siRNA干扰牦牛Bmal1基因对颗粒细胞激素分泌的影响

本研究旨在探讨敲低Bmal1基因对体外培养牦牛颗粒细胞雌二醇(E2)和孕酮(P4)分泌的影响。应用siRNA技术下调颗粒细胞中Bmal1基因的表达,利用ELISA试剂盒检测细胞培养液中E2与P4含量,再通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白印迹(Western Blot)检测细胞激素分泌相关基因的表达情况。结果显示:经si-Bmal1转染颗粒细胞后,E2分泌量显著下降,P4分泌量极显著下降;在mRNA检测水平上,激素合成相关基因Cyp19a1、Star的表达量下降;在蛋白检测水平上,Cyp19a1、Star的结果与mRNA表达基本一致。综上表明,敲低Bmal1基因能通过调控相关基因的表达抑制体外培养牦牛颗粒细胞E2和P4的分泌水平,Bmal1基因参与牦牛颗粒细胞激素分泌的调控。     

海洋食物网结构稳定性及干扰响应研究综述

针对当前全球环境急剧变化的背景,本文归纳了海洋食物网结构复杂性常用的量化指标,梳理了食物网稳定性不同维度的概念并深入探究其与复杂性之间的内在联系。根据海洋生态系统的不同干扰类型,分析了各种类型干扰的发生方式以及食物网在应对干扰时的适应机理,最后总结了海洋生态系统数据获取分析以及食物网构建时有待解决的问题,并指出开展初级生产者与消费者之间的相互作用研究能更利于解析全球变化对海洋食物网结构和功能的影响。     

二化螟dsRNA降解酶基因的克隆与表达分析

为解析二化螟Chilo suppressalis体内参与降解双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)的关键核酸酶的功能,克隆二化螟不同的非专一性核酸酶（non-specific nuclease,NUC）基因,并对这些基因进行生物信息学分析和组织定量表达分析,同时对dsRNA降解酶（dsRNA degrading nuclease,dsRNase）活力的组织分布进行研究。结果显示,共克隆获得5个NUC基因,其中有4个编码dsRNase亚家族基因（CsdsRNase1～CsdsRNase4）和1个编码Endonuclease G亚家族基因（CsEndoG）。5个NUC基因的开放阅读框核苷酸序列长度范围为828～1 338 bp,编码275～445个氨基酸残基,其分子量大小为31.68～49.57 kD,预测等电点为5.48～9.42。CsdsRNase1和CsdsRNase2含有信号肽序列,两者相似度极高,且与家蚕Bombyx mori和斜纹夜蛾Spodoptera litura中具有dsRNA降解酶活力的dsRNase同源聚类;CsdsRNase1和CsdsRN...     

草栖钝绥螨对二斑叶螨的捕食作用

为明确草栖钝绥螨Amblyseius herbicolus对二斑叶螨Tetranychus urticae的控制潜能,在温度分别为19、22、25、28和31℃、相对湿度均为（85±5）%、光周期均为16 L∶8 D条件下测定草栖钝绥螨对二斑叶螨各螨态的捕食偏好性、捕食功能反应及自身干扰反应。结果表明,草栖钝绥螨对二斑叶螨幼螨和第1若螨具有嗜食性,对其捕食选择系数分别为2.22和1.27,均大于1.00,对二斑叶螨卵、第2若螨和雌成螨捕食选择系数分别为0.61、0.68和0.22,均小于1.00。在不同温度条件下,草栖钝绥螨对二斑叶螨各螨态的捕食功能反应均符合HollingⅡ型;在19～31℃范围内,草栖钝绥螨对二斑叶螨各螨态的瞬时攻击率、最大日捕食量和捕食能力均随着温度升高呈先升高后降低的趋势,在28℃时达到最大值;而草栖钝绥螨对二斑叶螨各螨态的处理时间随着温度升高呈先缩短后延迟的趋势,在28℃下处理时间最短。在相同温度下,草栖钝绥螨对二斑叶螨卵、幼螨和第1若螨的捕食作用较强。在有限的捕食空间和二斑叶螨密度固定的条件下,草栖钝绥螨单头捕食量和捕食作用率随其自身密度的增加而逐渐下降,说...     

新疆肉用绵羊颗粒细胞抑制素βA基因RNAi载体的构建及其干扰效率验证

抑制素βA基因(inhibin-βA,INHβA)的表达与绵羊(Ovis aries)的产羔数有一定关系。为了观察INHβA对绵羊发情性状的影响以及在目的基因沉默后,引起的发情性状相关激素变化的情况,本研究利用RNAi技术构建载体干扰INHβA的表达。根据GenBank上绵羊INHβA(GenBank:NW_004080167.1)mRNA的序列设计干扰片段,通过酶切和测序验证,成功构建了4个INHβA基因RNAi质粒载体PLLU2G-shINHβA-1(I-1)、PLLU2G-shINHβA-2(I-2)、PLLU2G-shINHβA-3(I-3)、PLLU2G-shINHβA-4(I-4)和1个空载体(赛亚公司的PLLU2G)阴性对照;在成功分离卵巢颗粒细胞并建立培养体系后,利用Lip2000介导干扰载体转染细胞,通过荧光定量RT-PCR检测干扰前后INHβA的表达量。结果显示,4个干扰载体的干扰效率依次为34%,58%,39%,19%,其中I-2对INHβA表达的沉默效果最好。通过卵巢注射干扰载体I-2,检测干扰后绵羊血清INHβA、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二酮(E2)的含量。结果显示,注射干扰载体后INHβA和FSH分别呈现明显的下降和上升波峰,而血清中LH和E2水平没有发生明显变化。     

捻转血矛线虫感染性三期幼虫gst基因的筛选及抗干燥功能分析

为研究干燥作用对捻转血矛线虫L3期幼虫mRNA表达的影响,筛选并分析干燥相关表达基因,本试验利用mRNA差异显示技术得到了捻转血矛线虫干燥相关基因,通过相对荧光定量PCR验证所获基因的表达情况,并在秀丽隐杆线虫中通过RNA干扰抑制相关同源基因的表达检测干燥后复苏虫体生存率以研究基因抗干燥功能。结果显示,差异表达序列GH-U02A与已知捻转血矛线虫谷胱甘肽-S-转移酶(GST)氨基酸同源性为94%。对秀丽隐杆线虫Ce-gst-7基因进行RNA干扰后,虫体在干燥后的生存率降低,证明gst基因在线虫中有抗干燥功能。     

动物医院临床血清样品中干扰抗体的筛查及干扰消除

为了筛查动物医院临床血清样本中的干扰抗体以避免其实验室检测结果呈现假阳性,影响临床诊断,试验采用一种独立于物种的双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法对来自于福建省部分地区动物医院接诊的犬、猫血清样本进行干扰抗体筛选和评估,用鸡IgY替换纯化小鼠IgG进行干扰抗体消除试验,并对干扰抗体阳性率与样本基本特征进行关联性分析。结果表明：在83份犬血清样本中,有19份样本为干扰抗体阳性,阳性率为22.9%;在81份猫血清样本中,有11份样本为干扰抗体阳性,阳性率为13.6%。经干扰抗体消除试验后,所有阳性血清样本中的干扰抗体均得到了有效消除。不同年龄、性别、绝育情况与品种犬之间的干扰抗体阳性率均差异不显著(P>0.05);不同年龄猫之间的干扰抗体阳性率显著差异(P<0.05),不同性别、绝育情况与品种之间的干扰抗体阳性率差异不显著(P>0.05)。说明所检测的犬、猫血清样本中存在干扰抗体,用鸡IgY替换纯化小鼠IgG可对干扰抗体进行有效消除。     

松材线虫侵害马尾松林后群落谱系多样性和结构动态

调查松材线虫Bursaphelenchus xylophilus侵害马尾松Pinus massoniana林不同时间的4个群落和邻近的1个常绿阔叶林群落,利用群落净谱系亲缘关系指数(NRI)和净最近种间亲缘关系指数(NTI)等,分析松材线虫侵害马尾松林后群落谱系结构和谱系多样性动态。结果表明:松材线虫侵害后,群落物种和谱系多样性下降,侵害12 a后与常绿阔叶林的多样性最接近,侵害4,8 a群落内的物种和谱系与常绿阔叶林相似性最高,侵害0 a的与常绿阔叶林相似性最低;松材线虫侵害0,4,8 a的整个群落的谱系结构发散,侵害12 a与常绿阔叶林的谱系结构聚集。松材线虫侵害后,马尾松林群落向常绿阔叶林演替,同时,环境过滤对整个群落物种的组成起主要筛选作用。     

七星瓢虫对草地贪夜蛾低龄幼虫的捕食能力评价

为了评估七星瓢虫Coccinella septempunctata对重大入侵害虫草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda（J.E.Smith）的防控效果，本试验在室内条件下开展了七星瓢虫对草地贪夜蛾1龄、2龄幼虫的捕食功能反应和种内干扰研究。结果表明：七星瓢虫对草地贪夜蛾幼虫的捕食功能反应均符合HollingⅡ模型，七星瓢虫对草地贪夜蛾1龄幼虫的日最大捕食量、瞬时攻击率和处理时间分别为233.100头、1.204和0.103 h；对草地贪夜蛾2龄幼虫的日最大捕食量、瞬时攻击率和处理时间分别为41.220头、1.075和0.582 h。七星瓢虫的搜寻效应随猎物密度的增加而逐渐降低。七星瓢虫对草地贪夜蛾的捕食作用受到较强的种内干扰。试验证明七星瓢虫对草地贪夜蛾具有较好的控害效果，可用于对草地贪夜蛾的防控实践。