EIAV Rev蛋白拮抗eqTRIM5α介导的AP-1信号通路的机制研究

为探究马传染性贫血病毒(EIAV)附属蛋白Rev负调控Tripartite motif-containing protein 5α(TRIM5α)介导的AP-1信号通路的机制,本研究将pEIAV-Rev-HA和pcDNA3.1质粒分别与含TRIM5α基因的质粒及pGL3-AP-1-Luc(AP-1报告质粒)共转染HEK 293T细胞,采用荧光素酶试验检测Rev对TRIM5α激活的AP-1信号通路的影响;将pEIAV-Rev-HA和pcDNA3.1质粒分别与含TAK1、TAB2、P38和c-Jun基因的质粒及pGL3-AP-1-Luc共转染HEK 293T细胞,采用荧光素酶试验检测Rev对TRIM5α下游转导分子(TAK1、TAB2、P38、c-Jun)激活的AP-1信号通路的影响;将pEIAV-Rev-HA和pcDNA3.1质粒分别与含TAK1、TAB2、P38基因的质粒共转染HEK293T细胞,利用western blot试验分别检测TAK1、TAB2、P38的表达水平;将pEIAV-Rev-HA和pcDNA3.1质粒分别与含P38基因的质粒共转染HEK 293T细胞后加入蛋白酶体抑制剂MG132,利用western blot检测P38蛋白的表达情况。结果显示,共转染EIAV-Rev-HA实验组中TRIM5α对AP-1的激活倍数为0.4,而共转染pcDNA3.1对照组中相应的激活倍数为26.0;共转染pEIAV-Rev-HA实验组中,TAK1、TAB2、P38和c-Jun对AP-1信号通路的激活倍数分别为7.7、0.1、0.6、9.8,而共转染pcDNA3.1对照组中对AP-1信号通路的激活倍数分别为60.0、1.5、6.3、12.0;转染pEIAV-Rev-HA+pP38-Flag组与转染pcDNA3.1+pP38-Flag组相比,前者P38蛋白的表达量显著降低;加入蛋白酶体抑制剂组则恢复了P38蛋白的表达。上述结果表明,EIAV Rev显著下调eqTRIM5α及其下游转导分子TAK1、TAB2、P38激活的AP-1信号通路,但不显著下调c-Jun激活的AP-1信号通路;EIAV Rev通过蛋白酶体途径降解P38蛋白的表达而抑制eqTRIM5α激活的AP-1信号通路。本研究结果为理解EIAV与宿主蛋白相互作用提供参考依据。     

长枝木霉T6菌株对美洲南瓜枯萎病菌的抑制作用

为探明长枝木霉T6菌株对美洲南瓜枯萎病菌的作用机理，采用对峙培养、显微观察、孢子萌发、室内防效测定等方法研究其抑制能力和防治效果。结果表明：长枝木霉T6菌株对美洲南瓜枯萎病菌具有较强的抑制作用，对峙培养7 d时，长枝木霉T6菌株对该病菌的抑制率为60.09%；显微形态观察表明：长枝木霉T6菌株菌丝与美洲南瓜枯萎病菌菌丝发生缠绕；长枝木霉T6菌株发酵液对美洲南瓜枯萎病菌分生孢子萌发具有明显的抑制作用，抑制率为31.00%；长枝木霉T6菌株对美洲南瓜枯萎病具有较好的防治效果，室内盆栽防效为69.06%。     

棉花角斑病菌V8高效电转化条件的探索

对去甲基化氮胞苷(5-AZA)的最佳浓度以及影响棉花角斑病菌[Xanthmonas campestris pv.malvacearum(Xcm)]V8电转化效率的诸多因素进行逐一研究,以期获得高效的电转化条件。结果表明,选取100μmol/L的5-AZA驯化处于对数中期的V8制备感受态细胞;保证电压2.1 kV、50μg/mL质粒7μL、4℃预冷复苏培养基SOC、振荡复苏培养4～5 h时,V8的电转化效率高达5×102/μg DNA。     

宽叶独行菜提取物对大鼠胃肠动力及SP和Ghrelin的影响

为研究宽叶独行菜(Lepidium latifolium L.)提取物对胃肠动力障碍大鼠的影响,并初步探讨其作用机制,选取24只SPF级SD大鼠,体重180～200 g,随机分成空白组、模型组和受试药物组,每组8只,雌雄各半,各组大鼠灌胃给予相应的药物,受试药物组每只大鼠灌胃2 mL宽叶独行菜提取物溶液(0.36 g/mL),空白组和模型组每只大鼠灌胃等体积去离子水。每天1次,连续灌胃6 d后禁食不禁水24 h,第7天正常给药1 h后,模型组和受试药物组大鼠腹腔注射硫酸阿托品2 mg/kg,空白组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水。20 min后,所有大鼠均灌胃0.4 mL 2%蓝色葡聚糖-2000溶液,30 min后腹腔注射4 mL/kg的10%水合氯醛溶液麻醉大鼠,取材测定胃排空率和小肠推进率,ELISA法测定胃和十二指肠匀浆中P物质(SP)和饥饿素(Ghrelin)浓度。结果表明,与空白组比较,模型组大鼠胃排空率和小肠推进率极显著降低(P0.01),胃、十二指肠中SP浓度和胃中Ghrelin浓度无明显变化(P0.05),十二指肠中Ghrelin浓度极显著降低(P0.01)。与模型组比较,受试药物组大鼠胃排空率和小肠推进率均极显著升高(P0.01),胃中SP浓度显著升高(P0.05);胃中Ghrelin浓度和十二指肠中SP、Ghrelin浓度均极显著升高(P0.01)。表明宽叶独行菜提取物能改善硫酸阿托品致胃肠动力障碍大鼠的胃肠动力,提高其胃和十二指肠中SP和Ghrelin浓度可能是其发挥促胃肠动力作用的机制之一。     

代谢抑制剂与P450s抑制剂对上海青吸收噻虫嗪的影响

通过测定不同代谢抑制剂和细胞色素P450s抑制剂对上海青吸收噻虫嗪的影响,探讨噻虫嗪的吸收及代谢机制,为农药施用及提高药效提供理论依据。在10 mg/L噻虫嗪水溶液中加入不同浓度的不同种类代谢抑制剂和P450s抑制剂,水培上海青1 d后测定植株体内噻虫嗪含量。10、50μmol/L碳酰氰间氯苯腙和2,4-二硝基苯酚均能极显著降低上海青体内噻虫嗪含量,推测上海青吸收噻虫嗪过程中存在须要消耗能量的主动吸收。而含有10 mg/L胡椒基丁醚、1-氨基苯并三唑和马拉硫磷的处理组中噻虫嗪含量极显著升高,推测上海青体内含有能代谢噻虫嗪的P450多功能氧化酶。上海青吸收噻虫嗪过程需要能量的供应,进入体内的噻虫嗪会被细胞色素P450代谢。     

中国药典中5种标准菌生长曲线的测定

为测定《中国兽药典》(2015版)中5种标准菌的生长曲线,并对其方法的合理性进行讨论,参照《微生物学实验》(第4版)中细菌生长曲线的制作方法,以《中国兽药典》(2015版)规定的5种标准菌株大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉为研究对象,进行了菌株生长曲线的测定。结果表明:大肠埃希菌在1.5~4.5 h处于稳定期,金黄色葡萄球菌在1.0~5.5 h处于稳定期,铜绿假单胞菌在2.0~7.0 h处于稳定期,白色念珠菌在3.0~12.0 h处于稳定期,黑曲霉菌在96.0~110.0 h处于稳定期。多种标准菌株稳定期的测定完成,对相关微生物实验的进行具有重要的参考意义。     

浅析鸡大肠杆菌病的流行与防治

鸡大肠杆菌病是近年来养鸡业发病率最高、危害最为严重的疾病之一。它是由大肠杆菌中的某些致病菌株引起的一类疾病的总称，各个品种和各年龄的鸡均可发生。该病在养鸡厂已经普遍存在。鸡舍饲养密度大、通风不良、卫生不好、氨味大，饲料质量不佳或人工授精操作不当时均易诱发。一旦发病不好控制，病鸡无特异症状，多见腹泻、腹膜炎、羽毛松乱、两翅下垂、食欲下降、脐炎时见腹下垂。