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鲤鱼春季病毒血症(Spring Viremia of Carp:SVC)是流行于欧洲各国,严重危害鲤鱼养殖业的病毒病。病原为弹状病毒科狂犬病毒属的鲤弹状病毒(Rhabdovirus Carpio)。该病毒有鲤春弹状病毒(SVCV)和棱子鱼苗弹状病毒(PFRV)两个血清型。近年来,日本等亚洲国家养殖的鲤鱼也出现了类似该病的症状, 相似文献
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为建立同时检测口蹄疫病毒(FMDV)和牛肠道病毒(BEV)的双重RT-PCR方法,本研究根据已发表的FMDV和BEV基因的5’UTR保守区域,分别设计、筛选出一对特异性引物建立了双重RT-PCR方法,并优化了反应体系和条件。采用该方法检测其他几种牛相关病毒结果均为阴性,表明特异性良好。该方法对FMDV的最低检出限为8 TCID50/0.1 mL,对BEV的最低检出限为2 TCID50/0.1 mL,表明其具有良好的敏感性。采用该方法检测了852份临床样品,并与病毒分离方法比较,结果两种方法检测结果完全一致。本研究首次建立了同时检测FMDV和BEV的双重RT-PCR快速检测方法,该方法的建立为FMDV和BEV的检测提供了一种技术手段。 相似文献
26.
通过对我国糕点行业质量安全方面存在的问题进行分析研究,提出规范我国糕点行业生产所必须采取的措施,以提高我国糕点行业产品质量的整体水平,从而维护消费者的切身利益。 相似文献
27.
将EGFPEO融合基因插入哺乳动物细胞表达载体pCI-dhfr中,构建重组质粒pCI-EGFPE0.将重组质粒转染CHO(dhfr'),在荧光显微镜下观察到少数细胞呈现绿色荧光,表明转染成功.通过MTX加压筛选后,在荧光显微镜下观察到多数细胞呈现强绿色荧光,表明重组融合蛋白EGFPE0在CHO细胞中得到大量表达.高效表达重组融合蛋白细胞克隆的获得为进一步大量制备可溶性的猪瘟病毒E0糖蛋白、制备其单抗筛选抗原表位及研究E0蛋白的生物学功能奠定基础. 相似文献
28.
为验证来源于禽流感病毒的、可与鸡MHCI类分子结合的九肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV的免疫原性,使用TIGECPKYV、LLLAIVSLV和KILTIYSTV3条多肽免疫BALB/c小鼠,加强免疫时和加强免疫1、2、3、4、5周后分别采血,流式细胞术测定免疫前后小鼠外周抗凝血中CD8^+淋巴细胞的变化情况;加强免疫后14d进行MTT试验;首次免疫3周后进行DTH试验;ELISA检测免疫前后小鼠分泌IFN-γ的变化情况。结果表明,KILTIYSTV、LLLAIVSLV、TIGECPKYV免疫后分别引起CD8^+T淋巴细胞4.2%、4.0%和0.2%的额外增殖。KILTIYSTV和LLLAIVSLV免疫组的IFN7的增长和迟发型变态反应均显著高于对照组。简言之,与重建的MHCⅠ类分子结合的多肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV可以刺激小鼠产生特异性CTL反应,而不结合的多肽TIGECPKYV刺激小鼠未产生特异性CTL反应。 相似文献
29.
鸡白细胞介素-18基因的原核表达及多克隆抗血清的制备 总被引:9,自引:0,他引:9
将编码鸡白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pPROEXTMHT中,构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α并用IPTG于37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,目的蛋白表达量占菌体蛋白的30%。SDS-PAGE和Western blot分析显示,表达的鸡IL-18融合蛋白相对分子质量约为23000。包涵体被6mol/L盐酸胍裂解后,通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡IL-18融合蛋白及其纯化产物经3次肌肉注射豚鼠,制备豚鼠抗鸡IL-18多克隆抗血清,并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明。本试验成功的原核表达、纯化了鸡IL-18融合蛋白,并制备了抗鸡IL-18多克隆抗血清,为下一阶段关于鸡IL-18重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础。 相似文献
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以巴马小型猪为研究材料,克隆SLA-2和β2m基因。然后采用剪接重叠延伸PCR(Splicing overlap exten-tion PCR,SOE PCR)法,将SLA-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的Linker(G4S)3连接,形成SLA-2-Linker-β2m。将SLA-2-Linker-β2m在pMAL-p2X系统上表达,其融合表达蛋白分别经过West-ern-blot、纯化及Factor Xa切割,分离纯化单体蛋白。圆二色谱(Circular dichroism spectrum,CD)测定蛋白的二级结构。结果显示,重构表达的复合体融合蛋白MBP-SLA-2-(G4S)3-β2m大小为84.1 ku。切割后去除MBP的单体蛋白大小为41.6 ku。圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、97.3%、97.1%和97.9%,揭示重构的复合体具有正确的二级结构,可以用于体外多肽结合等研究。 相似文献