番茄新品种东农719 的选育

东农719 是以051394 为母本，以051162 为父本配制而成的中熟番茄一代杂种，高抗ToMV、叶霉病、枯萎病、黄萎病和根结线虫病。大果型，单果质量200～240 g。幼果无绿肩，成熟果粉红色，颜色艳丽，圆形，果面光滑美观，果实硬度0.54 kg·cm-2，耐贮运。大棚栽培每667 m2 产量10 000～12 000 kg，适合设施早春及秋季延后栽培。     

土壤施钙对芒果果实钾、钙、镁含量及品质的影响

以"台农1号"芒果为试材,田间试验研究了花前土施不同用量硝酸钙对芒果果实钾、钙、镁含量及产量、品质的影响。结果表明:(1)与不施钙相比,土施钙肥可明显提高果实糖酸比,其原因主要是降低了可滴定酸含量,提高了可溶性糖含量,同时可显著提高果实Vc含量,降低贮藏期果实发病率,在土施钙150 g/株时产量最高,增产率为14.25%。(2)在一定钙用量范围内,土施钙肥可显著提高果肉钙含量,使果皮、果肉与果核的钾、镁含量下降。(3)果皮、果肉及果核钙含量与钙肥用量呈正相关,钾、镁含量与钙肥用量呈负相关。(4)果实可溶性糖含量、Vc含量及糖酸比与钙肥用量呈正相关,果实可溶性固形物含量、可滴定酸含量、失重率、发病率与钙肥用量呈负相关。土壤增施钙肥有利于提高芒果果实品质,提高果实耐贮性。     

甘蓝自交不亲和相关基因BoPUB9的克隆及表达分析

自交不亲和性(self-incompatibility,SI)是指植株的雌蕊对自身花粉和异体花粉进行识别从而抑制自身花粉萌发的特性, PUB (Plant U-Box)蛋白在植物抗逆及信号转导过程中起着重要的作用。本研究通过分析甘蓝自花授粉0～60min的柱头转录组数据,筛选到1个受自花授粉诱导上调表达的PUB蛋白编码基因BoPUB9。BoPUB9 cDNA序列长度为1368 bp, gDNA序列全长1720 bp,含有1个臂重复结构域和1个U-box结构域。荧光定量PCR结果显示, BoPUB9基因在甘蓝的不同组织中均有表达,在萼片中的表达量最高,花瓣、雄蕊、柱头表达量次之,在花粉花蕾中表达量相对较低,同GUS染色结果保持一致。BoPUB9基因在自花授粉0～30 min内快速上调表达, 15 min后为异花授粉后表达量的20多倍,在30min后达到差异最大,自花授粉后的表达量为异花授粉的40多倍。亚细胞定位结果显示,BoPUB9蛋白在细胞核和细胞质中均有表达,且BoPUB9蛋白在大肠杆菌中被成功诱导表达,相对分子质量为51 kD,与预测结果一致。酵母双杂交与poll-down结果显示...     

甘蓝、大白菜和甘蓝型油菜EXO70A1基因的克隆与表达特性

从甘蓝、大白菜与甘蓝型油菜中分离出EXO70A1基因,对该基因的序列进行生物信息学分析, 然后转化酵母Y187, 应用半定量RT-PCR检测BoEXO70A1基因的表达特性。结果表明, 3种芸薹属植物EXO70A1序列长度均为1 917 bp,相似性97.1%, 它们的gDNA序列均为单一序列,长度分别为3 797、3 752和3 770 bp,一致度达91.0%,均由12个外显子及11个内含子组成,除了第4、第5、第6、第8个内含子外,其余内含子的保守性低于外显子; 推导的3种蛋白质序列(BnEXO70A1、BrEXO70A1和BoEXO70A1)的相似度与一致性分别达99.8%与98.1%,其二级结构、三维结构及理化特性高度相似。EXO70A1基因的11个内含子的剪切位点均符合“GU-AG”法则,剪切受体(AG)的前20~50个碱基存在一段保守的序列“CU(A/G)A(C/U)”; 3种芸薹属植物与拟南芥EXO70A1基因的12个外显子的对应序列长度完全相同,所构成的编码区的序列一致性达90.1%,相应的蛋白质序列的相似度与一致性分别达99.8%与93.7%; 分子进化分析表明, EXO70A1在整个EXO70蛋白家族中及不同的植物间表现出较高的保守性; BoEXO70A1在酵母细胞Y187呈现弱表达; EXO70A1在甘蓝的雄蕊、幼茎、幼嫩花瓣、雌蕊、幼根及叶片中均能表达,可能属于组成型表达基因,但是其表达量在不同发育时期的不同器官中存在差异,授粉前雌蕊中最高,雄蕊中最低。由此可知,EXO70A1在芸薹属植物中整体高度保守, 但在酵母转化株和甘蓝各器官中的组成型表达有所差异,推测EXO70A1在植物细胞中具有多种重要的功能。     

甘蓝SCR识别与结合SRK胞外域核心编码区DNA序列的酵母双杂交检测

SCR是芸薹属自交不亲和性的雄性决定因子。为研究SCR与SRK之间相互作用的核心区段,通过构建结球甘蓝的包含系列不同长度的SCR的cDNA序列的pGBKT7融合载体,利用酵母双杂交系统检测SCR与SRK之间的相互作用。结果显示,构建的载体均未出现自激活现象,所获得SCR全长与其相对应SRK胞外域具有相互作用,且相互作用核心编码区位于SCR编码基因的第97~186 bp处。实验结果还显示,此单倍型的SCR信号肽剪切位点及相邻的几个氨基酸残基对相互作用实验结果有干扰作用。以上结论为包括甘蓝在内的芸薹属自交不亲和机制的研究提供了新的实验依据。     

用SOE PCR方法获得新城疫病毒La Sota株全基因组cDNA

为了获得新城疫病毒La Sota株全基因组cDNA。根据SOE PCR方法要求设计引物,对NDV LaSota株进行分段扩增,然后应用SOE PCR方法连接各片段,全基因连接可得到约15000 bp的扩增片段,所得到的产物为NDV La Sota株全基因组cDNA。结果表明:采用SOE PCR方法合成的基因序列经测序及酶切鉴定,与GenBank上登陆的NDV La Sota株全基因组序列基本一致。本研究为构建新城疫LaSota株的感染性cDNA奠定了物质基础;并为进一步研究NDV的生物学特性、结构与功能的关系,探讨影响NDV毒力的因素、及研制新型疫苗载体提供了可靠依据。     

番茄Cf-5基因的SNP分子标记开发

根据已知的叶霉病抗性基因Cf-5基因序列,设计了3对嵌套引物。以4份抗病材料和4份非抗病材料DNA为模板,扩增番茄Cf-5基因并比较了抗感材料Cf-5基因的序列,在580、2 879 bp位点分别有T与C、G与T的碱基替换,设计了等位基因特异引物,获得了稳定的等位基因PCR产物,成功地开发了抗叶霉病基因Cf-5的SNP标记,为培育抗叶霉病番茄品种奠定了基础。     

布洛芬盐酸苯海拉明分散片的制备及质量评价

目的:筛选布洛芬盐酸苯海拉明分散片的最优处方并对其质量进行评价,为申报三类新药提供核心数据.方 法:以崩解时限、分散均匀性、硬度和口感为指标,单因素试验筛选崩解剂和矫味剂,正交试验优化处方,湿法制 粒制备分散片,HPLC测定其片剂的含量和溶出度.结果:崩解剂为6%PVPP(内外加比例2∶1),填充剂为24% MCC,粘合剂为2%的PVPk30溶液适量,矫味剂占2%且阿司帕坦/甜菊素为1∶9,所制备的分散片口感良好,崩 解时限为64.63±3.58s,5min分散片中布洛芬和盐酸苯海拉明的溶出度均达到了80%以上,含量和分散均匀性 均在规定范围内.结论:该分散片处方合理,工艺简单,质量指标符合分散片要求.     

番茄抗枯萎病I2基因的SNP分型

利用直接测序方法检测番茄抗感品种I-2基因的DNA序列,发现了2个SNPs。以其为3′端,设计等位基因特异引物及其互补引物,研究了特异引物3′端碱基错配类型和位置对等位基因特异PCR的影响,并对52份种质资源进行了SNP分型。结果表明在下游引物3′末端第1、2位引入错配碱基可以提高反应的准确性;引入C-T碱基错配的引物,退火温度在58℃时能把I-2基因的突变位点和感病品种的对应位点区分开来,为番茄抗枯萎病辅助育种提供了有力工具。