苏太猪肌内脂肪沉积相关基因SRC-1的差异显示反转录PCR鉴定

采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA 池,采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed sequence tags),即EST序列,通过GenBank比对发现其中3条为已知序列.为进一步验证这3个已知基因与肌内脂肪之间的关系,从90个个体中选取肌内脂肪最高和最低各15个个体进行实时定量PCR检测.结果表明,细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1)mRNA表达水平与肌内脂肪含量存在负相关关系(r=-0.38,P<0.05).提示:SRC-1蛋白有可能参与了肌内脂肪沉积的调节.     

卵母细胞成熟的形态学特征及其调控

综述卵母细胞成熟的形态结构特点,卵泡内环境对卵母细胞生长、发育的影响,以及卵母细胞成熟的分子调节机制。     

五指山、二花脸和皮特兰猪的SLA-DQB基因外显子2的PCR-RFLP多态性分析

采用PCR-RFLP法对五指山猪、二花脸猪及皮特兰猪的SLA-DQB基因外显子2的PCR产物进行了分析,结果显示,SLA-DQB基因外显子2经限制酶HaeⅢ和RsaⅠ酶切共分出9种RFLP组合带型,五指山猪、二花脸猪和皮特兰猪分别有3种、3种和5种组合带型.Hardy-Weinberg平衡分析表明,五指山猪和二花脸猪的SLA-DQB基因外显子2的两个酶切位点的PCR-RFLP带型达平衡状态,而皮特兰猪中只有RsaⅠ酶切位点达到平衡状态.     

猪卵泡卵母细胞体外受精研究

采用３种获能方法（常规获能法、肝素获能法、钙离子载体获能法）进行猪冷冻附睾精子的外获能研究，其相应的受精率分别为４２．５％，３２．０％，３０．８％，卵裂率分别为１８．６％，１５．７％，１６．１％，受精率、卵裂率间均无显著差异。精子与ＳＭＴ－ＰＧＨ基因质粒混合培养后引起卵裂率下降，实验组的卵裂率（７．５％）显著地低于对照组的水平（２１．０％）．３９℃与３７℃下受精，其受精率分别为３８．８％，１８．７     

用玻璃化冷冻保存山羊胚胎的研究

试验用玻璃化冷冻保存山羊胚胎１４２枚，其中３５枚移植受体１３只，妊娠率和产羔率分别为６１．５％（８／１３）和４０％（１４／３５）；１０７枚（桑椹胚４４枚和囊胚６３枚）在液氮中保存３和４．５年后解冻与培养。结果表明，桑椹胚形态和发育正常率分别为４７％（２１／４４）和３８．６％（１７／４４），囊胚分别为６３．５％（４０／６３）和４７．６％（３０／６３）。囊胚解冻后形态正常率和发育率显著高于桑椹胚（Ｐ＜０．０５）。     

热应激奶牛外周血淋巴细胞凋亡和bax-α基因表达

用流式细胞记录仪检测分析奶牛在夏季(日平均气温为37.5 ℃)、夏末(日平均气温26.5 ℃)和冬季(日平均气温5.5 ℃)时奶牛外周血淋巴细胞DNA含量,统计细胞所处的分裂时期及淋巴细胞的凋亡率,并通过荧光定量PCR分析上述时期外周血淋巴细胞bax-α基因mRNA表达量.结果显示:(1)G2/M期细胞和淋巴细胞增殖指数随温度降低而呈明显的下降趋势,5.5 ℃时比例最低,相对于其他两个温度条件差异显著(P&lt;0.05);(2)淋巴细胞凋亡率于26.5 ℃达到最高峰(10.60%),5.5 ℃下降至最低(2.7%),差异显著(P&lt;0.05);(3)在26.5 ℃,bax-α基因mRNA表达量最高,与其他两个温度条件相比该基因的丰度差异显著(P&lt;0.05);(4)bax-α基因mRNA表达量与淋巴细胞凋亡率呈明显的平行关系.提示bax基因可能参与热应激引起的淋巴细胞凋亡过程.     

绵羊肌肉LPL基因表达的发育性变化及其对肌内脂肪含量的影响

 【目的】研究绵羊肌肉中脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase，LPL）基因mRNA的发育性变化规律及其对肌内脂肪沉积的影响。【方法】选取2、30、60、90和120日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊各6只（120日龄只有新疆细毛羊），屠宰后取背最长肌检测肌内脂肪含量，用荧光实时定量PCR法检测肌肉LPL基因mRNA表达水平，分析在不同时期的变化及其与肌内脂肪含量的关系。【结果】随着日龄的增加，雄性哈萨克羊的IMF（Intramuscular Fat）含量持续上升，各生长时期差异显著（P＜0.05），而新疆细毛羊的IMF含量在各生长时期无显著差异（P＞0.05），雄性哈萨克羊的IMF含量30～90 d期间极显著高于新疆细毛羊（P＜0.01）；雄性哈萨克羊肌肉LPL基因的表达量在2日龄时最高，60日龄时降到最低，然后逐渐上升，2日龄时LPL表达量极显著高于其它日龄（P＜0.01）。新疆细毛羊的表达量在2日龄时较低，30日龄时升到最高，随后下降，到90日龄时降到最低，然后又逐渐上升；30日龄表达量与2、90、120日龄差异极显著（P＜0.01），与60日龄差异显著（P＜0.05）；60日龄表达量与2、90、120日龄差异显著（P＜0.05）；哈萨克羊LPL基因2～60日龄的表达量与IMF含量呈负相关，相关系数为-0.625（P＜0.05）；新疆细毛羊IMF含量与LPL基因表达量无显著相关性。【结论】新疆细毛羊和哈萨克羊背最长肌肌内脂肪沉积的发育性变化不同，在生长发育早期，哈萨克羊随日龄的增加其IMF上升，新疆细毛羊在各时期保持一个稳定的水平；LPL基因在哈萨克羊生长早期对其肌内脂肪的沉积可能有负调控作用，而对新疆细毛羊无明显作用。     

猪成熟脂肪细胞分离培养及去分化研究

成熟脂肪去分化技术可为研究脂肪细胞分化提供均一的前体脂肪细胞。本研究分离培养了猪成熟脂肪细胞,并去分化为前体脂肪细胞。本实验采用Ⅱ胶原酶消化后离心分离1~3日龄仔猪(Susscrofa)皮下脂肪组织,天花板法培养获得成熟脂肪细胞。显微镜下观察脂肪细胞去分化形态学变化,并在成脂诱导培养液的作用下诱导再分化。采用油红O染色法检测分化不同时期细胞脂滴聚集效率,脂滴的累积随诱导的进行不断增加。RT-PCR检测成熟脂肪细胞标志基因过氧化物酶体增殖物活化受体(PPARγ)和和脂肪酸结合蛋白4(FABP4)的mRNA相对表达量,分化早期基因表达水平较低,其表达水平在分化过程中持续增高,在分化后期PPARγ相对表达量与诱导分化前增加了2.8倍,FABP4增加了约62倍(差异显著P<0.05)。说明去分化获得的前体脂肪细胞在成脂诱导培养液作用下,可有效地分化为成熟脂肪细胞。本研究优化了猪成熟脂肪细胞分离和培养体系,并通过去分化获得具有再分化能力的前体脂肪细胞,为进一步深入研究猪脂肪细胞分化与代谢提供技术平台。     

二花脸猪Smad4基因的克隆与卵巢组织mRNA的表达水平

[目的]了解二花脸猪Smad4(common-mediator Sma4)基因的序列特征和组织表达特征,分析二花脸猪与商品猪卵巢组织中Smad4基因mRNA表达水平的差异.[方法]采用克隆测序技术获得二花脸猪Smad4基因cDNA序列,利用生物信息学方法分析二花脸猪Smad4基因的序列特征和蛋白的理化性质、高级结构,RT-PCR检测其组织表达特征,并采用real-time PCR技术检测二花脸猪与商品猪卵巢组织中Smad4基因mRNA的表达水平.[结果]二花脸猪Smad4基因编码区序列全长1 659 bp,编码一个含有5 52个氨基酸残基的蛋白质,氨基酸序列与其它哺乳动物的同源性均在98％以上;二花脸猪Smad4也包括3个典型的结构域(MH1、SAD和MH2).二花脸猪Smad4基因在所检测的组织中均有表达,且卵巢组织中mRNA的表达水平极显著高于商品猪(P＜0.01).[结论]二花脸猪Smad4基因可能拥有其它哺乳动物Smad4基因相同的功能及其可能与猪高繁殖力间有一定相关.     

去乙酰化酶SIRT1及其对细胞凋亡调控的研究进展

细胞凋亡在机体生理功能中起着重要作用,是机体清除体内损伤、衰老及具有潜在威胁性细胞的一种基本方式。沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator 2 homolog 1,SIRT1)作为哺乳动物Sirtuin家族的一员,自发现以来作为重要的调控因子被广泛研究;最近研究报道SIRT1调控一系列转录因子如p53、FOXO家族和NF-κB,在细胞凋亡中起关键的作用。作者主要阐述了SIRT1的分子生物学特性、表达调控及SIRT1与细胞凋亡的关系。