根瘤菌类菌体的繁殖能力——Ⅰ.在三叶草根瘤中(Triflium repen L.)

采用单个原生质体分离和显微镜微室培养技术对白三叶草根瘤类菌体的繁殖能力进行了系统深入的研究。试验表明: 1.三叶草根瘤原生质体中的细菌形态包括:幼年期的杆状,未成熟期的长杆状以及成熟期的捧状、分枝状等典型类菌体形态。以上三种形态存在的相对比例取决于瘤龄和原生质体的大小。2.在渗透压保护条件下,从5周根瘤的原生质体中释放出的菌体巾只有3.2%表现出繁殖能力。3.三叶草根瘤类菌体的繁殖能力随瘤龄和原生质体的大小而异。来自幼小根瘤,只含有杆状形态的小原生质体具有较高的繁殖率;包含长杆状未成熟类菌体的中原生质体的繁殖率较低;而只有成熟类菌体的大原生质体表现出最低的繁殖率。4.显微镜微室培养的直接观察证明,即使有渗透压保护条件,已在形态上开始分化和成熟的类菌体均不能繁殖,只有在根瘤中形态上未分化的小杆菌才能繁殖。5.根瘤小杆菌分裂繁殖的世代时间随分裂代数的增加而逐步缩短。在经过6次分裂之后,其繁殖速度才与培养体根瘤菌相当。6.荧光抗体试验证实根瘤中的菌体及其分离菌株与供试菌株在主要表面抗原反应上的同一性。     

导入detABD和nifA基因对苜蓿中华根瘤菌共生固氮效率的影响

将克隆有四碳二羧酸转移酶基因dctABD、nifA基因和发光酶基因luxAB的重组质粒pHN307经三亲本杂交分别导入苜蓿根瘤菌HNM1、HNM2、HNM4和1021中得到HNM1(pHN307)等4个转移接合子,进一步比较研究了pHN307在自生培养条件下传代的稳定性,并采用本室改进的双层钵无菌砂培盆栽法,分别将4个转移接合子和出发菌接种到苜蓿品种草原1号,公农1号和图牧2号.结果表明,只有用转移接合子HNM4(pHN307)和1021(pHN307)接种到草原1号和图牧2号的植株鲜重和干重明显优于出发菌.     

紫色土硅酸盐细菌的遗传多样性研究

硅酸盐细菌是土壤中一类能分解硅酸盐类矿物，破坏其晶格结构，使矿物钾转化成有效钾释放出来供植物生长的细菌。它不仅能溶磷解钾，亦有固氮的作用。目前的种类主要有，环状芽孢杆菌（Bacillus circulans）、胶质芽孢杆菌（B．rmtcilaginosus）和土壤芽孢杆菌（B．edaphicus）三个种的菌株。由于硅酸盐细菌的独特作用，已广泛应用于采矿、冶金、微生物肥料、饲料工业上。我国在硅酸盐细菌的生物学功能方面已进行了大量的工作，尤其是在硅酸盐细菌作为生物肥料方面，但是对硅酸盐细菌的分类地位和遗传多样性研究较少。贺积强等研究表明，紫色土硅酸盐细菌的理化性质和解磷解钾特性存在差异，本研究应用RAPD、TP-PCR和16S rRNA PCR-RFLP进一步分析了这些硅酸盐细菌的遗传多样性及系统发育地位，以期弄清其遗传背景。     

高固氮基因工程大豆根瘤菌的研制及其增氮效应

通过构建快生型大豆根瘤菌Ｂ５２的基因文库和三亲本杂交，将增效因子ＤＮＡ片段导入优良的慢生型大豆根瘤菌２２－１０中，获得携带来自快生菌增效因子ＤＮＡ片段的工程菌株ＨＮ３２，经盆栽和小区试验，证明基因工程菌株ＨＮ３２比出发菌株２２－１０平均增产６％，比对照平均增产１３．２％～１６．９％，相当于每公顷施７５～１５０ｋｇ尿素．１９９２～１９９５年，在广西推广应用基因工程大豆根瘤菌ＨＮ３２２．１６万ｈｍ２，每公顷平均增产１９％，投入产出比１：３０。增加经济效益１４０９．８万元。     

两株发光酶基因标记的重组大豆根瘤菌在土壤缩影中的存活研究

研究了发光酶基因 (luxAB)标记的重组费氏中华根瘤菌HN0 1DL、大豆慢生根瘤菌TA113QD与其出发菌株HN0 1、TA11在灭菌和未灭菌土缩影中的存活动态。结果表明 :HN0 1DL和TA113QD在灭菌土缩影和未灭菌土缩影中的存活动态特征显著不同 :标记菌株在灭菌土缩影中的早期存活数量一般有所下降后而保持相对稳定的较高存活水平 ,而在未灭菌土缩影中其存活数量在整个跟踪过程中持续下降至约 4 5logcfug- 1 土。在本实验中未发现供试标记重组菌株和出发菌株在土壤缩影中的存活性存在显著差异     

金针菇与凤尾菇科间原生质体融合研究

金针菇与凤尾菇皆属四极生异宗结合食用菌,其双核异核体菌株都具有锁关联合遗传标记本研究以金针菇和凤尾菇的双核异核菌株为亲本,将热灭活的凤尾菇原生质体,以ＰＥＧ为融合剂,在高下,高ＰＨ值条件下,与金针菇原生质体融合,结果从１３２９个再生菌株中选择出６株双亲细胞质和细胞核都融合的无锁状联合菌株,经融合核分裂技术处理后,融合核分裂成为具有锁状联合的双核菌株。     

以luxAB为报告基因的大豆根瘤菌的竞争结瘤研究

 将来自pHN101的luxAB基因和来自pTR102的parCBA /DE基因,经过一系列中间载体整合到PLAFR3上构建成广宿主、稳定性质粒PHN158。通过三亲本杂交将pHN158导入费氏中华根瘤菌得到4株能在癸醛的激发下发出荧光的转移接合子WZRL、HWRL、HZRL和WWRL。将它们与3株大豆慢生根瘤菌WHB1、WHB2和WWB组配成12对组合,并以黑龙33和Williams为宿主以luxAB为报告基因进行竞争结瘤试验。结果表明,费氏中华根瘤菌与大豆慢生根瘤菌之间的平均竞争结瘤能力相当;同类型根瘤菌不同菌株之间的竞争结瘤能力存在着显著的差异;同时根瘤菌的竞争结瘤能力也明显受到宿主的影响。表明费氏中华根瘤菌与大豆慢生根瘤菌之间的竞争结瘤是一个菌株之间、菌植之间复杂的相互作用的过程。     

从植物根际分离的8株细菌的促生作用与初步鉴定

从植物根际分离到8株有明显促生作用的细菌,经形态和生理生化试验初步鉴定为芽孢杆菌属.采用L16(2)15正交试验对由供试菌株组成的混合菌剂的促生效应进行了分析,选出对供试蔬菜有促生效应的菌株,并分析了其间的交互作用.     

nolA基因在费氏中华根瘤菌中的验证及其对结瘤的影响

根据已公布的大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)nolA基因序列（AF322013),设计了一对保守区的特异性引物和1对非保守区的全长基因引物,通过PCR扩增发现在个别费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)中也存在nolA基因。进一步的结瘤抑制试验结果表明：含有nolA基因的费氏中华根瘤菌也有种群密度依赖调节方式的结瘤抑制现象,本结果对提高商品化根瘤菌剂的竞争结瘤能力具有重要的参考价值。     

两种扩增rDNA片段RFLP图谱用于快生型大豆根瘤菌的遗传多？…

根据Ｅ．ｃｏｌｉ基因组ｒＤＮＡ保守序列设计的两对引物,分别用于扩增３０株来源于我国不同地区的快生型大豆根瘤菌菌株。扩增产物经几种较少识别序列的内切酶消化后,得出特征的限制性内切酶酶切图谱。该图谱可用于供试菌株种水平的鉴定及菌株ｒＤＮＡ分子的遗传多样性研究。选用来源于Ｅ．ｃｏｌｉ基因组１６ＳｒＤＮＡ保守序列的一对引物将所有供试菌株都扩增出一条１．５ｋｂ的带,经四种内切酶消化后发现：新疆地区来源的菌株