利用黄瓜花叶病毒M和Fny株系 的假重组体分析致病关键因子

 用RT-PCR扩增黄瓜花叶病毒M株系（CMV-M）全长基因组cDNA,成功构建CMV-M RNA2和RNA3侵染性克隆后,与CMV-Fny基因组RNA交换得到3个假重组型病毒 （F1M2F3、F1F2M3、F1M2M3）。用F1M2F3、F1F2M3、F1M2M3分别侵染白肋烟,产生坏死环斑、轻微绿斑驳、明脉、黄白化和叶尖线性化等症状。根据假重组型病毒和野生型病毒的表观症状,分析引起各种症状的关键因子,初步判定：CP基因是诱导花叶症状的关键因子,CMV-Fny RNA2是诱导叶尖线性化的关键因子,CMV-M RNA2是诱导叶尖坏死斑关键因子。实时荧光定量PCR结果显示：野生株CMV-M、CMV-Fny和假重组体F1M2F3、F1F2M3、F1M2M3侵染烟草后引起的症状差异与病毒基因组RNA累积没有直接关系。     

应用分子生物学方法检测红火蚁

根据Simon(1994)发表的Cyt b基因的通用引物,扩增了红火蚁、黑火蚁及其杂交种不同地理种群的Cyt b基因片段.所测样品在Cyt b基因上存在两个不同单倍型.经序列比对后,根据核苷酸位点多态性,设计了检测红火蚁的特异引物.PCR实验结果表明:引物成功检测出所有红火蚁样品,而黑火蚁样品未被检出,该方法对不同虫态的红火蚁分子检测均有效.     

根癌农杆菌对感染植原体的泡桐组培苗症状的影响

采用含有激素合成相关基因的根癌农杆菌，伤口接种已感染植原体的泡桐丛植组培苗和健康组培苗，结果发现对丛植苗的致瘤能力明显低于健康对照苗，且被接种病苗的丛枝症状缓解，从健苗获得的T-DNA转化泡桐瘤组织细胞能在无激素培养基上稳定生长和连续继代培养2年以上，说明瘤组织细胞自身已获得了细胞分裂素和生长素合成能力，根据已报道的根癌农杆菌株系pTil5955T-DNA的异戊烯基转移酶基因（ipt)的保守序列，设计了一对引物（CYT和CYT′），用多聚酶链式反应（PCR）扩增了我国杨树致瘤农杆菌ipt基因部分序列（427bp片段），也从遗传转化的两个泡桐无性系瘤组织At-ZH和At-T35扩增出此特异片估，从而进一步肯定了T-DNA已被整合到泡桐的染色体上表明泡桐易于通过Ti质粒载体途径进行基因转移操作，但用此引物未能从泡桐、甘薯健株和感染植原体的组培病苗扩增出相应的427bp特异片段，当用此遗传转化瘤组织嫁接病苗时，可减轻从枝症状的严重度，延长病苗的存活时间和诱导病株生根，这进一步证实了泡桐在与植原体相互作用过程中激素代谢发生了变化。     

植物小RNA在病毒致病过程中的作用研究进展

目前,我国正遭受多种外来有害生物的入侵,给我国的农业生产以及生态环境造成了严重影响。其中检疫性植物病毒危害大、隐蔽性强,是重要的外来生物。掌握病毒致病的相关机制是有效防控入侵病毒病害的基础。微小RNA(microRNA,miRNA)以及病毒小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)是植物体内重要的非编码小RNA,在病毒致病过程中扮演着重要角色。病毒在侵染过程中,可以利用植物抗病毒免疫反应产生的siRNA进行致病,同时可以直接或间接干扰miRNA的代谢途径,导致相关症状的产生。本文根据植物小RNA的近期研究进展,对miRNA和病毒siRNA的产生途径、生物学特性以及作用分子机制进行了综述,并对其在病毒侵染过程中的作用进行了探讨,初步从小RNA的角度阐述了植物病毒的致病机制,以期为检疫性病毒病害的防控提供理论基础。     

苹果茎沟病毒研究进展

苹果茎沟病毒在仁果类果树上的感染较普遍,且一般不产生明显症状,给生产带来严重损失。对于该病毒病害,较为可行的控制措施是实行检疫控制其扩展和培育与栽培无病毒苗木。较为系统地综述了国内外苹果茎沟病毒的分布与危害、生物学特性、基因组结构与序列分析及检测方法等方面的研究进展。     

实时荧光RT-PCR一步法检测苹果茎沟病毒

 根据苹果茎沟病毒(ASGV)各分离物外壳蛋白(CP)基因的保守序列,设计并合成1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,建屯了对ASGV的实时荧光RT-PCR检测方法。TaqMan-MGB探针3'端具有小沟结合分子(Minor groove binder,MGB),提高了探针的Tm值,缩短了探针长度,解决了病毒各分离物之间基因组变异较大、难以找到较长一致的序列来设计探针的困难。该方法的检测灵敏度比常规RT-PCR电泳检测高约10倍,对于ASGV等在果树体内含量较低的病毒尤为适用。此方法快速、灵敏,整个检测过程完全闭管,无需PCR后处理。     

转基因延熟番茄"华番一号"的品系特异性检测方法

本文使用反向PCR方法克隆了转基因延熟番茄"华番一号"(Bioscein)的外源基因和番茄基因组之间的一段边界序列,并依据此段序列设计了具有品系特异性的引物和荧光探针,以实时荧光PCR技术建立了华番一号的品系鉴定检测方法,扩增片段长108bp,横跨在Nos启动子和番茄基因组之间.以转基因大豆(RR)、转基因玉米(Mon810)、转基因抗草甘膦油菜、转基因棉花(保龄棉)、非转基因番茄、马铃薯、茄子、大椒、大米、小麦、烟草等为试材,证明本方法同其它转基因作物及其它蔬菜无非特异性反应.本方法在检测华番一号番茄时,相对检测灵敏度可达到0.1%,绝对灵敏度达到20个拷贝.由于本方法的PCR扩增产物长度只有108bp,因此该方法也可以用于检测加工产品中的转基因成分,或作为常规PCR定性检测后的确证实验方法.     

分子生物学技术在腥黑粉菌种间分类鉴定的应用

真菌是一类种群数目庞大的微生物,传统分类鉴定主要依据形态学.但是有些真菌形态极为相似,传统的形态学特征有时难以区分,这给真菌的鉴定和分类带来了困难.随着分子生物学的发展,利用分子生物学技术探索出的分类鉴定方法,用以辅助形态学鉴定,使形态学鉴定更加准确和完整.     

实时荧光RT-PCR-步法检测南方菜豆花叶病毒

南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)是我国二类检疫性有害生物,以南方菜豆花叶病毒日本分离物(SBMV-J)总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增病毒外壳蛋白基因及其上游基因的cDNA片断并将其克隆到pMD18-T载体上。序列分析结果表明:SBMV-J cp基因由801个核苷酸组成,编码266个氨基酸,SBMV-J与其它分离物及株系cp基因的核苷酸序列同源性为83%～97%,氨基酸序列同源性为86%～97%。由于SBMV各分离物及株系cp基因的同源性较低,难于设计出较长的普通PCR引物。通过较短引物设计和TaqMan-MGB探针技术,建立了SBMV的实时荧光RT-PCR一步检测方法。该方法的检测低限是0．16 pg,最佳检测总RNA的量是0．16 ng。     

PCR—ELISA在转基因产品检测中的应用

PCR－ELISA法以共价交联在PCR管壁上的寡核苷酸作为固相引物进行PCR扩增，PCR产物通过杂交和凝胶电泳双重检测，结果通过酶标仪直接输出，无人为误差。该方法灵敏度高，可靠性强，易于操作，自动化和程度高，适于批量检测，是适合推广的1种快速转基因检测方法。