猪血凝性脑脊髓炎病毒RT-PCR方法的建立及初步应用

为了建立快速检测猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)的RT-PCR方法,根据GenBank中HEV的HE基因和S基因设计了1对引物,在优化RT-PCR反应条件的基础上,成功的扩增出323bp的特异性条带。检测与HEV亲缘性较高的牛冠状病毒及猪的伪狂犬病毒均为阴性,最低可以检测到10个TCID50/100μl的病毒,说明该方法的有较好的特异性和敏感性。用此RT-PCR方法对感染HEV的小鼠和猪进行检测,结果能从发病动物的多种组织中检测到病原,其中以脑组织的检出率最高。因此,临床疑似病例检测时以脑组织为最佳检测样本。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒PK细胞膜受体的鉴定

在毕赤酵母中表达猪血凝性脑脊髓炎病毒（Hemagglutinating Encephalomyelitis Virus, HEV）67N株S蛋白片段,经镍离子亲和层析纯化后,四次免疫家兔,获得兔抗HEV-S蛋白特异性抗体;提取PK细胞膜蛋白,SDS-PAGE电泳后,转印NC膜,以纯化的S1蛋白代替病毒,利用改进的病毒铺覆蛋白结合试验（VOPBA）对PK细胞膜受体进行鉴定,结果发现在大约90kDa处有清晰的蛋白带,推测该蛋白可能是HEV感染PK细胞的结合位点。该结果为深入研究血凝性脑脊髓炎病毒的致病机制奠定理论基础。     

疑似病毒感染金丝猴死亡病例报告

金丝猴为我国所特有的稀世珍兽，与大熊猫齐名，被誉为“第二国宝”。近些年来，在人工圈养繁殖金丝猴数量增多的同时，又不断有金丝猴感染疾病死亡的案例发生。2005年9月8日，长春某动物园的1只5岁雌性金丝猴出现呼吸促迫、咳嗽、饮水和食欲减退、不愿活动等临床症状，用吹管给药，投注1支头孢拉啶（0．5g／支）和1支地塞米松（1mL／支）。20min后，金丝猴出现口吐白沫、抽搐现象，病程持续8h左右死亡。     

流感的实验室诊断方法

流感是由流感病毒引起的一种人和动物的高度传染性疾病。由于其危害严重,快速诊断技术显得非常重要。除常规的临床症状及病理变化诊断外,流感的确诊依赖于实验室诊断方法。文章从病毒的分离鉴定、血清学、分子生物学等多方面介绍了可用于流感的快速诊断方法,尤其是实时荧光定量PCR、NASBA 法、基因芯片法、M 检测法等先进的分子生物学技术,具有敏感、快速、特异、简便的特点,为有效的控制流感的流行和暴发提供参考。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒在PK-15细胞中的增殖特性

利用光学显微镜观察、间接免疫荧光（IFA）、Real-time PCR和病毒感染滴度（TCID50）等测定方法,分别从病毒抗原分布、病毒基因组复制水平以及病毒感染滴度变化等方面对猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV-67N）在猪肾上皮传代细胞系（PK-15细胞）上的增殖特性进行了研究。使用HEV-67N株感染24孔细胞培养板内的PK-15细胞,接种剂量为400个TCID50（104.37）/孔,间接免疫荧光检测结果显示,在感染后8h即可检测到被荧光抗体标记的感染细胞,且随着感染时间的延长,出现荧光的细胞数量逐渐增多,至感染后32h,几乎所有的细胞均出现有荧光。Real-time PCR检测结果显示,病毒基因组RNA的复制在感染后32～48h呈快速上升趋势,其基因组拷贝数在感染后48h达到最高值,之后增殖速度减慢,至感染后56h细胞出现CPE。TCID50的测定结果显示,HEV感染滴度的变化趋势与基因组RNA含量的变化相一致,在感染后32～48h增殖速度最快,之后逐渐减缓,至72h病毒感染滴度达到最高。     

肉仔鸡非典型新城疫并发克雷伯氏菌病的诊治

内蒙古通辽市某肉鸡养殖专业户，2004年2月份饲养商品肉鸡3000只，全部为外调鸡苗。初期鸡群生长良好，1月龄成活率为97．8％。新城疫10日龄首免、32日龄二免。二免第二天鸡群陆续发病，哮喘、采食量减少、软颈、口中有黏液、水样便等临诊症状，并陆续出现死亡。至3月15日，发病鸡约1000只，死亡近200只。经投服恩诺沙星和环丙沙星饮水，饲料拌喂叶酸、硫酸锰和VB后，病情未见好转。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立

采用实验室保存的杂交瘤细胞,通过扩大培养、接种小鼠、收集腹水、腹水纯化等程序得到了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并对其效价进行了测定.用HEV单克隆抗体作为检测抗体,猪多抗作为捕获抗体,建立了检测HEV的抗原捕获ELISA方法,通过对各步反应条件的优化,最终获得最佳工作条件为:猪多抗1:2 000稀释,单抗1:4 000稀释,酶标抗体为1:4 000稀释.特异性和敏感性试验结果表明:该方法对TGEV、HCV、PEDV和PRV等病毒无特异性交叉反应,其最低检测下线为3.75 mg/L.与RT-PCR方法的对比试验证明,抗原捕获ELISA阳性检出结果与PCR方法相一致.上述结果说明,已成功建立特异、敏感的用于HEV检测的抗原捕获ELISA方法,为临床快速诊断HEV试剂盒的研制奠定了基础.     

环境卫生对养鸡效益影响比较

鸡舍卫生的好坏，直接影响蛋鸡的产蛋率，从而影响养鸡效益。如果鸡舍内空气污浊，粪便堆积，蚊蝇多，有害气体刺眼鼻，将导致鸡产蛋率低、抗病力差、药费开支大，造成养鸡效益低下。下面两户就是典型实例。藁城市河西营村养鸡户蒋×，饲养蛋鸡１０００只，１６０日龄产蛋率达到９０％，１９０日龄产蛋率上升到９６％。鸡舍内通风好，无异味，鸡只有精神、无病态。蒋×平时注意搞好饲养管理，鸡舍卫生，定期带鸡消毒。坚持每两天清粪一次，鸡舍通风口安装窗纱，以防蚊蝇飞入。在气温达３２℃以上时，每天下午２时左右给鸡舍喷洒凉水。由于鸡…     

恶性疟原虫3D7株AP核酸内切酶的原核表达及多克隆抗体的制备

为研究恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)3D7株AP核酸内切酶(AP endonuclease)的功能,通过PCR的方法扩增PF3D7_0305600(292~1 137 bp),构建克隆载体。测序正确后,将该片段插入到pET-28a和p GEX-4T-1,构建重组表达载体p ET-28a-Ae、p GEX-4T-1-Ae。将表达载体转入BL21-Codon Plus表达重组蛋白r-Ae-His和r-Ae-GST,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,r-Ae-His免疫家兔制备多克隆抗体,并用ELISA检测抗血清效价,Western blot检测抗体特异性。结果表明:表达的r-Ae-His分子量约为39 ku,r-Ae-GST分子量约为60 ku。制备的多克隆抗体能够特异性地识别天然蛋白,可用于恶性疟原虫3D7株AP核酸内切酶的后续研究。     

猪伪狂犬病毒CC株的分离与鉴定

从吉林省长春市某猪场送检的一头发热、流涎、肌肉痉挛、角弓反张的9日龄仔猪中分离到一株病毒。该病毒能在猪肾细胞(PK-15),仓鼠肾细胞(BHK-21)和非洲绿猴肾细胞(Vero)增殖并产生典型的细胞病变(CPE),从流行病学,临床症状和病理变化均与伪狂犬病相似,该病毒能被伪狂犬病毒阳性血清中和,电镜观察可见椭圆形、直径为110-180nm典型疤疹病毒粒子,用该病毒接种家免和小白鼠均出现典型的伪狂犬病症状。经鉴定,证明此病毒确为伪狂犬病病毒(PRV),并将该病毒命名为PRVCC株。