出口秦岭羚牛检疫

按照《中华人民共和国向日本出口展览用羚牛的卫生要求》,我们对赠送日本的4头秦岭羚牛实施为期90天的隔离检疫,并完成了对口蹄疫、蓝舌病、牛肺疫等12种疫病实验室检疫工作,4头羚牛检疫合格,均符合日本提出的要求,于2011年1月25日由西安咸阳机场启程到日本落户。     

口蹄疫琼脂扩散试验的研究和应用

为建立一种适于野外对无症状口蹄疫病牛的检疫方法,以便应用于对从云南入境的进口偶蹄兽实施检疫,我们用“O”型细胞弱毒和"Asia I”型乳鼠弱毒BHK_(21)细胞适应毒的细胞病毒悬液,以透析方法浓缩提纯,制备口蹄疫琼脂扩散抗原,用入境的受检牛血清样品作试验,部分材料同时进行血清中和试验和查毒试验(Probang test),证明了我们自制的琼脂扩散抗原对病牛可以全部检出,同血清中和试验完全一致,18个月间共检疫入境牛342头,剔除阳性后,均未造成口蹄疫的爆发。 自制的琼扩抗原没有型特异性,可出现两条沉淀线。当经加温灭能后,则仅与相对应的阳性血清出现沉淀线,而与异型血清不出现反应,具有型的特异性。我们建立的琼脂扩散试验不仅可用作检疫,並可用作口蹄疫定型。现将一年多来的试验研究报告如下。     

小反刍兽疫流行病学及防控研究进展

小反刍兽疫是山羊、绵羊以及一些野生小反刍动物的一种急性或亚急性接触性传染病,自从首次发生以来一直呈扩大趋势,成为了严重危害畜牧业生产安全的重大跨国动物疫病之一。诊断技术和疫苗接种是预防控制小反刍兽疫的重要手段,根据小反刍兽疫典型的临床症状可初步做出假设性诊断,但确诊需要实验室诊断技术的支持。论文从小反刍兽疫目前的世界分布情况、小反刍兽疫病毒的起源以及易感动物等方面阐述了该病的流行病学特征,介绍了小反刍兽疫病毒实验室诊断技术的研究进展及几种具有应用前景的小反刍兽疫疫苗,为该病的研究和有效防控提供依据。     

非洲马瘟病毒VP7基因的克隆与表达

为获得非洲马瘟病毒VP7蛋白,以用于制备AHS血清学诊断试剂并为AHS新型疫苗的构建奠定基础,笔者采用原核表达系统表达VP7蛋白。在GeneBank中查找非洲马瘟病毒VP7基因序列,人工合成VP7基因,将VP7基因片段克隆插入pBAD/Thio-TOPO表达载体,将重组质粒转入大肠杆菌TOP10。经测序鉴定,筛选获得VP7基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆,经L-Arabinose诱导表达VP7融合蛋白抗原。SDS-PAGE分析表明以终浓度为0.2%的L-阿拉伯糖进行诱导,4h后表达可达到高峰,融合蛋白质量约54.72kDa。Westernblotting检测和间接ELISA表明诱导表达的融合蛋白能与非洲马瘟病毒VP7单克隆抗体发生特异性反应,说明蛋白有特异的免疫学活性。     

云南绵羊衣原体病的病原分离及诊断研究

近几年来,云南省某羊场的绵羊群中,发生以流产、死胎、间质性肺炎和羔羊多发性关节炎等为主的病症,有的羔羊出生后就不能站立,直至死亡。为确诊此病,我们取患多发性关节炎羔羊的关节囊液作病原分离,并对分离物进行动物接种等检测,确认     

TaqMan~T-PCR对水疱性口炎病毒的鉴定检测

水疱性口炎分为印第安那型 ( Indiana)和新泽西型 ( New Jersey)。这两种血清型病毒的快速和可靠的鉴别对该病的诊断、检疫、分子流行病学调查和监测至关重要。文章按照 VSV核蛋白基因序列 ,设计了一对两型通用引物和两型各自特异性探针。研究建立了 VSV实时荧光定量 PCR检测方法 ,对 VSV细胞培养物、人工感染实验动物组织、血清样品 ,以及系列稀释的不同 TCID50 样品、其它相关或相似病毒进行鉴定 ,同时与常规 PCR、病毒分离试验作了比较。Taq Man○R RT-PCR的特异性和敏感性相当于或优于对照方法。重复性和稳定性试验证实 ,该方法可靠。每个试验中设立阳性、阴性对照和标准稀释度对照 ,使试验结果可对病毒 RNA作准确定量 ,并可在 4h内获得结果。研究结果表明 ,Taq Man○R RT-PCR方法是一种特异性强、敏感性高、快速安全的定量检测方法。因此 ,可以作为 VSV的快速检测和定型。     

羊痘病毒P32蛋白编码基因的克隆及表达

为获得山羊痘病毒膜蛋白重组P32抗原，根据其基因序列设计合成了1对特异性引物，对CaPVP32基因进行了PCR扩增，产物大小约为969bp；产物回收纯化后，将其克隆至pBAD／Thio—TOPO载体中，转化TOP10大肠埃希氏菌感受态细胞，与已报道的多株CaPVP32基因序列的同源性高达99％；相应地，氨基酸序列同源性为98％。经测序筛选出阳性克隆，该重组菌株经L—arabinose诱导，可稳定、高效地表达CaPVP32抗原。表达蛋白为融合蛋白，分子质量约51．53ku．     

水疱性口炎研究进展

水疱性口炎(VS)是由水疱性口炎病毒(VSV)引起的人畜共患的重大动物疫病.VS病毒生态学复杂,易感动物较多,传播媒介种类广,病毒可在一定区域内长期存在.VSV主要呈嗜上皮性,大量流涎是家畜感染最重要的临床症状,其特征为口腔黏膜、乳房皮肤及蹄冠部皮肤出现水泡及糜烂,人感染后出现类似流感的症状.由于其临床症状与口蹄疫不易区别,发病时容易引起国际贸易恐慌,因此,对VS诊断防治的研究有着重要的社会经济和公共卫生意义.文章从分子生物学特征、流行病学、诊断和防控4个方面对水疱性口炎的研究进行了综述.     

小反刍兽疫病毒竞争ELISA检测试剂盒生产工艺研究

为研究小反刍兽疫病毒（PPRV）竞争ELISA试剂盒的生产工艺,本试验利用昆虫细胞表达的PPRV核蛋白及其单克隆抗体,建立一种特异性高、敏感性强的PPRV竞争ELISA检测方法,并对该方法的各个步骤进行优化,确定该方法的最适条件,从而确定竞争ELISA的操作程序。并用该方法与OIE推荐的PPRV rC-ELISA抗体检测试剂盒同时检测来自西藏、内蒙古共977份临床羊、牛血清样本,结果显示特异性、敏感性、符合率分别达99.89%、93.82%、99.38%。本研究建立的PPRV竞争ELISA方法为该病毒检测试剂盒的研制奠定技术基础,为小反刍兽疫的防控提供科学依据。