蕨麻猪白细胞抗原Ⅰ类分子3基因的克隆和序列分析

参照GenBank上登录的猪SLA-3基因序列(GenBank登录号:AF464010)设计1对引物,从经ConA刺激的蕨麻猪外周血液淋巴细胞中提取RNA,进行克隆、测序以及同源性分析和蛋白结构预测分析.结果表明:克隆的蕨麻猪SLA-3基因大小为1 086 bp,含一个完整的开放阅读框,编码361个氨基酸,还含有一段21个氨基酸的信号肽序列;核苷酸序列与GenBank上登录的SLA-3参考序列的同源性为93.1%;与牛、绵羊、山羊的同源性较高,而与鸡的同源性最低.蛋白分子结构预测表明,猪SLA-3基因编码的蛋白分子是由胞外区(303个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(35个氨基酸)组成的一种跨膜蛋白.     

复方磺胺间甲氧嘧啶—氧氟沙星注射液治疗猪咳喘症临床疗效试验

为验证复方磺胺间甲氧嘧啶—氧氟沙星注射液对猪咳喘症的临床疗效,选用伴有咳嗽、喘气等病症的患病猪为试验对象,以氧氟沙星注射液、磺胺间甲氧嘧啶钠注射液的疗效为对照。结果显示,复方磺胺间甲氧嘧啶—氧氟沙星注射液高、中、低剂量组对猪咳喘症的疗效均优于氧氟沙星注射液及磺胺间甲氧嘧啶钠注射液单独用药的疗效,其治愈率分别为73.3%、63.3%、50.0%,总有效率分别为90.0%、86.6%、73.3%;且复方磺胺间甲氧嘧啶—氧氟沙星注射液高、中剂量组与氧氟沙星注射液及磺胺间甲氧嘧啶钠注射液比较,其对治疗猪咳喘症的总有效率差异均显著（P〈0.05）。可见,复方磺胺间甲氧嘧啶—氧氟沙星注射液能有效治疗猪咳喘症,建议肌肉注剂量必须达到0.1mL/kg.b.w以上,且每天给药2次,连用3d。     

应用套式RT—PCR检测广西临床病料猪流感病毒

套式RT-PCR技术是在常规RT-PCR的基础上设计1对内套引物,对常规RT-PCR的产物再进行一次PCR扩增,该技术比常规RT-PCR技术的检测敏感度更高,更适于检测病原RNA含量极其少的临床病料。通过应用套式RT-PCR方法对来自广西7个市不同猪场的疑似猪流感的临床病料进行猪流感病毒检测,结果发现,被检的7个市均检出猪流感病毒,72份病料中31份为阳性,阳性率为43．06％,可见广西有呼吸道症状的病猪中有较高猪流感病毒感染率,必须重视和加强广西猪流感的监测与防控工作。     

Eukaryotic Expression and Activity Analysis of Capsid Gene of Swine Vesicular Disease Virus HK/70

The capsid protein precursor （P1）, which plays a major role for the generation of polypeptides of swine vesicular disease virus （SVDV）, was cloned from SVDV HK/70 strain into the retroviral vector pBABE puro and expressed in the mammalian cell line PK15 through the retroviral expression system. The activity of recombinant protein to induce immune response was evaluated in guinea pigs. IFA and Western Blot were used to detect the recombinant protein expression. The results showed that the recombinant protein could be recognized by SVDV positive serum, and animal test showed SVDV-specific antibodies. All of those results indicate that a retroviral-based vaccine carrying the capsid protein precursor （P1） of SVD is able to be expressed in the eukaryotic cell and elicites strong SVDV-specific immune responses in guinea pigs.     

猪瘟病毒野毒株TaqMan-MGB荧光定量PCR、鉴别方法的建立与应用

 【目的】建立一种快速、敏感、特异地检测猪瘟病毒野毒的一步TaqMan-MGB 荧光定量PCR方法,为临床鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒提供了准确可靠的工具。【方法】在猪瘟病毒基因组5′端非编码保守区设计一对猪瘟病毒通用引物和一条特异性MGB探针,通过优化,得到最佳反应体系和反应条件,进行特异性、灵敏度和临床样本符合检验。【结果】该方法在100～10-7范围内线性相关系数为0.998,检测极限达5.3×10-2pg 病毒核酸;对24个质控样本检测结果显示,该方法能检测除猪瘟兔化弱毒疫苗（HCLV）以外的猪瘟流野毒株,其它猪相关致病病原检测阴性;对122份疑似猪瘟样本检测的结果与本实验室建立的RT-nPCR方法的符合率为94.3％（115/122）,阳性和阴性符合率分别为86.4％（38/44）和98.7％（77/78）,Kappa值为0.87＞0.75。【结论】建立的一步TaqMan-MGB 荧光定量PCR方法能鉴别猪瘟野毒和HCLV疫苗毒,且特异性好、灵敏度高、与笔者先前建立的RT-nPCR方法对临床样本的检测结果具有高度的一致性。     

从全长cDNA克隆恢复猪瘟病毒方法的研究

以携带猪瘟病毒Thiverval株全长cDNA克隆的pAC/F101/T1-7载体质粒为模板,在体外转录病毒基因组RNA,并转染PK-15和BHK-21细胞,通过传代、RT-PCR、免疫过氧化物酶细胞单层试验鉴定,成功地在两种细胞中拯救出具有感染性的病毒粒子。同时,通过2种细胞转染效率的对比试验,成功建立了利用高转染效率的其它真核细胞作为病毒拯救的过渡细胞,然后再在猪肾细胞系上进行增殖的病毒拯救方式,极大提高了猪瘟病毒拯救的效率。     

模猪场猪瘟野毒感染情况调查

利用ELISA方法对广西6个规模猪场送检的1626份猪血清进行猪瘟野毒感染情况调查。结果6个规模猪场均存在猪瘟野毒感染,其中母猪感染率为7.86%~29.21%,平均为17.52%,种公猪感染率为0%~23.52%,平均为11.83%,育肥猪感染率为5%~22.45%,平均为15.5%,断奶仔猪感染率为8.24%~18.57%,平均为12.69%。此检测结果与猪场临床发病情况基本一致,病猪多表现为繁殖障碍型、温和型的非典型猪瘟。     

Nutritional strategies to cope with reduced litter weight gain and total tract digestibility in lactating sows

Twelve lactating sows were used to evaluate the effects of reducing dietary crude protein (CP) (14% vs. 12%) and increasing neutral detergent fibre (NDF) levels (18% vs. 22%) on litter performance, total tract apparent digestibility and manure composition in a 4 × 4 latin square arrangement during a 36‐day lactation period. Diets were isoenergetic (2.9 Mcal ME/kg) and had similar total lysine content (0.9%). In addition, a second aim was to compare a reference external marker method (Cr₂O₃) with an internal feed marker [acid‐insoluble ash (AIA)] for the calculation of apparent total tract digestibility of nutrients in lactating sows. The reduction of dietary CP level in lactating sows had no effect on either live‐weight or backfat thickness or apparent total tract digestibility of nutrients. However, the piglets' average daily gain (ADG) was reduced in low dietary CP diets, which suggests that sows reduced milk production due to an underestimation of certain essential amino acid requirements (e.g. valine). The increase of dietary NDF level did not affect sow and litter performance. Nevertheless, the total tract apparent digestibility of organic matter, CP and carbohydrates was reduced, and ether extract digestion was increased in high NDF compared to normal NDF diets equally balanced for ME and lysine content. The coefficients of total tract apparent digestibility of nutrients in lactating sows were greater when using AIA compared to Cr₂O₃ marker, regardless of dietary CP or NDF level, but their coefficients of variation were lower in the former than in the latter. In lactating sows, a trade‐off between litter performance and nutrient digestion is established when reducing dietary CP or increasing NDF levels while maintaining similar lysine content through synthetic amino acids and balancing metabolizable energy through dietary fat sources.     

基于畜禽粪便的有机肥中雌激素污染特征

为了解基于畜禽粪便的有机肥中残留雌激素的污染特征,防控有机肥生产中的污染风险。采集了市面上基于鸡粪、猪粪、牛粪制备的17种有机肥,测定了其有机质、氮、磷和钾含量;采用SPE-HPLC/FLD法检测了样品中雌三醇（E3）、17β-雌二醇（17β-E2）、双酚A（BPA）、炔雌醇（EE2）四种雌激素的含量,并将结果与新鲜鸡粪、猪粪、牛粪中四种雌激素含量进行对比。结果表明,鸡粪、猪粪和牛粪有机肥中均存在有机质含量偏低的样品;鸡粪有机肥中E3、17β-E2、BPA均值（干质量计）分别为270.22、2.71、87.93 μg·kg^-1;猪粪有机肥中E3、17β-E2、BPA、EE2均值为609.71、41.84、32.69、46.74 μg·kg^-1;牛粪有机肥中E3均值为50.96μg·kg^-1。畜禽粪便有机肥存在雌激素污染风险,且E3风险最大。所检测的三种畜禽粪便制备的有机肥中,牛粪有机肥雌激素含量、检出率均最低。有机肥中E3、17β-E2、BPA、EE2检出率分别为47.06%、11.76%、17.65%、5.88%,四种雌激素在新鲜粪便中检出率则为67.74%、70.97%、70.97%、58.06%,有机肥中雌激素检出率低于新鲜畜禽粪便。综上可见,基于畜禽粪便的有机肥中仍会有雌激素残留,应引起重视。     

生猪养殖设施工程技术研究现状与发展分析

生猪养殖业是我国畜牧业的支柱产业,随着生猪养殖从分散养殖向规模化养殖的发展,对生猪养殖设施工程技术的需求日渐增加。为了向生猪养殖业发展提供参考与支持,对生猪养殖关键设施工程技术的研究与发展状况进行了总结和分析。重点对猪舍、育仔、饲喂、粪污处理设施工程环节进行研究与发展分析。目前,我国已初步形成了适合国情的生猪养殖设施工程技术体系,但与国外发达国家的生猪养殖设施工程技术还存在一定差距,存在养殖设施工程各环节发展不均衡,养殖工程的机械化、自动化、智能化技术水平较低,关键养殖设施工程技术的基础性研究体系不健全,养殖设施配套性差,养殖机械的适用性和可靠性较低等问题。建立健全的生猪养殖设施工程技术的研究体系,加强养殖、饲料、设施工程、资源环境等方面相互融合与协作、深入与系统的研究,开展适于我国南北方配套应用的生猪养殖设施与设备研发,实现生猪养殖过程的健康/福利化、生态化、自动化及至智慧化,将是我国生猪养殖设施工程技术的发展方向。