR方法快速检测黄瓜细菌性角斑病菌

黄瓜细菌性角斑病是黄瓜上的一种重要细菌病害,其病原为丁香假单胞菌黄瓜致病变种(Pseudomonas syringae pv.lachrymans),目前未见到该病害特异性PCR检测方法的报道。通过分析丁香假单胞菌(P.syringae)不同致病变种glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 1(gap1)基因序列设计得到一对Psl特异性PCR引物。利用该引物对丁香假单胞菌不同致病变种、假单胞菌属其他种及其他属的共46株菌株进行了PCR扩增,结果表明,所有不同来源的12株黄瓜细菌性角斑病菌均得到179bp的目标片段,而所有其他参试菌株均无扩增条带,PCR检测的灵敏度为7.5×103cfu/mL。利用该方法可从接种后发病的黄瓜叶片总DNA中检测到特异条带,而健康叶片无条带。该引物的PCR检测方法可直接用于植株总DNA的检测,无需进行病原菌的分离培养,快速简便,适用于进出境检验检疫及种苗健康检测等。     

黄瓜花叶病毒甜菜分离物的分离鉴定

 从新疆石河子地区春季采种甜菜和夏播母根用甜菜上分离到3个病毒分离物,代号为石-B-2、石-B-5和石-B-D,自然感染甜菜引起叶片黄色花叶、扭曲、皱缩和植株严重矮化。病毒粒体球状、直径28~30 nm、均含有分子量约为2 9k D外壳蛋白、3种相同的较大片段的双链RNA (即3400 bp的RNA1、3100 bp的RNA₂、2300 bp的RNA₃)和片段大小约400 bp的小RNA,石-B-2和石-B-D具有1100 bp的RNA4,在ELISA和琼脂双扩散试验中,3个分离物均与CMV-83抗血清有特异反应,初步认为这3个球状病毒分离物属于CMV,但它们具有狭窄的寄主范围,不感染心叶烟、蔓陀罗、番茄,在寄主反应、双链RNA4和卫星RNA的大小上明显不同于国内外报道的CMV株系或分离物,同时说明侵染甜菜的CMV可能存在着株系分化。     

烟草环斑病毒、马铃薯X病毒碱性磷酸酶酶联诊断试剂盒的研制简报

利用血清学技术开发的酶联诊断试剂盒 ,由于快速灵敏 ,操作简便 ,可进行大量样品的检测 ,比较好地满足了生产上需要 ,具有广阔的应用前景。由于国内尚没有成熟的植物病毒诊断试剂盒供应者 ,缺乏可靠的产品 ,因而限制了植物病毒诊断在国内的应用和发展。一旦需要时 ,主要是依赖国外进口 ,由于价格昂贵 ,采购不便 ,不能及时供应 ,在国内推广尚有一定的困难。另外 ,国外有些试剂盒在技术上有一定的缺陷 ,造成一些假阳性反应的出现 ,其中在阳性对照和阴性对照处理上不很成熟 ,对于危险性病毒的阳性对照处理不当 ,还易造成危险性病毒的扩散 ,而阴…     

实时定量PCR方法检测转基因产品

实时定量PCR方法检测转基因产品，操作简单，省时省力，结果可靠、准确性高。该方法利用特异性荧光探针实时监测目的的基因的扩增，同时循环参数（Ct值）和PCR体系中起始DNA量的对数值之间有严格的线性关系。利用阳性标准样品的Ct值，制成标准曲线，再根据未知样品的Ct值就可以准确确定起始DNA的数量。高纯度探针和适宜的镁离子浓度是该方法准确定量的关键。实时定量PCR方法有效地解决了其他定量方法所存在的假阳性及定量准确度不高的难题。     

PCR和Dig—cRNA探针检测番茄环斑病毒

利用根据ToRSV加拿大悬钩子株系核酸序列设计、合成的寡核苷酸引物进行PCR扩增试验,能成功地扩增ToRSV悬钩子株系的目标片段,但不能扩增苹果、樱桃株系的目标片段。 而ToRSV苹果株系的克隆pS_(64),经EcoRI酶切,再分别用~(32)P—UTP、Dig—11—UTP和SP_6RNA多聚酶转录出~(32)P标记、Dig标记的cRNA探针后,不仅能有效地检测出ToRSV的苹果株系,而且能有效地检测樱桃株系和悬钩子株系。~(32)P与Dig—标记的探针灵敏度基本相同,而Dig标记的探针无放射性,可以长期保存,多次使用,灵敏、准确、安全、经济,是值得推广应用的检疫新方法。     

松材线虫rDNA-ITS2的TaqMan探针实时荧光PCR检测

以松材线虫rDNA -ITS2为靶区 ,建立松材线虫的TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。对松材线虫大量DNA和单条线虫的检测结果表明 ,探针检测松材线虫和拟松材线虫时 ,前者产生明显的荧光信号 ,后者无荧光信号 ,表明探针具有高度的特异性 ;探针检测到最低模板浓度为 1pg·μL- 1 ,DNA测序结果与实时荧光PCR结果一致     

入侵生物适生区与种群动态中的数学方法

生物入侵会带来严重的环境问题与经济问题,近年来生物入侵问题正受到越来越多的关注,而且随着全球交流活动的频繁,生物入侵现象也日益严重。在生物入侵的研究中,建立数学模型尤其重要。本文首先对生物入侵中有关物种适生区预测的常见模型中的统计方法进行介绍,主要包括线性回归模型及广义线性回归模型、广义可加模型、多元自适应回归样条函数、分类回归树、助推树、极大化熵方法和支持向量机方法等,并对这些方法在生物入侵模型中的具体应用进行简要说明,然后对生物入侵中种群动态及物种扩散的常用数学方法进行了简要介绍,最后对入侵生物适生区分析与种群动态中的数学方法进行总结和展望。     

2012~2013年中国进境植物疫情截获情况分析

本文对2012~2013年中国进境植物疫情截获情况进行统计分析,重点分析不同检疫业务类型、有害生物类别、来源国(地区)植物疫情截获数据和全国首次截获检疫性有害生物情况,以期为今后植物检疫工作的针对性和有效性提供参考。