导入dctABD和nifa基因对苜蓿中华根瘤菌共生固氮效率的影响

将克隆有四碳二羧酸转移酶基因dctABD、nifA基因和发光酶基因luxAB的重组质粒pHN307经三亲本杂交分别导入苜蓿根瘤菌HNM1、HNM2、HNM4和1021中得到HNM1（pHN307）等4个转移接合子，进一步比较研究了pHN307在自生培养条件下传代的稳定性，并采用本室改进的双层钵无菌砂培盆栽法，分别将4个转移接合子和出发菌接种到苜蓿品种草原1号，公农1号和图牧2号结果表明．只有用转移接合子HNM4（pHN307）和1021（pHN307）接种到草原1号和图牧2号的植株鲜重和干重明显优于出发菌     

华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)研究进展

综述了华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)遗传多样性、质粒多样性、质粒的功能、结瘤因子、结瘤基因、胞外多糖等方面的研究进展。这类菌只能在紫云英上结瘤,1997年并入Mesorhizobium。选取大量菌株进行REP-PCR、16S和23S rDNAPCR-RFLP等分析,揭示其分为16种16S rDNA基因型。选用不同16S rDNA基因型的部分代表菌株进行部分16S rDNA测序。能够在紫云英上结瘤的根瘤菌可以分为2个类群。表明这类菌具有遗传多样性,存在不同的种。它们多数含共生质粒,共生质粒定位于最大或次大质粒上,质粒数1~5个不等,其分子量范围在53~906 kb之间。质粒缺失菌株表现为不结瘤(Nod-)和结瘤而不固氮(Nod ,Nif-)。某些质粒缺失还影响LPS合成、抗酸性、竞争结瘤能力。其结瘤因子能诱导紫云英根毛变形,它们的结瘤因子结构类似于苜蓿根瘤菌的结瘤因子。它们的结瘤基因具独特性,nodA与nodBC分隔一定距离,且具有保守性。它们产生的胞外多糖在侵染结瘤过程中发挥重要作用。     

根瘤菌质粒的研究进展

快生型根瘤菌中普遍存在1到多个数量不等的内源质粒(indigenous plasmid)。其中,含有根瘤菌结瘤和共生固氮所必需的基因的质粒被称之为共生质粒(pSym);其它的质粒被称为非共生质粒(non-pSym)。根瘤菌的内源质粒一般都非常稳定,能够在不同种属的根瘤菌之间和土壤杆菌中进行转移。根瘤菌质粒在转移、复制过程中可能发生重组等现象。本文综述了根瘤菌共生质粒和非共生质粒的功能,以及根瘤菌质粒的转移、复制等特性。     

广谱根瘤菌NGR234在大翼豆根瘤中的分化和繁殖能力

利用盆栽法验证了广谱根瘤茵NGR234在大翼豆、白灰毛豆、扁豆、豇豆和大豆上的结瘤与固氮能力,用光学显微镜和电镜比较了其根瘤类菌体的形状,并采用稀释平板测数和显微微室培养法时大翼豆根瘤类菌体的繁殖能力进行了深入的比较研究.结果表明,根瘤菌NGR234不能在大豆上结瘤,在白灰毛豆上结无效瘤,能在扁豆、豇豆和大翼豆上结有效瘤,其根瘤类茵体以棒状类茵体为主.对大翼豆根瘤压碎汁的微室培养表明,不同瘤龄根瘤的类茵体的形态和繁殖率略有差异,杆状的根瘤小杆菌和多数棒状类茵体均能在人工培养条件下繁殖,其中类菌体的繁殖率随瘤龄的增加而增大,并在衰败前的根瘤中有明显的增加.     

固氮花生根瘤菌HN14的构建

利用三亲本杂交，将带有肺炎克氏杆菌ｎｉｆＡ基因的重组质粒ＰＣＫ３导人慢性型花生根瘤菌１４７－３，初筛获得的转移接合子ＨＮ１４。其在盆栽试验中的共生固氮效率明显优于出发菌株１４７－３。     

Bradyrhizobium japonicum工程菌株HN32中外源质粒pHN32增效作用的验证

将Bradyrhizobium japonicum HN32菌株中的外源质粒pHN32,通过三亲本杂交转入大肠杆菌HB101中,继而转入Bradyrizobium japonicum22—10中,得到一系列抗性杂交子HNF1,HNF3及HNF5,检测其中所含质粒,并以22—10,HNF5及HN32进行盆栽试验,pHN32的增效作用得到了证实。     

外源共生质粒pJB5JI导入紫云英根瘤菌（Rhizobium huakuii）中的稳定性

将碗豆根瘤菌共生质粒ｐＪＢ５ＪＩ导入紫云英根瘤菌７６５３Ｒ及其消除了共生质粒的突变株７６５３Ｒ＋１。两种类型转移接合子在人工合成培养基上繁殖时，ｐＪＢ５ＪＩ能稳定存在，但从它们在碗豆或紫云英上所结根瘤的分离物中，只有部分检测到ｐＪＢ５ＪＩ。以转座子Ｔｎ５及首蓿根瘤菌ｎｏｄ基因为探针，对未检测到ｐＪＢ５ＪＩ质粒的根瘤分离物７６５３ＲＡ９及７６５３Ｒ＋１Ｐａ，进行ＤＮＡ同源性分析，结果表明ｐＪＢ５ＪＩ质粒并没有全部丢失，很可能全部或部分整合到了受体紫云英根瘤菌的染色体中。     

导入外源DNA片段的花生根瘤菌高效基因工程菌株的构建

以柯斯质粒ｐＬＡＦＲ１为载体先构建快生型花生根瘤菌８５－７菌株总ＤＮＡ的基因文库。在协助质粒ｐＲＫ２０１３帮助下用此基因文库分别同菌株８５－７和另一株慢生型花生根瘤菌菌株Ｃ０２－５作三亲本杂交。转移接合子接种沙培条件下生长的花生，通过结瘤试验初筛选和复筛选，共筛选出３株工程菌ＨＮ１１，ＨＮ１２（以８５－７为受体）和ＨＮ１３（以Ｃ０２－５为受体）。其每植株根瘤的固氮酶活分别比出发菌株的提高３０２％（     

大豆根瘤菌的分离与筛选

采用盆栽结瘤实验法对从6省市采集的18份土样中分离的160株大豆根瘤菌进行了结瘤与共生固氮效率的比较测定，从中筛选出固氮效率较高的菌株ZX20和SMH12。通过测定2株菌的竞争结瘤能力，确认其可以进入小区田间试验。     

根瘤菌类菌体繁殖能力的研究历史

类菌体是根瘤菌侵入豆科植物根系后,在植物细胞内分化成的某种呈棒状,分枝状,球状或杆状等的特殊的共生固氦形态。类菌体是根瘤菌固氮的直接作用者,对于类菌体生理生化特性的研究,历来就是生物固氮研究中的一个重要课题。