醛化人“O”型红细胞的制备及其在兔出血症HA／HI试验中的应用

在兔出血症的检测和免疫监测中,血凝／血凝抑制试验（HA／HI）是常规有效的检测方法。针对人“O”型新鲜红细胞存在质脆易碎、保存期短的缺点,从醛化人的“O”型红细胞制备方法的优化、工作浓度、保存时间三个方面进行研究,并用于兔出血症的HA／HI试验,同时以新鲜的人“O”型红细胞作为对照。结果表明：经戊二醛-甲醛二次醛化的红细胞的醛化效果与只用戊二醛醛化的红细胞效果差异不显著,均优于甲醛醛化效果,且经戊二醛-甲醛二次醛化或戊二醛醛化后的红细胞不溶血,性质不变,易保存;在兔出血症HA/HI试验中,经戊二醛醛化人“O”型红细胞的试验效果与新鲜红细胞差异不大,结果稳定性好。     

獭兔变形杆菌、大肠杆菌混合感染的诊治

１发病情况浙江某养兔场存栏种兔６００余只，２００１年３月以后出生的仔兔，１１日龄后逐渐开始发病，仔兔２０日龄时不发病则可幸免，２０日龄后存活的仔兔一般能健活。发病期间共出生２４００余只仔兔，断乳成活２５０余只，仔兔死亡率近９０％，给畜主造成了重大的经济损失。其间畜主在饲料中添加土霉素、氯霉素、蒽诺沙星等药物，对病兔采用庆大霉素、氯霉素等药物治疗，均没有明显的疗效。２剖检病变仔兔外观后躯、腹部及两后肢大腿内侧，沾满黄色的粪便，肠系膜淋巴结水肿，肠壁出血、水肿。３实验室诊断将病兔肝脏接种于麦康凯琼脂…     

应用微量凝集法检测家兔大肠杆菌抗体水平的试验

本试验应用兔源致病性大肠杆菌 E1、E2、E7株的培养物经 12 1℃高温处理 2 h,制成含 0 .5 %石炭酸生理盐水的大肠杆菌“O”抗原悬液 ,抗原凝集效果呈现出最佳的检测工作浓度为 12亿细菌 / m l,应用该方法检测免疫过兔大肠杆菌疫苗的家兔血清抗体峰值达 1∶ 12 8,而从非免疫兔和免疫过兔瘟、多杀性巴氏杆菌病、魏氏梭菌病疫苗的兔血清中未能检测出兔大肠杆菌抗体     

鸭沙门氏菌的分离与鉴定

禽沙门氏菌病是由沙门氏菌属中的一种或多种引起禽类急性或慢性疾病的总称.沙门氏菌的血清型复杂,到目前为止,大约有2 400多个血清型,而感染禽类的主要有鼠伤寒沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鸭沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌等几个血清型.……     

兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病(A型)三联浓缩灭活疫苗的研制

通过对抗原的浓缩 ,试制成功兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病 (A型 )三联氢氧化铝浓缩灭活疫苗。将该三联疫苗按每只 1ml的剂量免疫家兔 ,2 1d后效力试验结果表明 ,对兔病毒性出血症的保护率为 10 0 % ;对兔巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病 (A型 )的保护率均达 80 %以上 ,且对上述 3种病的免疫期为 180～2 10d(即 6～ 7个月 )。该疫苗 4～ 8℃保存 15 0d(5个月 )后保护力几乎没有下降     

检测兔出血症病毒抗体胶体金试纸条的研制及初步应用

利用免疫层析技术建立快速检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的方法,将胶体金标记重组RHDV VP60蛋白,抗VP60单抗A3C和金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)分别包被质控线(C线)和检测线(T线),通过检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清优化试纸条制备条件,并验证其性能及与血凝抑制试验的符合率。结果显示,试纸条检测阳性血清时T线、C线颜色深度相同,强阳性血清T线比C线颜色深,弱阳性血清T线比C线颜色浅,阴性血清T线不显色、C线显色,检测强阳性、阳性、弱阳性、阴性血清与血凝抑制试验的符合率分别为93.75%、88.75%、91.25%、95.00%,总的符合率为91.54%;该试纸条具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,为兔病毒性出血症流行病学调查和抗体水平监测提供了有力的检测工具。     

兔支气管败血波氏杆菌菌毛粗提物3种抗体检测方法的建立及比较

利用超声波处理结合TritonX-100溶解法制备粗提的菌毛抗原,建立了3种用于支气管败血波氏杆菌的抗体检测方法:琼脂免疫扩散试验(AGID)、玻片凝集试验(SAT)、间接血凝试验(IHA)。临床检测了458份兔血清样品,结果显示:HA试验的阳性检出率最高,为73.36%(336/458),AGID试验阳性63.54%(291/458),SAT试验阳性61.79%(283/458),三者平均阳性为57.20%(262/458);IHA与AGID的符合率为90.17%,IHA与SAT的符合率为86.68%,AGID与SAT的符合率为89.08%。表明IHA试验更为敏感,可用于支气管败血波氏杆菌的血清学监测。     

检测兔出血症病毒抗体间接ELISA方法的建立

为建立检测兔出血症病毒(RHDV)抗体的间接ELISA方法,应用杆状病毒表达系统表达的RHDV VP60包被酶标板,经间接ELISA的最佳反应条件优化试验确定:抗原的包被浓度为4.62μg/ml,标准阴、阳性血清稀释度为1∶200,封闭液选用2%明胶;羊抗兔IgG最佳稀释度为1∶4 000。阻断试验、特异性试验、敏感性试验、重复性试验结果显示,该方法具有较高的特异性、敏感性和重复性。用建立的ELISA方法与血凝抑制试验对临床血清样品进行检测,结果显示,ELISA与HI检测兔血清的RHDV抗体阳性率分别为84.7%(955/1 127)和76.0%(857/1 127),符合率为91.3%。该方法的建立为检测RHDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、快速、操作简便经济的检测方法,为兔出血症免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。     

中药成分复方对兔外周血淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-10的mRNA表达以及兔出血症疫苗免疫效果的影响

【目的】研究两个中药成分复方（cCHMIs）的免疫增强作用和机理。【方法】选择黄芪多糖、淫羊藿多糖、蜂胶黄酮和人参皂苷4种中药成分组成两个复方,用MTT法和荧光定量RT-PCR法测定它们对兔外周血淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-10 mRNA的表达影响;并将两个复方作为佐剂,配合兔出血症疫苗免疫幼兔,以铝胶苗和无佐剂苗为对照,分别于免疫后7、14、21、35、49 d用MTT法和血凝抑制法测定外周血淋巴细胞增殖和血清抗体的动态变化,于免疫后63 d测定免疫器官指数和攻毒保护率。【结果】两个复方在体外均可以显著促进淋巴细胞增殖,提高淋巴细胞IFN-γ、IL-10 mRNA的表达;作为佐剂,两个复方可以显著提高免疫兔的血清抗体效价,促进体内淋巴细胞增殖,显著促进圆小囊、肠淋巴结等免疫器官的发育,有较高的攻毒保护效果。【结论】两个复方中药成分具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂。     

嵌合双串联OVA T细胞表位的RHDV VP60蛋白免疫特性研究

为研究RHDV VP60作为载体容纳外源片段以及递呈外源T细胞表位的能力,将双串联卵清蛋白T细胞表位插入N端、C端以及替代N端氨基酸的方式获得3种嵌合蛋白,进行免疫试验。3种嵌合蛋白分别命名为DN1、DN2和DC,将蛋白进行浓缩、纯化及定量,利用透射电镜观察VLPs的形成,发现均可形成形态大小与VP60相似的VLPs。将3种嵌合蛋白分别腹腔注射C57BL/6雌性小鼠,利用间接ELISA检测首免后0、4和6周小鼠血清样品中VP60特异性抗体,结果表明嵌合蛋白组与VP60组均能够诱导产生较高水平的抗VP60特异性抗体,2组间无显著差异。首免后6周,利用合成的OVA多肽刺激脾淋巴细胞,ELISPOT检测特异性IFN-γ的分泌水平,结果表明3种嵌合蛋白均能诱导特异性IFN-γ的分泌。该研究扩展了VP60作为载体可携带的外源片段的耐受性及有效递呈T细胞表位的能力,为VP60-VLPs展示系统的研究提供了理论依据。