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31.
不同转染介质对狂犬病病毒糖蛋白基因免疫的效应 总被引:4,自引:2,他引:2
将狂犬病病毒糖蛋白 ( RGP) c DNA Bgl 片段 ( 1 .6 7kb)分别克隆进质粒 p GFP-Cl、p SV2 -dhfr和pc DNA3 ,构建了重组质粒 p GFP-C1 -RGP、p SV2 -RGP和 pc DNA3 -RGP,通过脂质体和聚乙烯亚胺 ( PEI)包裹后分别转染 BHK-2 1细胞和乳鼠脑内接种 ,3种重组质粒均能表达出 RGP。表达水平高低依次为 p GFP-C1 -RGP>pc DNA3 -RGP>p SV2 -RGP。 3种重组质粒分别以全裸质粒、质粒 -脂质体、质粒 -PEI形式 ,经骨骼肌免疫小鼠 ,间接 ELISA检测。结果显示 ,免疫鼠血清中特异性抗体水平明显高于对照组 ;80 %免疫小鼠能抵抗狂犬病病毒强毒的攻击。全裸质粒免疫诱生的抗体水平同其剂量相关 ;而以 PEI或脂质体作为转染介质、质粒接种量超过 2 0μg时 ,诱生抗体水平不再随质粒剂量增大而显著变化。质粒免疫后 1 50 d采用 PCR仍然能从注射部位检测到 RGP基因的存在 相似文献
32.
单克隆抗体在动物病毒性传染病研究中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
单克隆抗体是由预定免疫小鼠的脾细胞与能在体外无限生长的骨髓瘤细胞融合形成的具有双亲特征的杂交瘤细胞产生的只针对一种抗原决定簇的单一抗体.
…… 相似文献
33.
34.
用多次PCR方法对伪狂犬病病毒的立即早期蛋白(immediate early protein,IE180)基因进行部分缺失。测序证实缺失序列正确后,构建了IE180基因部分缺失突变体的真核细胞表达裁体peP1P2、pcP1P3P2、pcP6P2。将这些真核表达裁体与带有SV40早期基因启动子和报告基因CAT(氯霉素乙酰转移酶)的pCAT3-control载体质粒混合后,用质酯体介导的方法,共转染Hela细胞。通过CAT的ELISA方法检测瞬时表达结果表明:突变体P1P2和P1P3P2对SV40启动子具有较强的激活能力,而P6P2则对SV40启动子有较明显的抑制作用。 相似文献
35.
对鸡新城疫病毒(NDV)B1株、La Sota株、Mukteswar株和长春强毒野毒株(C87E7)感染的鸡胚尿囊液分别进行浓缩和提纯,并作SDS-PAGE和Western印迹,进行结构蛋白及其抗原性的分析。结果,4株NDV的电泳图谱显示11-12条结构蛋白带,分子量从43000到120000不等。其中各株均有3条主要蛋白带,8~9条次要蛋白带。不同株NDV的次要蛋白带有明显的区别。Schiff氏试剂染色证明,分子量为76000、52000和50000的蛋白为糖蛋白。结构蛋白的抗原性分析表明,4株NDV蛋白带中有2条具有共同抗原性,其他蛋白带的抗原性则有差异或明显不同。 相似文献
36.
以非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒(EDSV),经差速离心法纯化,电镜下观察到病毒无囊膜,大小为70~85nm。以蛋白酶K法抽提病毒基因组,琼脂糖凝胶电泳只出现1条分子量约34kb、背景清晰的核酸带。HindⅢ酶切EDSVDNA可见10条片段,以pUC19质粒为载体,采用鸟枪法对病毒基因组的HindⅢ酶切片段进行分子克隆,获得17个重组质粒,通过酶切、斑点杂交鉴定,证实已经成功地克隆到EDSV的5.24kb、2.02kb、1.65kb、1.47kb、1.41kb等5个DNA片段。 相似文献
37.
猪瘟(CSF)是我国四大畜禽疫病之一,至今已流行70多年。我国于1954年成功研制了猪瘟兔化弱毒疫苗(Hog Cholera Lapinised Virus,HCLV),随即在全国范围内推广应用,并于1956年提出了消灭猪瘟的规划。由于长期贯彻预防为主的指导思想,坚持广泛接种猪瘟兔化弱毒疫苗的综合性防治措施,本病在我国已经得到有效控制,大规模的爆发流行基本停止,但是猪瘟并未被扑灭,该病仍在全国范围内不间断地小规模地散发流行,消灭猪瘟仍然还有很长的路要走。猪瘟在我国仍然流行的一个重要原因是我国缺乏全国范围内猪瘟的定性和定量流 相似文献
38.
轮状病毒VP4、VP7基因的克隆与核苷酸序列分析 总被引:7,自引:3,他引:4
用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从轮状病毒感染的细胞中扩增816bp,916bp的VP4,VP7片段中抗原表位区。通过T4DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒pGEM-T上,转化至受体菌DH5α中,提取质粒经PCR扩增,酶切鉴定,证明重组质粒pT-V4,PT-V7中含有轮状病毒的VP4,VP7基因片段。经核苷酸序列分析。表明克隆了轮状病毒主要保护性抗原VP4,VP7基因中抗原表位区。 相似文献
39.
改革开放二十多年来,我国规模化养殖业发展迅速,畜禽的饲养量居世界首位,在国民经济中发挥的作用日益明显。但与发达国家相比还有很大差距.这种差距主要表现为我国畜牧业的生产效率低,成本高。导致效率低的主要原因是传染性疾病的流行使幼畜、禽的成活率低。20世纪80年代以来,新发生或传人我国的动物疫病多达34种,严重威胁着畜牧业生产和畜产品安全,影响着我国畜产品在国际市场上的信誉,也间接地影响了我国对外贸易及旅游业。随着规模化养殖业的发展, 相似文献
40.
通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出了狂犬病无毒疫苗株(SRV9)糖蛋白(G)基因膜外主要功能区的两个片段,共约740个bp(450~1144),含有可以诱导中和抗体的两个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将两片段克隆到pUC18的SmaI位点。采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸序列,并推导出其氨基酸序列。将这一序列与已发表的狂犬病病毒SADB19株的相应序列通过计算机进行比较分析。结果证明两者核苷酸序列的同源性为98.6%,推导氨基酸序列的同源性为95.9%,主要抗原区内的几个重要氨基酸(如333位精氨酸等)发生了变异,糖基化位点也改变。 相似文献