猪圆环病毒2型疫苗研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)感染后会导致断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)等"猪圆环病毒相关疾病"(PCVADs),给全球养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗免疫是防控该病的有效手段,近年来市场上推出了PCV2灭活疫苗、嵌合疫苗和亚单位疫苗。PCV2变异较快,主要临床流行毒株从PCV2b逐渐演变为PCV2d,现有商业化疫苗免疫效果需进一步研究证实。论文就近年来国内外PCV2传统疫苗、新型基因工程疫苗、PCV2疫苗与其他疫苗联合免疫的研究进展进行综述,旨在为猪圆环病毒相关疾病的防控及疫苗的开发与利用提供参考。     

PRRSV广东及周边地区分离株ORF5基因PCR-RFLP分析

用RT—PCR方法对分离自广东及周边地区包括43株高致病性PRRSV（HP—PRRSV）在内的共56株PRRSVORF5基因进行了扩增,应用MluⅠ、HincⅡ和SacⅡ3种限制性内切酶对PCR扩增片段进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析。结果56株分离株中共获得8种不同的RFLP模式,其中有6株分离株（10．7％）模式与美洲型PRRSV弱毒疫苗株一致,为2-5—2模式;其余50株分离株表现为7种不同的RFLP模式,均为野毒株。43株HP—PRRSV表现为除2—5—2模式外的其余7种模式;13株经典PRRSV也表现了4种模式。结果表明广东及周边地区的PRRSV发生了较大的变异。     

传染性支气管炎病毒Holte株S1基因的克隆及鉴定

为给鸡传染性支气管炎（ＩＢ）基因工程疫苗的研制提供基因储备,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出ＩＢＶＨｏｌｔｅ株Ｓ１基因ｃＤＮＡ,其长度与理论值１７６２ｂｐ相符;Ｓ１基因内部位点经ＨａｅⅢ酶切所产生的片段,亦与理论值５４９、３４３、３２４、１９１、１８０、１７１ｂｐ６个片段大小一致。将Ｓ１基因ｃＤＮＡ克隆入ｐＵＣ１８,并对Ｓ１基因两翼进行了序列分析。结果表明,所克隆的Ｓ１基因与ＧｅｎＢａｎｋ中收录的ＩＢＶＨｏｌｔｅ株Ｓ１基因完全相符。     

原位杂交检测鸡的马立克氏病

马立克氏病（ Ｍａｒｅｋｓ Ｄｉｓｅａｓｅ, Ｍ Ｄ）是由马立克氏病病毒（ Ｍ Ｄ Ｖ）引起的 Ｔ淋巴细胞肿瘤。本文通过 Ｐ Ｃ Ｒ 方法扩增出长为３３９ｂｐ 的部分ｍ ｅｑ 基因片段,再以随机引物法制备 Ｄｉｇ 标记ｃ Ｄ Ｎ Ａ 探针,首次采用原位杂交技术对１２ 例 Ｍ Ｄ 自然发病鸡的内脏组织石蜡包埋切片中的ｍ ｅｑ基因ｍ Ｒ Ｎ Ａ 进行检测。结果显示,ｍ ｅｑ 基因ｍ Ｒ Ｎ Ａ 在肿瘤组织中均有分布,这表明ｍ ｅｑ 基因的 Ｒ Ｎ Ａ 转录本可以作为 Ｍ Ｄ肿瘤的特异性分子标志物。     

应用PCR快速诊断番鸭细小病毒病和小鹅瘟

根据GenBank中已发表的番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)全序列,分别设计并合成特异性引物MDPVF/R和GPVF/R,对细小病毒属成员GPV、MDPV、犬细小病毒(CPV)及鸭常见病毒病病原如鸭瘟病毒(DPV)、鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭呼肠病毒(DRV)、流感病毒(AIV)的核酸进行PCR扩增.结果表明,引物特异性良好,引物MDPVF/R只能特异性扩增出MDPV的714 bp基因片段,引物GPVF/R只能特异性扩增出GPV的570 bp基因片段;敏感性试验结果表明,MDPV DNA最低检出量为17.5 pg,GPV DNA最低检出量为13.7 pg.该方法的建立对这两种疾病的鉴别诊断具有重要意义.     

高致病性PRRSV变异株与经典株混合感染的研究

应用RT-PCR技术对来自广东省某猪场患有明显呼吸道临床症状和高热死亡的仔猪肺脏组织进行检测,结果初步鉴定为PRRSV高致病性变异株(YGhp株)与经典株(YGcl株)混合感染.进一步对2个毒株的NSP2基因进行序列分析,结果发现YGhp株与VR-2332、JXA1和Lelystad株的核苷酸同源性分别为75.1%、99%和35%,而YGcl株与上述毒株的同源性分别为99%、77.7%和34.5%,表明YGhp株为高致病性变异株,YGcl株为经典株,均属美洲型. 高致病性PRRSV变异株与经典株混合感染属非常罕见.     

猪流感(H1N1+H3N2)油乳剂灭活疫苗免疫后备母猪的抗体动态

本研究对同1条生产线的1683头后备母猪接种猪流感二价灭活疫苗,免疫后对试验组和非免疫组定期进行抽样采血,检测HI抗体水平,计算各组猪群的平均抗体水平.结果表明,第1次免疫后1个月H1NI抗体水平为9.05log2,H3N2抗体水平为6.50log2;在2免后2个月H1NI抗体水平达到高峰为10.15log2,而在2免后3个月H3N2抗体水平达到高峰为10.05log2;然后抗体水平逐步下降,免疫组H1抗体水平大于8log2,H3抗体水平大于6log2的时间可维持6个月以上.     

猪轮状病毒GD株VP6基因的克隆及序列分析

参考GenBank中发表的PRV OSU毒株VP6基因核苷酸序列ORF两端保守区序列,设计1对特异引物,以PRV GD株反转录cDNA为模板,通过PCR方法扩增出长约1.4 kb的基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。测序结果表明:VP6基因全长1320 bp,含有一个1194bp的开放阅读框,编码397个氨基酸。与国内外已知的11个毒株VP6基因的核苷酸及其推导的氨基酸序列比较,同源性分别为76.5%-95.6%和88.7%-99.2%;核苷酸系统发育进化树结果表明,GD毒株与轮状病毒JL94,CN86,OSU毒株亲缘关系较近,为一个进化群。     

不同猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株在Marc-145细胞的生长特性研究

本试验对PRRSV-CG、YN9、TP、TP-A及SHB株在Marc-145细胞上进行了部分体外生长特性研究。病毒生长曲线分析发现TP-A毒株产生病变速度快且病毒滴度高,其次为YN9、TP、CG和SHB;病毒蚀斑形态学分析发现TP-A和YN9较其余毒株形成的蚀斑大且比较均一,为大蚀斑。综合可见不同的PRRSV分离株体外生长特性具有较大的差异,为病毒的分子生物学研究奠定了基础。