蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素(sBD-1)的序列分析及组织表达

从蒙古绵羊输卵管、子宫、子宫颈、阴道组织中提取总RNA,根据GenBank中羊的β-防御素的cDNA序列设计合成引物,通过RT-PCR进行cDNA扩增,获得了301bp的片段。将该片段克隆于pMD-18T载体后进行序列分析,确认该PCR产物为β-防御素。通过相同的RT-PCR反应体系和条件后,对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,以β-actin为参照,根据PCR产物的亮度推断不同组织中β-防御素的表达量。结果,蒙古绵羊雌性生殖道上皮各组织均有β-防御素表达,说明β-防御素在蒙古绵羊雌性生殖道的先天免疫中起重要作用。β-防御素的表达量在雌性生殖道各组织内不同,提示雌性生殖道各组织的防御功能强度不同。     

绵羊超数排卵技术的初步研究

以乌珠穆沁蒙古绵羊及无角道赛特羊为供体,采用FSH-LH法,对73只供体羊实施超排处理,有效率为94.5%,平均获卵8.12枚,平均获可用胚7.22枚.结果表明:在9～11月超排效果最佳;发情周期正常且易受孕,母羊可提高超排效果和胚胎可用率;FSH剂量150IU可获较好的超排效果;适龄羊超排效果最佳,平均获卵和可用胚胎数高于育成和老龄羊组.     

影响绵羊多胎性状主效基因的研究进展

对绵羊多胎基因在分子遗传学方面的研究现状及检测方法进行综述.     

牛未成熟卵丘-卵母细胞中uPA和uPAR蛋白表达检测

【目的】:uPA及uPAR系统在牛卵泡生长调节方面的研究会取得较大进展而有着广阔的应用前景。本实验探讨牛未成熟卵丘-卵母细胞中uPA和uPAR蛋白定位与表达。【方法】:分别应用western blot及FITC免疫荧光方法检测牛未成熟卵丘-卵母细胞中uPA和uPAR蛋白定位与表达。【结果】:Western blot及FITC免疫荧光方法检测发现uPA在牛未成熟卵丘细胞、卵泡内膜细胞和外膜细胞表达,uPA在牛卵母细胞不表达;并发现uPAR在牛未成熟卵丘细胞、卵泡内膜细胞和外膜细胞表达,uPAR在牛卵母细胞表达。【结论】:根据western blot及FITC免疫荧光方法的结果推测,uPA可通过结合牛卵丘细胞和卵母细胞上的uPAR调节卵泡的生长。     

内蒙古阿尔巴斯绒山羊毛囊结构特征分析

以内蒙古阿尔巴斯绒山羊为材料,通过石蜡包埋技术制作皮肤组织切片,利用Sacpic染色法分析内蒙古阿尔巴斯绒山羊3月、5月和10月的毛囊结构,得到了3个时期较为清晰和具有明显时期特征的形态学图片,为阐明绒山羊绒毛生长发育提供了组织学基础.     

反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达的影响

[目的]探讨ghrelin对蒙古绵羊脐静脉内皮细胞的血管内皮生长因子VEGF及其受体Fit-1mRNA表达的影响。[方法]试验分为4组：Ⅰ组,空白对照组;Ⅱ组,脂质体组（不加寡核苷酸）;Ⅲ组（SCON）,20μmol／L正义寡核苷酸组;Ⅳ组（ASCON）,20μmol／L反义寡核苷酸组。上述各组均在培养24、36、48h后,采用实时荧光定量方法检测VEGF及其受体Fit-1 mRNA表达情况的变化。[结果]VEGF和Fh-1熔解曲线表明扩增效果好,培养24h,VEGFmRNAⅠ组相对表达量为0．0769,Ⅱ组为0．0768,Ⅲ组为0．0769,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,Ⅳ组VEGFmRNA相对表达量下降为0．0242,且与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组有显著性差异（P〈0．05）。培养36h,前3组相对表达量分别为0．059,0．051,0．0514,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0242,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养48h,前3组相对表达量分别为0．061,0．0552,0．0521,3组之间无显著性差异（P〈0．05）,第Ⅳ组为0．0115,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养24h,Fit—lmRNA Ⅰ组相对表达量为0．0786;Ⅱ组为0．0782,Ⅲ组为0．0781,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,Ⅳ组Flt-1 mR—NA相对表达量下降为0．0256,且与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组有显著性差异（P〈0．05）。培养36h,前3组相对表达量分别为0．0781,0．0784,0．0782,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0228,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。培养48h,前3组相对表达量分别为0．0691,0．0780,0．0693,3组之间无显著性差异（P〉0．05）,第Ⅳ组为0．0215,与前3组比较有显著性差异（P〈0．05）。可见,VEGF受体Flt-1 mRNA的表达与VEGF相似。二者均在Ⅰ组、Ⅱ组表达量无差异,具有较高的表达量,随着时间的延长没有明显变化;在Ⅲ组表达轻微下降,但与Ⅰ组和Ⅱ组无显著性差异（P〉0．05）;Ⅳ组的表达量显著下降（P〈0．05）,并且随着时间的延长至逐渐下降。[结论]反义抑制ghrelin对VEGF及其受体Flt—1的mRNA表达有下调作用。     

正常孕妇与妊高症患者胎盘中Ghrelin、GHS-R mRNA的表达研究

[目的]通过比较正常孕妇与妊高症患者胎盘中Ghrelin及其受体GHS-RmRNA水平的变化，探讨Ghrelin及其受体与妊高症的发病是否相关。[方法]采用实时荧光定量RT-PCR技术检测了正常孕妇胎盘和妊高症患者胎盘中Ghrelin及其受体GHS-RmRNA水平相对表达量的变化。[结果]正常孕妇胎盘组织中mRNA水平与妊高症患者胎盘组织中mRNA水平无显著性差异，但Ghrelin受体GHS-R在两者之间的mRNA水平有显著性差异（P〈0．05）。[结论]Ghrelin及其受体在妊高症患者和正常孕妇胎盘中表达的相对变化表明，Ghrelin受体缺乏可能成为妊高症发病的因素之一。     

食欲素A对绵羊卵巢颗粒细胞P-AMPK与P-ERK信号通路的影响

为研究食欲素A对绵羊卵巢能量代谢及生长发育的调节作用,在体外培养黄体化颗粒细胞,用浓度为0.05,0.10μg/m L的食欲素A刺激细胞后,分别于0,2,6,12,24 h提取细胞总蛋白,采用Western Blot法对P-AMPK及P-ERK的表达量进行检测。结果显示,食欲素A刺激细胞2 h,0.05,0.10μg/m L剂量组的P-AMPK表达量与对照组相比均极显著提高(P0.01),食欲素A刺激细胞6 h,0.05,0.10μg/m L剂量组P-AMPK的表达量均达到最高值(P0.01),且0.10μg/m L剂量组表达量明显高于0.05μg/m L剂量组;食欲素A刺激细胞2 h,0.05,0.10μg/m L剂量组的P-ERK表达量与对照组相比均极显著提高(P0.01),食欲素A刺激细胞24 h,0.10μg/m L剂量组的P-ERK表达量极显著高于平台期(6~12 h)(P0.01)并达到最高值。表明食欲素A通过P-AMPK和P-ERK途径参与黄体能量代谢及生长发育的调节,从而进一步参与生殖机能的调控。     

绵羊卵泡内Ghrelin的免疫组化定位

为探索Ghrelin在绵羊各级卵泡的存在和分布,采用免疫组织化学技术研究了Ghrelin多肽在绵羊卵泡中的分布情况。结果表明,初级卵泡、早期生长卵泡和晚期生长卵泡均有Ghrelin表达,卵母细胞呈阳性信号,而在各级卵泡中颗粒细胞Ghrelin呈弱阳性信号。各级卵泡内Ghrelin的表达,提示Ghrelin在卵泡发育过程中可能具有一定作用。     

Western blot鉴定背肩胛棕色脂肪黑皮质素4型受体的研究

旨在探究Western blot检测低丰度蛋白表达及试验过程对检测结果的影响。本试验以6~8周龄C57/BL6小鼠背肩甲棕色脂肪组织(Brown adipose tissue,BAT)为试验材料,以低丰度表达的黑皮质素4型受体(Melanocortin-4-receptor,MC4R)为检测蛋白,不同蛋白处理方法及电转膜液的组分、pH为试验对照条件,探究蛋白提取方法、电转液的组分与pH对转膜效率的影响。结果显示,转膜初始电压及功率与转膜液中十二烷基磺酸钠(SDS)含量及pH极显著相关,恒流转膜时,转膜液中SDS含量与转膜电压及功率呈反比,pH为8.0时的转膜电压及功率极显著高于pH 7.6(P0.01)和8.6的转膜电压及功率(P0.001);MC4R及相关蛋白在醇类物混合裂解液(20%Methanol+1%Triton+1%SDS+RIPA)的蛋白处理组的表达显著优于单独RIPA的蛋白处理组(P0.05),极显著优于Trizol的蛋白处理组(P0.01)。综上,于MC4R蛋白而言,在裂解液的基础上添加增强剂(Triton和SDS),可促进蛋白提取的效率,提高抗体检测的灵敏性。上述结果有助于相关操作人员对主要细节的认识,提高试验的灵敏及重复性。