兔源多杀性巴氏杆菌C51-17株ompA基因表达与免疫原性鉴定

[目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C51-17株ompA基因表达与蛋白免疫原性鉴定.[方法]根据GenBank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompA基因,开放阅读框包含l 062 bp碱基,插入到pGEX-6p-1质粒,构建成功重组表达载体pGEX-dompA,转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导高效表达出多杀性巴氏杆菌成熟重组外膜蛋白ompA.[结果]表达产物经SDS-PAGE分析,重组多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompA分子量在63 ku,Western blot分析显示,重组蛋白能与兔抗多杀性巴氏杆菌高免血清呈现免疫反应,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫活性.[结论]获得的重组蛋白为家兔多杀性巴氏杆菌病诊断试剂盒和疫苗的进一步研究奠定基础.     

2012年广东省兔产业初步调研报告

为了解广东省兔产业发展的现状和特点,作者于2012年9月对广东省兔产业发展情况进行了调研。通过此次调研,基本了解了广东省兔产业上、中、下游各个环节主体的技术和经济需求,有助于更加准确地把握该省兔产业的发展。1调研对象调研组首先总体了解了广东省兔用疫苗销售情况,通过广东养兔论坛、QQ群与广东从事兔业相关人员进行交流,基本了解广东省养殖情况,然后前往广东省广州市、云浮市新兴县、信宜市水口镇、钱排镇、佛山     

兔源抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抗体的制备及初步应用

为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a(+)载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21(DE3),筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Western blot鉴定后免疫小鼠。结果显示,成功扩增Bcl-2编码序列并构建了pET-32a-Bcl-2表达载体;SDS-PAGE结果显示,在16℃,5 h,0.5 mmol/L IPTG的表达条件下,重组蛋白Bcl-2能够高效可溶性表达;Western blot结果表明纯化后的表达产物为高纯度的Bcl-2重组蛋白,将该蛋白质免疫小鼠后获得了特异性抗体,该抗体能够特异性识别重组Bcl-2蛋白,并应用该抗体鉴定RK13-B细胞中Bcl-2蛋白的过表达。     

兔NF-κB p50蛋白质的原核表达及鉴定

为获得可溶性表达的兔NF-κB p50蛋白,本研究对兔p50基因进行大肠杆菌密码子优化及合成,并连接于原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌Origami B(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-p50融合蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,GST-p50蛋白主要以可溶形式高效表达。经谷胱甘肽S转移酶(GST)磁珠纯化及蛋白免疫印迹(western blot)鉴定,所表达的GST-p50蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步开展兔NF-κB互作蛋白及信号通路的研究奠定了基础。     

一例仔兔脑积水病的诊治

１基本情况辽宁省某兔场饲养了１５０只成年獭兔，１９９８年春季繁殖阶段发现仔兔长到１０日龄后出现颅骨突起，逐渐变大，呈鹅瘤状，生长速度减慢，眼瞎或睁不开，病兔逐渐死亡，发病率高达７０％左右。种母兔有不孕、流产等现象出现。１９９８年５月停止繁殖，１２月后...     

患兔流行性腹胀病家兔肠道菌群结构的ERIC-PCR指纹图谱分析

[目的]建立患兔流行性腹胀病家兔肠道细菌的DNA指纹图谱,并分析其肠道菌群结构特征的整体差异。[方法]提取流行性腹胀病兔及健康兔肠道内容物细菌总DNA,应用肠杆菌基因间重复共有序列基因扩增技术(ERIC-PCR)建立肠道菌群的DNA指纹图谱,并分析其整体差异。[结果]病兔大肠样本DNA条带明显少于健康兔对照,而小肠样本在二者间无明显差异,说明病兔与健康兔大肠肠道菌群存在整体差异。病兔大肠样本DNA在约350 bp处出现1条主带,同时伴有若干较弱的带,而健康兔对照大肠样本DNA条带均无明显规律。病兔大肠肠道的微生物群落多样性指数为(2.03±0.49),健康兔大肠肠道的微生物群落多样性指数为(3.30±0.31),差异极显著(P0.01)。[结论]兔流行性腹胀病发病兔大肠中肠道菌群结构多样性降低,可能存在单一或几种特定的肠道优势菌群。     

近年我国兔瘟流行特点分析与疫苗研究动态

兔瘟是由兔病毒性出血性败血症病毒引起的一种急性、高度接触性、高致死性的疾病,对养兔业的危害巨大。介绍了兔瘟流行的特点及兔瘟疫苗的研究进展,分析了兔瘟疫苗免疫失败的原因,提出了综合防治的措施。     

波杂山羊绿脓杆菌和肠球菌的分离与鉴定

江苏省溧阳某羊场2007年6～7月间发生了一起疫情,部分波杂山羊尤其羔羊出现连续发病和死亡.采取病死羊病料做病原分离、纯化,对纯化的分离菌开展培养特性、菌体形态特性、生化特性鉴定及对ICR小鼠致病性实验、药物敏感性试验等工作.根据以上试验结果,分离菌鉴定为波杂山羊的绿脓杆菌和肠球菌.     

兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果

用RT—PCR方法扩增兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白VP60基因,通过克隆、转化得到重组穿梭载体Bacmid—VP60,用此质粒转染Sf9昆虫细胞,得到重组病毒rAcV—Bac—VP60,经RT—PCR、IFA、SDS-PAGE、Western blotting、HA和HI鉴定,结果显示重组VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达。在不加任何佐剂的情况下,用表达的蛋白免疫3月龄非RHD免疫兔,结果显示,免疫后21天,兔体内可产生抗RHDV抗体,抗体血凝抑制效价为2^6～2^7,该抗体可以抵抗血凝效价为2^10致死剂量RHDV强毒的攻击,本研究为兔病毒性出血症基因工程疫苗的研制奠定了基础。