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21.
应用竞争PCR检测丙酸盐对体外培养牛肝细胞丙酮酸羧化酶mRNA水平的影响 总被引:3,自引:2,他引:1
根据牛肝细胞内PC(丙酮酸羧化酶)基因组与PCcDNA相比多含有一个内含子序列.在其中再插入一外源DNA序列.从而使最终构建的突变体片段的长度大于PCcDNA的长度,成功构建了PCcDNA的竞争DNA模板,然后应用竞争PCR方法研究了丙酸盐对体外培养新生牛单层肝细胞PCmRNA水平的影响。使单层肝细胞培养液中丙酸钠浓度分别为0、1.5、2.5、3.5、4.5、8.5、11.5mmol/L,处理24h,提取总RNA、逆转录,在同一体系中用相同引物扩增目的带和竞争模板带。结果表明.随着丙酸钠浓度的升高.PCmRNA水平呈上升趋势,提示肝细胞内PCmRNA的表达水平受培养液中丙酸钠浓度的影响。 相似文献
22.
23.
铜对体外仔猪软骨细胞增殖和自分泌IGF—I、IGFBP的影响 总被引:9,自引:3,他引:6
体外分离、培养仔猪关节软骨细胞,然后在细胞培养液中分别添加0、7.8、15.6、31.2、62.5μmol/L铜。结果表明,软骨细胞在4种浓度的铜中可存活并增殖,而且能增加胰岛素样生长因子(IGF-I)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP3)的分泌量。但随铜浓度的增加,其存活率、增殖率、^3H-TdR掺入率及IGF-I、IGFBP3的分泌量有明显的差异。且以培养液中添加31.2μmol/L铜对软骨细胞的增殖作用最强,增殖率、^3H-TdR掺入数、IGF-I、IGFBP3的分泌量显著高于对照组9P<0.01)。表明31.2μmol/L铜浓度是促进体外软骨细胞增殖和自分泌IGF-I、IGFBP3的最适浓度。 相似文献
24.
取单层生长状态良好的犊牛脂肪细胞,分别添加0、2.5、5、15、30、50、100 μg/mL外源牛重组脂联素(adiponectin,ADPN),培养12 h后提取总RNA,采用荧光定量PCR方法检测外源脂联素对脂肪细胞ADPN mRNA和HSL mRNA表达水平的影响。结果显示,随着ADPN添加量的增多,ADPN mRNA相对表达量呈下降趋势;添加ADPN 15 μg/mL时,HSL mRNA的表达量达到峰值,之后呈下降趋势。结果表明体外培养的脂肪细胞中ADPN mRNA表达量受自身的负调节,而添加适量的ADPN可刺激脂肪细胞HSL mRNA的表达。 相似文献
25.
26.
分离培养仔猪关节软骨细胞,从中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增出关节软骨细胞中胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF—Ⅰ)的cDNA,与pMD18-T载体相连,转化JM109大肠埃希氏菌,提取质粒,经鉴定,所扩增的片段为目的片段。在此基础上培养仔猪关节软骨细胞,并在培养液中添加不同水平的铜,分别在第0、12、24、48h收集软骨细胞,提取总RNA,采用RT—PCR法扩增出IGF—Ⅰ的cDNA,以β-actin为内参,用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析,计算IGF—Ⅰ mRNA基因表达的相对水平。结果,在细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中IGF—Ⅰ mRNA基因表达,其中以铜浓度31.2μmol/L的效果最好。表明铜对软骨细胞的增殖作用是通过促进IGF—Ⅰ mRNA的表达来实现的。 相似文献
27.
饲料铜水平对生长猪血清铜、血清锌和血清铁的影响 总被引:13,自引:0,他引:13
选 60头生长白猪 ( 1 9.2 6± 1 .2 0 kg)随机分成 6组 ,每组公母各半 ,使用硫酸铜作为铜源 ,在饲料中添加不同浓度的铜 ,对照组铜添加浓度为 0 mg/kg,高铜试验各组添加浓度为 1 0 0、1 5 0、2 0 0、2 5 0和 30 0 mg/kg。试验期为 80 d,期间每隔 2 0 d采血一次 ,检测血清铜、血清铁和血清锌的含量。分析结果显示 :高铜饲料可明显提高血清铜含量 ,降低血清锌含量 ,但血清铁无显著性变化。第 2 0 d高铜各组平均血清铜比对照组提高 1 7.7% ( P<0 .0 5 ) ,第 40 d提高 2 0 .2 % ( P<0 .0 5 ) ,第 60 d提高 8.6% ( P>0 .0 5 ) ,第 80 d提高 31 .5 % ( P<0 .0 1 ) ,30 0 mg/kg高铜组与对照组比较差异显著 ( P<0 .0 5 )。血清锌第 2 0 d和 40 d,高铜各组平均比对照组降低 1 1 .6%和 1 0 .3%。 相似文献
28.
刘国文 《山东省农业管理干部学院学报》2005,21(1):20-21
针对近年来农村集体经济面临的新矛盾和新问题,我们必须大力加强村级领导班子队伍建设,为发展集体经济提供可靠的组织保证;进一步解放思想,更新观念,开阔思路,选准发展壮大集体经济的新路子。 相似文献
29.
本研究以体外原代培养的奶牛肝细胞为模型,添加不同浓度的乙酸(AcOH)和p羟丁酸(BHBA),探讨其对奶牛肝细胞脂肪酸代谢关键酶基因表达的影响。添加不同浓度乙酸和β-羟丁酸,培养24h后,提取细胞总RNA。应用实时荧光定量PCR方法,检测脂代谢关键酶长链脂酰辅酶A合成酶1(ACSLl)、柠檬酸合成酶(CS)和乙酰辅酶A羧化酶α(ACCα)mRNA丰度的变化。结果显示,适当浓度的AcOH能够促进肝细胞脂肪酸活化及氧化途径关键酶ACSLl和CS的转录,而高浓度AcOH能够抑制脂肪酸从头合成途径关键酶ACCα的转录;高浓度BHBA能够抑制肝细胞ACSLl、CS和ACCα的转录。说明血液中适当浓度的AcOH能够促进肝脏脂肪酸氧化并抑制脂肪酸从头合成,高浓度BHBA能够抑制肝脏脂氧化和合成,影响乳脂前体物的供应,进而影响乳脂合成。 相似文献
30.
本试验旨在探讨β-羟丁酸(BHBA)对体外原代培养犊牛肝细胞凋亡的影响以及p38MAPK在其中的调控作用。选择培养72h的肝细胞,添加不同浓度的BHBA(0、0.6、1.2、2.4mmol/L),培养9h,每个浓度3个重复。另外选取细胞,p38MAPK抑制剂SB203580(10pmol/L)预处理1h后,添加BHBA,使其终浓度为2.4retool/L;PI/An—nexinV—FITC双染,运用荧光显微镜观察肝细胞凋亡情况;ELISA法检测p38的活性;实时荧光定量PCR方法检测p38、Caspase-3、Caspase9、bcl2基因的mRNA表达水平。结果表明,与对照组相比,1.2和2.4mmol/I—BHBA组的肝细胞凋亡明显增加;p38酶活性明显升高;p38、caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平均显著增加(P〈0.01)。bcl2基因mRNA表达水平显著降低(P〈0.05);添加p38抑制剂后,caspase-3和caspase-9基因mRNA表达水平显著降低(P〈0.01),bcl-2基因mRNA表达水平显著增加(P〈O.05)。高浓度的BHBA可以诱导体外原代培养犊牛肝细胞凋亡,p38在BHBA诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。 相似文献