红掌漆酶基因Lac的表达载体构建与剑麻转化

用RT-PCR从红掌品种亚利桑那的cDNA中扩增出漆酶基因Lac并得到的基因的全长.将Lac片段克隆到pMD18-T载体,然后将此基因插入pBI121的CaMV35S启动子后取代原载体中的GUS基因构成表达载体pBI121-Lac.通过冻融法将表达载体导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404,并转化剑麻获得转基因植株.对转化植株进行的基因组PCR分析结果表明,Lac基因已成功的整合到剑麻的基因组中.转漆酶基因植株的获得为剑麻抗性的提高提供了可能性,并且为以后研究漆酶的具体功能提供了方便.     

蜻蜓凤梨 AfERF113基因的克隆与表达特性

观赏凤梨是一类重要的热带花卉,但有关其生长发育调控分子机理的研究相对匮乏,这在一定程度上限制了新品种的开发和利用。以热带观赏花卉蜻蜓凤梨(Aechemia fasciata)为材料,在分析蜻蜓凤梨转录组数据的基础上,结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆了APETALA2/Ethylene Response Element Binding Protein(AP2/EREBP)家族的1个转录因子编码序列,并将其命名为AfERF113。生物信息学分析表明,AfERF113 cDNA全长1 093bp,有1个864bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码287个氨基酸。蛋白质理化性质分析表明,该蛋白分子质量为29.768 5ku,理论等电点为6.06,为一类不稳定的酸性亲水蛋白。亚细胞定位软件预测表明该蛋白定位于细胞核。结构域分析表明,该蛋白有1个保守的AP2结构域,分属ERF亚族的B-4类,与拟南芥中所有ERF蛋白的ERF113亲源关系最近。实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,qRT-PCR)结果表明,AfERF113转录本在成熟株的根中表达量最高,且外源乙烯诱导后,AfERF113的表达量无论是在幼株还是在成株的各组织中均显著上调。研究结果证实,AfERF113响应了外源乙烯调控,为进一步研究AfERF113基因的功能及通过基因工程手段调控凤梨科植物生长发育提供了理论依据。     

蜻蜓凤梨AfWIN1基因的克隆及表达特性

为利用基因工程手段调控凤梨科植物生长发育奠定基础,基于转录组数据,利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术从蜻蜓凤梨中克隆APETALA2/Ethylene Response Element Binding Protein(AP2/EREBP)家族的1个转录因子编码序列AfWIN1,并通过在线软件预测其亚细胞定位,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析其转录本表达量,且利用染色体步移方法分离其启动子序列。结果表明:AfWIN1cDNA全长995bp,含有1个501bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码166个氨基酸残基;AfWIN1定位于细胞核的碱性亲水蛋白;AfWIN1的转录本表达量随着植株年龄的增长逐渐上调,但在花器官中表达量很低甚至检测不到;AfWIN1基因5′端上游的调控序列中包含较多响应激素的顺式元件;AfWIN1在幼株和成株心叶中对乙烯响应的方式不尽相同,可能参与蜻蜓凤梨营养生长过程,但不调控花器官发育。     

铁兰液体振荡培养再生与快速繁殖

以铁兰叶片为外植体,诱导获得脆性愈伤组织,液体振荡进行胚性愈伤组织培养及快速增殖,固体培养诱导胚状体萌发、不定芽生根,最后移栽成活,实现了铁兰的快速繁殖。在优化的培养条件下,铁兰无菌苗叶片愈伤组织诱导率90%以上,振荡后的愈伤组织100%成为胚状体,体积增殖系数可达5.0;90%以上的胚状体可分化为不定芽,95%以上的不定芽可诱导生根,移栽成活率95%以上。研究结果表明成功进行了铁兰的液体振荡培养及快速繁殖。     

湖北省古树群资源分布及保护利用对策

为了查清湖北省古树群资源状况,采用资料收集和现场补充调查的方法,对湖北省内古树群的种类、数量、分布、生长现状等进行了调查。调查表明:湖北省共有古树群473个,15015株,隶属37科77属121种,主要树种为水杉、马尾松、桂花和银杏。古树群主要分布在恩施土家族苗族自治州、黄冈市、随州市和咸宁市,呈现集中分布为主,零星分布为辅的格局。目前湖北省古树群整体生长状况良好,但也受到立地条件差、病虫害、人畜破坏和自然灾害等因素的危害。建议今后古树群的保护利用中加强宣传、落实管护责任制、加强古树群保护利用研究、将古树群纳入全域旅游战略、完成湖北省古树群保护利用规划。     

湖北省银杏古树资源现状及保护利用对策

为了查清湖北省银杏古树资源状况,采用资料收集和现场补充调查的方法,对湖北省内银杏古树的数量、分布、生长现状等进行了调查。结果表明:湖北省共有银杏古树9062株,其中I级古树577株,II级古树1761株,III级古树6724株。银杏古树群67个,计1498株,散生银杏古树8104株。银杏古树主要分布在随州市、襄阳市和黄冈市,呈现重点区域集中分布,全省各处零散分布的格局。目前湖北省银杏古树整体生长状况良好,但也受到立地条件差、病虫害、人畜破坏、其他植物干扰及自然灾害等因素的危害。建议在今后古树群的保护中需加强宣传、落实银杏古树挂牌保护和管护责任制工作、针对性制定银杏古树保护措施和科学利用银杏古树资源。     

不同栽培基质对牛大力根系发育的影响

以不同比例泥土、砂、椰糠、草炭混合作为牛大力栽培基质,并进行盆栽试验,研究不同栽培基质条件下,基质的养分特征及其对牛大力根系生长和膨大状况的影响。结果表明:由草炭+泥土(体积比2∶1)及草炭+椰糠+砂(体积比1∶2∶1)混合的基质p H值较适中,有机质含量与氮磷钾养分含量均较高,养分状况较理想,牛大力根系发达,但膨大块根较少;而泥土与砂混合基质各项指标均比较低,养分比较贫乏,牛大力根系发达,但块根膨大明显。在本研究条件下,基质养分不是根系膨大的关键因素,泥土含量高的基质可能因为较为理想的通气和热量条件而有利于块根的膨大。     

纹瓣兰的无菌播种与试管成苗

纹瓣兰作为一种野生的兰花资源有其重要的保护及保存意义,本试验以纹瓣兰的种子作为外植体对其进行无菌播种,并成功诱导出再生植株。试验结果表明,在添加椰子水和6-BA的1/2MS培养基中纹瓣兰的种子可以在较短的时间内形成原球茎,其中以添加6-BA 2.0mg/L+10%椰子水诱导效果最佳。添加6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L的1/2MS培养基最有利于纹瓣兰芽的分化,在分化培养50d时其分化率可达到100%,且芽生长健壮。当生根培养基为1/2MS+NAA 0.1mg/L时,纹瓣兰的生根率达95%;生根培养30d后移栽,幼苗成活率达90%以上。     

提高香蕉胚性愈伤诱导成功率的可能途径

香蕉是我国重要的热带亚热带农作物。由于绝大多数食用香蕉是三倍体,不能通过授粉进行遗传改良,转基因技术就变得尤为重要。建立胚性悬浮细胞系是进行香蕉遗传转化的第1步。但是,建立香蕉胚性悬浮细胞系的成功率极低,直到现在多数实验室还不能自己建立香蕉胚性悬浮细胞系。然而,为什么香蕉胚性悬浮细胞系如此难以建立,在香蕉体细胞向胚性细胞转化的过程中,发生了哪些关键事件,如何提高香蕉胚性愈伤诱导的成功率,关于这些问题,目前还未见到报道。文中对近年来香蕉胚性悬浮细胞系建立方面的工作进行综述,针对香蕉胚性悬浮细胞系建立过程中发生的关键事件进行阐述,对香蕉胚性悬浮细胞系建立困难的原因进行讨论,并提出了若干提高香蕉胚性愈伤诱导成功率的可能途径。     

聚天门冬氨酸同源多肽对西红柿生长发育和抗病性的影响

以夏红1号和长葫芦柿为试材,采用田间小区试验和田间调查试验,研究聚天门冬氨酸同源多肽对西红柿生物学性状和产量的影响。结果表明:聚天门冬氨酸同源多肽可增强西红柿生长势,使西红柿提早进入结果期,聚天门冬氨酸同源多肽对西红柿的增产作用达极显著水平,单位面积产量比对照增加9.33%;其销售量比对照增加37.52%,以销售收入核算的产出投入比达10.91,可显著提高西红柿的经济收益。田间试验调查发现:聚天门冬氨酸同源多肽对培育西红柿壮苗效果显著,对西红柿的大田长势及抗病方面也有显著的积极作用,并且病虫害的发生比对照明显减少。