绵羊卵泡内Ghrelin的免疫组化定位

为探索Ghrelin在绵羊各级卵泡的存在和分布,采用免疫组织化学技术研究了Ghrelin多肽在绵羊卵泡中的分布情况。结果表明,初级卵泡、早期生长卵泡和晚期生长卵泡均有Ghrelin表达,卵母细胞呈阳性信号,而在各级卵泡中颗粒细胞Ghrelin呈弱阳性信号。各级卵泡内Ghrelin的表达,提示Ghrelin在卵泡发育过程中可能具有一定作用。     

Western blot鉴定背肩胛棕色脂肪黑皮质素4型受体的研究

旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白,不同蛋白处理方法及电转膜液的组分、pH为试验对照条件,探究蛋白提取方法、电转液的组分与pH对转膜效率的影响。结果显示,转膜初始电压及功率与转膜液中十二烷基磺酸钠(SDS)含量及pH极显著相关,恒流转膜时,转膜液中SDS含量与转膜电压及功率呈反比,pH为8.0时的转膜电压及功率极显著高于pH 7.6(P0.01)和8.6的转膜电压及功率(P0.001);MC4R及相关蛋白在醇类物混合裂解液(20%Methanol+1%Triton+1%SDS+RIPA)的蛋白处理组的表达显著优于单独RIPA的蛋白处理组(P0.05),极显著优于Trizol的蛋白处理组(P0.01)。综上,于MC4R蛋白而言,在裂解液的基础上添加增强剂(Triton和SDS),可促进蛋白提取的效率,提高抗体检测的灵敏性。上述结果有助于相关操作人员对主要细节的认识,提高试验的灵敏及重复性。     

uPA对体外培养牛卵丘颗粒细胞周期变化与凋亡的影响

探讨uPA对体外培养牛卵丘颗粒细胞周期与凋亡的影响。在建立稳定传代的牛卵丘颗粒细胞体外培养体系的基础上,利用细胞周期检测技术,探讨了尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinasetype plasminogen activator,uPA)活性对调节体外培养牛卵丘颗粒细胞周期的变化和凋亡的的影响。试验结果表明Amiloride能显著增加处于S和G2/M期的细胞比率,且对细胞凋亡没有影响。本研究结果对于进一步深入理解牛卵泡发育与闭锁机制有重要意义。     

蒙古绵羊卵丘细胞ghrelin部分序列的鉴定

为了研究生长激素释放多肽(ghrelin)mRNA是否在蒙古绵羊卵丘细胞中表达,试验根据Gen-Bank中报道的绵羊ghrelin序列设计1对特异性引物,以蒙古绵羊卵丘细胞中的RNA为模板,采用实时定量RT-PCR技术扩增蒙古绵羊ghrelin的cDNA,并进行测序分析。结果表明:扩增得到的蒙古绵羊ghrelin cDNA为ghrelin的部分序列,将测序结果与已发表的绵羊ghrelin序列进行比对发现,233个碱基中有1个碱基的差异,该差异不影响翻译后多肽的序列;该cDNA片段包含长度为231 bp的开放读码框(ORF),编码77个氨基酸的绵羊ghrelin前原肽。     

绵羊卵母细胞体外培养Ghrelin mRNA的表达

为揭示Ghrelin在绵羊卵母细胞的表达情况,运用实时定量RT-PCR技术检测不同培养系统中绵羊卵母细胞Ghrelin mRNA的相对表达量。结果表明,以M199和血清为基础培养基添加不同激素后培养的卵母细胞GhrelinmRNA相对表达量均显著上升,仅以M199为基础培养基添加不同激素后培养的卵母细胞Ghrelin mRNA相对表达量均显著下降。在不同基础培养基中添加不同激素后,E2较FSH和LH有促进Ghrelin mRNA相对表达量升高的趋势。绵羊卵母细胞Ghrelin mRNA的表达以及在不同培养系统动力学变化,提示了这一新型分子在卵母细胞成熟过程中受激素潜在的调控作用。     

呼和浩特某宠物门诊犬瘟热的调查研究

对呼和浩特市某宠物门诊2009年7—8月接诊的516例犬病病例进行了分析研究,死亡病例共38例,其中抗原检测犬瘟热病毒阳性病例30例,占78.9%。说明犬瘟热目前仍然是导致犬死亡的主要传染病。研究发现,结膜炎、呼吸道炎、消化功能障碍及神经症状是犬瘟热的主要临床特征。     

DHEA诱导小鼠PCOS模型过程中性激素的变化规律

【目的】 鉴于在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)发病机理和治疗方式上的诸多争议，以及使用人类PCOS材料进行研究的局限性，本研究通过构建PCOS小鼠模型以探究在模型构建过程中性激素水平的变化规律。【方法】 皮下注射脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone, DHEA)诱导昆明白雌鼠产生PCOS样临床症状，通过结晶紫染色查看小鼠性周期是否发生停滞；利用HE染色的方式确定卵巢发育状况；利用ELISA技术调查建模过程中血清睾酮和雌二醇浓度的变化规律。【结果】 使用结晶紫对小鼠阴道上皮细胞染色可准确区分小鼠各个性周期阶段；使用6 mg/100 g DHEA持续诱导20 d后，昆明白小鼠性周期循环发生了一定的停滞，且在建模过程中体重变化与芝麻油溶剂的加入呈显著相关(P < 0.05)，与DHEA处理无关；DHEA连续处理后可见卵巢中巨大囊状卵泡出现，血清睾酮水平出现显著升高(P < 0.05)；自PCOS模型构建的第5天起，血清睾酮水平显著上升(P < 0.05)，且维持到建模结束；而血清雌二醇水平出现了阶段性变化，在第10、15天均显著高于对照组(P < 0.05)，第20天时低于对照组。【结论】 改进DHEA溶解方式可成功构建昆明白小鼠PCOS模型，在建模过程中血清睾酮持续处于较高水平，而雌二醇水平呈现先增高后降低的趋势，后者在建模中期瞬时升高的病理意义需进一步研究。     

双氢睾酮对小鼠卵泡颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素表达的影响

【目的】探讨双氢睾酮(DHT)对小鼠颗粒细胞增殖与抗苗勒管激素(AMH)表达的影响。【方法】给3周龄的昆明小鼠注射孕马血清促性腺激素(PMSG,10 IU/只)以获取颗粒细胞,颗粒细胞传代后48 h HE染色鉴定形态,绘制颗粒细胞的生长曲线,免疫荧光法鉴定促卵泡素受体(FSHR)的表达。当第2代颗粒细胞汇合度达到50%时,先用无血清的DMEM/F12培养基饥饿处理12 h,然后在培养基中添加不同浓度的DHT (0、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5 mol/L),培养48 h后检测颗粒细胞增殖情况,实时荧光定量PCR法及ELISA法分别测定AMH基因及蛋白的表达。在颗粒细胞培养液中分别添加10^-6 mol/L Flutamide (雄激素受体(AR)特异性抑制剂)、10^-7 mol/L DHT、10^-7 mol/L DHT+10^-6 mol/L Flutamide、10^-5 mol/L DHT、10^-5mol/L DHT+10^-8 mol/L 11-ketodihydrotestosterone (AR特异性激动剂),分别记为F、D7、DF、D5、DK组,以不添加药物为对照组。培养48 h后,检测各组颗粒细胞增殖及AMH蛋白含量。【结果】体外培养的小鼠颗粒细胞呈梭形或铺路石状,生长曲线呈S形,细胞普遍表达FSHR;与0 mol/L DHT组相比,10^-8、10^-7 mol/L DHT组细胞增殖分别显著和极显著增加(P＜0.05;P＜0.01),10^-5 mol/L DHT组细胞增殖显著降低(P＜0.05);10^-7 mol/L DHT组AMH基因的相对表达量和AMH蛋白含量均极显著增加(P＜0.01)。与D7组相比,DF组颗粒细胞增殖和AMH蛋白含量均极显著降低(P＜0.01);与D5组相比,DK组颗粒细胞增殖和AMH蛋白含量均极显著升高(P＜0.01)。【结论】10^-7 mol/L DHT能够显著促进颗粒细胞增殖和AMH表达,而10^-5 mol/L显著降低了颗粒细胞增殖以及AMH表达,且AR介导了DHT调控颗粒细胞增殖和AMH表达。     

纳米孔测序技术在动物疫病防控中的应用

纳米孔测序是基于单分子的第三代基因测序技术，具有便于携带、实时测序、超长读长等技术优势。近年来，纳米孔测序技术发展迅速，在动物疫情现场处置、流行病学调查监测、动物疫病临床快速诊断、病原体基因组学研究等动物疫病防控领域得到广泛应用。通过综述可以发现纳米孔测序具有如下应用方面的特点：可及时准确鉴别病原体，给出精准检测结果，有助于基层有效应对突发、新发、外来动物疫情；可与PCR联合应用，快速获得病原体全基因组序列，为病毒遗传变异和流行病学分析提供重要参考和理论依据；可用其探索建立灵敏可靠、灵活机动、快速反应的病原体监测预警网；可利用其优势建立较全面的病原体基因库，为后续的临床耐药性分析及用药指导提供建议。随着纳米孔测序技术的不断发展，其在测序通量、准确度和自动化程度，测序成本与周期，数据分析软件的丰富性和易用性等方面有望进一步改善。