MALDI-TOF MS法快速鉴定猪、鸡源大肠杆菌和肠球菌的研究

本研究考察了培养基、培养时间对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF MS)快速鉴定猪、鸡源大肠杆菌和肠球菌的影响。结果表明:在哥伦比亚血琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基和肠球菌显色营养琼脂培养基上培养对粪肠球菌、屎肠球菌的鉴定没有显著区别;在哥伦比亚血琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基上培养对大肠杆菌的鉴定没有显著区别,而麦康凯培养基则不适合大肠杆菌的快速鉴定。大于24h的培养时间对大肠杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌3种细菌快速鉴定均有不同程度的影响,其中对大肠杆菌的影响最为显著,而对粪肠球菌的影响最小。重复性实验中,大肠杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌的鉴定分值均在90%以上,批间、批内变异系数均小于5%,说明本实验方法稳定性和重复性良好。与传统的生化鉴定方法比较,MALDITOF MS法操作简单快速、准确,可有效提升动物源细菌分离鉴定的工作效率。     

鸡源大肠埃希菌的耐药性与分子分型研究

为了解规模化养殖厂鸡源大肠埃希菌的耐药性以及分子流行规律和特征,为该菌的分子溯源及风险评估提供依据,本研究收集2013-2014年上海地区养殖场分离的鸡源大肠埃希菌共计741株,采用微量稀释肉汤法分别对常用的9类13种抗菌药物进行药物敏感性测定,以了解大肠埃希菌的耐药表型。在筛选出多重耐药严重的菌株后,同时采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法及核糖体(RP)分型方法进行分子分型分析。结果显示,2013-2014年所分离的鸡源大肠埃希菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、大观霉素、四环素、多西环素、氟苯尼考、磺胺异噁唑、复方新诺明、氧氟沙星和恩诺沙星的耐药率较高,在50%以上,且主要为多重耐药菌株。用XbaⅠ酶切后进行PFGE分析,结果表明,29株鸡源大肠埃希菌可分为22个带型;EcoRⅠ酶切后的RP聚类分析结果表明,鸡源大肠埃希菌分为14个带型。鸡源大肠埃希菌耐药率较高,同一分型菌株的耐药谱型并非完全一致,菌株基因型呈多态性。     

气相色谱法测定兽药饲料添加剂中的维生素E含量

采用气相色谱法测定亚硒酸钠维生素E注射液及预混剂中维生素E含量。将注射液用1.0mL盐酸溶液(1→4)及8～10mL无水乙醇进行破乳,预混剂用正己烷加热回流提取法处理后,以正三十二烷为内标,色谱柱:硅酮(OV-17)为固定相,硅藻土为担体,涂布浓度为2%的不锈钢柱(3mm×2m),氮气流速60mL/min,氢火焰离子化检测器(FID)进行分析。方法的线性范围为0.30mg/mL～6.00mg/mL(r=0.9994),注射液和预混剂方法回收率分别为99.16%～100.14%,99.73%～100.48%,日内和日间相对标准偏差,注射液分别为1.61%～2.10%,1.05%～1.94%;预混剂分别为0.91%～1.03%,0.88%～1.14%。方法准确,可靠,分析结果令人满意。     

生鲜牛乳中β-内酰胺酶检测方法的比较试验

比较杯碟法、碘量法-比色法在检测生乳中β-内酰胺酶的可靠性。杯碟法采用国家指定方法,藤黄微球菌（CMCC （B）28001）在营养琼脂上传代培养备用。碘量法-比色法用上海优你生物科技有限公司提供的β-内酰胺酶定量检测试剂盒。两种方法在检测应用上都能提供可靠的结果,碘量法-比色法更适用于实验室快速筛检。     

2017-2021年上海市动物源粪肠球菌、屎肠球菌耐药性情况变迁分析

为了解上海地区动物源粪肠球菌、屎肠球菌对常见抗菌药物的耐药及其最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)变迁情况,采用微量肉汤稀释法对近五年采集的粪肠球菌、屎肠球菌进行10种常见抗菌药物敏感性测试。结果表明,458株粪肠球菌及283株屎肠球菌对头孢西丁、头孢噻呋及氧氟沙星耐药率较高(均高于60%),对青霉素、阿莫西林/克拉维酸及万古霉素的耐药率较低(均低于11%),粪肠球菌耐药率整体高于屎肠球菌,两者对氧氟沙星、头孢噻呋、氟苯尼考、庆大霉素、利奈唑胺、恩诺沙星的耐药率存在较大差异（耐药率差异为15%~44%）。五年间,粪肠球菌对阿莫西林/克拉维酸、氧氟沙星的MIC50及MIC90均呈下降趋势;屎肠球菌对阿莫西林/克拉维酸、头孢西丁及氟苯尼考的MIC50及MIC90均呈下降趋势。研究表明,近年来上海地区动物源粪肠球菌、屎肠球菌的耐药情况有好转趋势,仍需继续加强肠球菌耐药性监测。     

微波消解-火焰原子吸收光谱法测定饲料中铜铁锌锰含量

铜、铁、锌、锰是畜禽重要的营养微量元素 ,对畜禽造血 ,细胞生长 ,酶活性的激发 ,RNA、DNA和蛋白质合成以及促生长等方面都起着极其重要的作用。目前 ,饲料中铜、铁、锌、锰含量测定的前处理一般需要用干法 (饲料原料、配合料、浓缩料、含金属螯合物预混料 )和酸提取法 (预混料 )。干法前处理时间长 ,操作繁琐 ,试剂用量多 ;预混料酸提取法虽操作简便、时间短 ,但往往会提取不完全。为改进 ,我们采用硝酸 -过氧化氢 ( 4∶1 )对饲料样品进行微波酸消解前处理 ,然后用火焰原子吸收光谱法对饲料中铜、铁、锌、锰含量进行测定 ,取得了满意效…     

猪源粪肠球菌的基因型及耐药性分析

为了解上海地区规模化猪场中粪肠球菌的耐药性和基因型,2013年3月-2014年5月从上海地区10个规模化养猪场收集到分离鉴定的粪肠球菌133株,采用微量肉汤稀释法对12种抗菌药物进行药敏试验,采用PCR技术分别检测分离株中β-内酰胺类抗生素耐药相关基因(TEM)、氨基糖苷类抗生素耐药相关基因[aac(6’)/aph(2")和aph(3’)-Ⅲ和ant(6)-Ⅰ]、四环素耐药相关基因(tetM)、红霉素耐药相关基因(ermB和mefA)和万古霉素耐药相关基因(vanA和vanB)。结果显示,在133株粪肠球菌中,耐药基因ermB、tetM、TEM、ant(6)-Ⅰ、aac(6’)/aph2"、aph(3’)-Ⅲ、vanA的检出率分别为:95.5%(127/133)、91.0%(121/133)、63.2%(84/133)、45.9%(61/133)、42.1%(56/133)、24.1%(32/133)、3.0%(4/133);未检出mefA和vanB基因的菌株。分离菌株对12种抗菌药物的耐药性较为严重,且以6~9耐为主要耐药株,占81.2%。试验表明,上海地区猪源粪肠球菌多重耐药现象严重,携带抗菌药物相关耐药基因是导致分离株耐药的主要原因。     

微波消解-平台石墨炉原子吸收光谱法测定饲料中微量硒

通过优化消解溶剂和微波条件,确定了微波消解-平台石墨炉原子吸收法的测定条件。结果表明,以HNO3+HC lO4+H2O2作为微波消解溶剂最佳,在基体改进剂Mg(NO3)2和Pd(NO3)2存在下,可有效地消除基体的影响。建立的微波消解-平台石墨炉原子吸收光谱法测定饲料中硒的方法,硒浓度线性范围为5~100 ng/mL(r=0.999 2),检出限为0.53 ng/mL,回收率为88.7%~106.3%,RSD为5.9%。同时,用该检测方法测定饲料中硒具有较高的可操作性。     

滴定法测定亚硒酸钠维生素E预混剂中亚硒酸钠的含量

采用硫代硫酸钠滴定液(0.01mol/L)滴定,测定该预混剂中亚硒酸钠含量。结果表明,在8.0～12.7mg范围内,滴定亚硒酸钠的取用量与消耗的硫代硫酸钠滴定液体积呈良好的线性关系,其线性回归方程:Vi=2.3918×Mi-0.2878,r(相关系数)=0.9998,方法的平均回收率为99.5%,相对标准偏差(RSD)为0.8%。本法操作简便,结果准确,适合于亚硒酸钠维生素E预混剂中亚硒酸钠含量测定的质量控制。     

脉冲场凝胶电泳技术的应用及其发展趋势

<正>基因分型方法即分子分型方法,是用现代分子生物学技术分析菌株间基因组的相似程度,进而弥补表型分型在分型能力、重复性及分辨力上的欠缺〔1〕。脉冲场凝胶电泳(PFGE)是一种重要的分子分型技术,其工作原理是:大小不同的DNA分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间不同,一般较小的分子重新定向较快,在凝胶中移动快,大的DNA分子比小的DNA分子定向慢,在凝胶中