基因芯片技术在细菌学研究中的应用进展

基因芯片技术的诞生是基于人类基因组计划的成果,是融微电子学、生物学、物理学、化学、计算机科学为一体的新技术.能够广泛应用于基因表达分析、突变检测、核酸多态性分析、基因测序和药物筛选等几乎所有的生物学研究领域.综述了基因芯片技术的发展历史、原理、检测细菌的程序、在细菌学研究中的应用、存在的问题及其应用前景.     

广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征调查分析

【目的】了解广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征的感染情况,为广西贵港地区猪繁殖与呼吸障碍综合征的监督及防控工作提供参考。【方法】通过对Nsp2基因的分析,合成新的特异性诊断引物,并利用RT-PCR的方法对广西贵港地区111个规模猪场采集的1865份扁桃体同时进行高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征和经典猪繁殖与呼吸障碍综合征的分子流行病学调查。【结果】25个猪场检出92份猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点总阳性率为22. 5%,样品总阳性率为4. 93%。其中9个猪场检测出24份高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点阳性率为8. 10%,样品阳性率为1. 29%; 18个猪场检测出68份经典猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒,场点阳性率为16. 2%,样品阳性率为3. 65%; 2个猪场同时检测出高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和经典猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒。【结论】广西贵港地区规模猪场感染猪繁殖与呼吸障碍综合征的现象较为严重。     

来源于巴马香猪的高致病性PRRSV分离株GP5基因测序与分析

为了解河池市巴马香猪规模场内的主要疫病流行病学情况,通过RT-PCR方法,从发病猪群采集了34份组织样品中检测出1份猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性,经基因扩增、序列测定、比对等试验得到GP5基因,阅读框为603bp,编码201个氨基酸,进行核苷酸、氨基酸同源性比对分析。结果表明,分离株与2015年广西施开创分离到的毒株核苷酸和氨基酸同源性最高,分别为98.7%和97.5%,亲源性最近。     

木耳总RNA提取方法研究

为了获得木耳总RNA理想的提取方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以木耳菌丝为试验材料,采用了CTAB法、RNA prep pure Plant Kit试剂盒和 Trizol法3种方法提取木耳总RNA。结果表明3种方法均能从木耳菌丝中提取分离到总RNA,然而Trizol 法能提取到纯度较高、完整性较好的总RNA,28S及18S带型清晰无弥散,A260/A280值为191,RNA 产率为68264 μg·g-1,提取的总 RNA 适用于 RT PCR等分子生物学试验研究。     

鹅副粘病毒病免疫程序探讨

研究先使用商品新城疫Ⅳ系弱毒苗对ND抗体检测为阴性的实验鹅进行首免和二免,再用鹅副粘病毒油乳剂灭活苗进行加强免疫。定期抽取血清用HI试验检测抗体滴度,并抽取部分有抗体滴度的鹅进行攻毒试验。结果表明:在一免后抗体滴度没有变化,而进行二免后,抗体滴度可达到3log2～4log2,加强免疫后达到10log2左右,且能抵抗强毒的攻击。     

2株鹅细小病毒的主要结构蛋白VP2基因的克隆和序列分析

将鹅细小病毒PJ分离株和XJ分离株接种于13日龄非免疫鸭胚,收集接毒后24～72h死亡的鸭胚尿囊液。根据Genbank已发表的鹅细小病毒B株基因组核苷酸序列设计1对引物,对2株鹅细小病毒毒株主要结构蛋白VP2基因进行PCR扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。结果表明:PJ株和XJ株VP2的核苷酸序列全长分别为2 044bp和2 050bp,PJ株与B株、XJ株、台湾株的同源性均为93.5%～96.7%,与YG株、哈尔滨株、广东株的同源性为88.7%左右,与匈牙利株的同源性仅为80.7%,而与番鸭细小病毒的同源性为74.8%～80.7%。XJ株与匈牙利株的同源性为83.5%,与番鸭细小病毒的同源性为76.8%～80.0%,与其他毒株的同源性为91.6%～98.3%。     

山羊痘病毒P32基因的克隆测序及序列分析

参考Genbank中的序列设计1对特异性引物对1株疫苗株和6株广西分离株的P32基因进行全基因序列测定和分析。结果显示,广西分离株间的核苷酸同源性为99．4％～100．0％,与疫苗株间的同源性为99．6％～99．9％,与Genbank中已发表山羊痘序列间的同源性为99．3％～99．8％;推导的氨基酸同源性为98．1％～100．0％、98．8％～99．7％、97．8％～99．4％;与国内疫苗毒株相比,广西分离株在100～105位缺失了6个碱基A,在651位所有广西分离株核苷酸的碱基全部由T变为C,647～652位核苷酸构成由TGTATA变异为TGTACA,多了1个限制性内切酶Bsp1407 I位点。研究结果为深入了解广西山羊痘分离株的分子特性以及山羊痘的诊断与防治奠定了基础。     

外源水杨酸对NaCl胁迫下老芒麦种子萌发和幼苗的影响

以老芒麦（Elymus sibiricus）为研究材料,探讨了不同浓度外源SA(0.25、0.5、1.0、1.5和2.0 mmol/L)对NaCl胁迫下种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明：在150 mmol/L NaCl胁迫下,外源添加0.25、0.5、1.0 mmol/L的SA均能减缓盐胁迫对老芒麦造成的抑制作用。综合评价分析表明,外源添加0.25 mmol/L的SA效果最为显著（P<0.05）,此时老芒麦的种子发芽势、根冠比、幼苗可溶性蛋白含量和POD活性分别提高了32.58%、21.15%、69.48%和81.09%,而丙二醛含量降低了73.40%。本研究表明在盐胁迫环境下,外源SA能通过提高老芒麦的抗氧化酶活性和消除由ROS引起的氧化损伤等方式维持其正常生长。本研究可为老芒麦在盐渍化土壤地区的推广、应用及生态治理提供一定的技术参考。     

益生菌和白龙颗粒对仔猪黄痢的影响实验

为研究益生菌和白龙颗粒对仔猪黄痢的影响,探索一种除疫苗接种预防仔猪黄痢外的预防途径,本实验给中小型规模养猪场和农村散养户共计150头待产母猪口服丁酸梭菌、白龙颗粒,结果7日龄内仔猪黄痢发病率显著低于对照组。表明给待产母猪口服丁酸梭菌、白龙颗粒可有效预防仔猪黄痢的发生,是预防仔猪黄痢的一种快捷、有效的途径。     

草地早熟禾SnRK2.2基因克隆及非生物胁迫响应分析

逆境胁迫期间蔗糖非发酵相关的蛋白激酶2(SnRK2)通过磷酸化在植物胁迫信号转导途径中起关键作用，参与代谢和应激信号之间的相互作用。为发掘并利用草地早熟禾(Poa pratensis L.) SnRK2家族基因，本研究利用RT-PCR技术得到SnRK2.2基因，借助生物信息学及实时荧光定量PCR技术分别对其进行分子特征、组织部位以及非生物胁迫下该基因表达模式的研究。研究结果：草地早熟禾SnRK2.2包含典型STKc_SnRK2结构域、蛋白激酶ATP结合信号区、N-肉豆蔻酰化位点等功能域，其与燕麦、小麦同源性最高；实时荧光定量PCR结果表明，草地早熟禾SnRK2.2基因在组织部位中相对表达量为穗＞叶＞茎＞根，该基因可积极响应干旱、盐、低氮、低磷、ABA、BR诱导处理。研究结果为丰富草坪草SnRK2抗逆机制提供理论基础。