猪流感病毒的分离与鉴定

从广东某猪场表现发热和流鼻涕等呼吸道症状的猪群采集28份样品,用鸡胚分离到9株病毒。将病毒传代至第6代,经血清学鉴定、理化特性检查、电镜观察、生物学特性检查和人工致病试验,结果表明,4株分离株为H1N1亚型猪流感病毒,5株为H3N2亚型猪流感病毒。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的高效表达

将鸡传染性支气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｖ） Ｓ１ 基因 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 克隆至含有起始密码 Ａ Ｔ Ｇ 的转移载体 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４,构建成重组转移质粒 ｐ Ｓ Ｘ Ｉ Ｖ Ｖ Ｉ＋ Ｘ３／４ Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ,再与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ Ｓ Ｖ Ｉ－ Ｇ Ｄ Ｎ Ａ（ Ｏ Ｃ Ｃ－ , ｇａｌ＋ ）共转染 草地夜蛾（ Ｓｆ９） 细胞, 经空斑纯化得 到已插入 Ｓ１ 基 因并能形成多角体 的重组病毒 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 。以重组毒株感染 Ｔｎ５ Ｂ１ 细胞,在不同时间收取感染了病毒的细胞进行 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 与 Ｗ ｅｓｔｅｒｎ 印迹检测。 Ｔｎ Ｎ Ｐ Ｖ（ Ｘ３／４） Ｓ１． Ｈｏｌｔｅ Ｏ Ｃ Ｃ＋ 在感染的细胞中高效表达了 Ｓ１ 基因,表达产物为约 １００ ０００ 的融合蛋白,与预计的表达修饰后的产物大小相符,推测此蛋白已糖基化。 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后 ４８、７２、９６ ｈ, Ｓ１ 蛋白分别占细胞内总蛋白量的 ２８７％ 、３５８％ 、３７１％ 。     

鸡对传染性囊病疫苗免疫应答的病理形态学研究

本项研究除采用巨检和病理组织学常规染色外，并应用组织化学和扫描电镜等检测手段，比较细致地观察了ＩＢＤ免疫过程中所出现的一系列形态学变化，加深了对本病的认识，研究结果阐明，在鸡群可能受ＩＢＤＶ野毒威胁的情况下，宜选用中强毒力的ＩＢＤ疫苗，受损的法氏整组织要得到再生的两个基本条件是：１，淋巴滤泡受损后尚残存部分淋巴组织；２，囊组织再生必须在法氏囊发生生理性萎缩之前。     

猪轮状病毒分离与鉴定

采用MA104细胞从广东省某猪场患有明显腹泻症状的仔猪粪便中分离了1株产生明显细胞病变(CPE)的病毒。电镜观察显示,病毒粒子呈现较为典型的轮状病毒的形态特征;对其VP6基因进行序列分析,结果表明该分离株与A群猪轮状病毒代表株OSU和Gottfried的核苷酸同源分别为86.3%和80.8%,氨基酸序列同源性分别为97.7%和93.2%。综合所见,所分离的毒株为A群猪轮状病毒。     

广东新兴株Ⅰ型鸭病毒性肝炎鸡胚化弱毒疫苗的研制

本试验从广东新兴地区分离的I型鸭病毒性肝炎毒株中筛选出免疫原性优良SS毒株,用鸡胚传代培育出Ⅰ型鸭肝炎病毒79代鸡胚化弱毒疫苗株SS79.按弱毒疫苗规程相关试验结果表明,该苗对1日龄雏鸭安全无致病性,免疫剂量为10-5.16个EID50/只.接种1日龄雏鸭后第3天可检测到抗体,7 d可产生高峰期中和抗体,并可完全保护雏鸭抵抗同型强毒的攻击,1次免疫抗体可维持4周以上.疫苗在-20℃保存6~12个月仍能保持良好的免疫原性.     

我国猪繁殖与呼吸综合征流行概况

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是目前危害世界养猪业最严重的传染病之一,并在我国广泛流行.2006年我国出现的美洲型高致病性PRRS病毒(PRRSV)变异株,更是对我国养猪业影响极大.论文概述了近年来我国PRRS的流行特点,对血清学及病原学方面的调查数据进行了统计分析,并对PRRSV分子流行病学进行了探讨.     

猪轮状病毒GD1株VP7基因的克隆及序列分析

参考GenBank中发表的PRV OSU毒株VP7基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计1对特异引物,以PRV GD1株反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1 kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明:VP7基因全长1 062 bp,含有一个981 bp的开放阅读框,编码326个氨基酸。与国内外已知的13个毒株VP7全长基因的核苷酸及推导的氨基酸序列比较,相似性分别为77.4%～100%和78.6%～99.7%;核苷酸系统发育进化树结果表明,GD1毒株与轮状病毒A2,JP3-6毒株亲缘关系较近,为一个进化群。     

番鸭细小病毒XX株VP2基因的克隆和序列分析

根据国内外已发表的番鸭细小病毒(MDPV)FM株和GD株基因序列,应用DNAstar分子生物学软件设计1对引物,应用PCR技术扩增MDPV XX株的结构蛋白基因VP2全基因片段。将扩增得到的VP2全基因克隆到PGEM-T easy载体上,经菌液PCR鉴定后的重组子进行序列测定。结果表明,MDPV XX株基因大小为1764bp,编码587个氨基酸,其基因序列与国内外发表的FM株、GD株核苷酸序列同源性分别为98.4%和99.8%,而与同属的小鹅瘟病毒B株核苷酸同源性仅为78.2%。可见编码番鸭细小病毒结构蛋白的VP2基因较保守,且和同属的小鹅瘟病毒明显不同,这也是该病毒目前只有一个血清型的分子基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒TM株的分离鉴定及其Nsp2序列分析

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异特点,本研究从广东省某猪场患有明显呼吸道症状的仔猪肺脏组织中分离到一株病毒,利用RT-PCR、基因序列分析,确定为美洲型PRRSV,命名为TM株。Nsp2基因序列分析发现,与美洲型标准毒株VR-2332相比,该分离株在481位和532位～560位共有30个氨基酸缺失;此外,与近年来国内分离的PRRSV变异株相比,在22位～42位有21个氨基酸的独有缺失。回归试验表明,该分离株可引起仔猪表现明显的临床症状和病毒血症,证实我国已经出现新缺失高致病性PRRSV毒株。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒TP株P4、P60、P90基因组遗传变异分析及动物致病力试验

本研究旨在对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TP株P4、P60、P90三个代次毒株进行全基因组序列测定,分析其遗传变异特性。通过分段RT-PCR、5′RACE和3′RACE法扩增病毒基因组,并运用生物信息学软件和动物致病力试验进行相关分析。结果表明:TP株P4、P60、P90株基因组全长分别为15346、15394和15393bp。3个代次病毒的基因组序列中ORF1a基因和3′-UTR区域变异较大,尤以Poly(A)尾序列碱基数差异显著,分别为26、74和73bp。3代次毒株基因组序列比对发现TPP90与TPP4差异较大,共有58个核苷酸位点和27个氨基酸位点发生突变,P90GP5蛋白抗原指数和表面亲和力与TPP4和TPP60相比呈增加趋势,动物致病力试验表明TPP4毒株致病力较TPP60和TPP90强。结果提示:TPP4、P60、P903代次毒株基因组序列存在着一定的差异,主要集中在4～60代致弱阶段,遗传进化关系上该病毒分属于PRRSV美洲株分支,并与高致病性PRRSV JXA1株亲缘关系最为接近,相似性高达99.5%、99.2%和99.3%。