根癌农杆菌介导ACS反义基因转化香蕉的研究

以香蕉(Musa spp.)品种‘天宝蕉’(Musa spp.,AAA类群)为试材,对以根癌农杆菌介导法的香蕉遗传转化体系进行较全面的研究,并以该系统进行了ACS反义基因转化香蕉的研究。结果表明:不经预培养的香蕉茎尖横切薄片,侵染前用附加0.1 mg/L甘露醇的高渗固体培养基前处理4 h,农杆菌重悬液浓度为OD600在1.0左右,重悬液中含100 g/L蔗糖,接菌时间为10~15 min,于26℃黑暗条件下共培养4 d,共培养培养基pH值为5.8是较为适合的转化条件;采用附加100 mg/L卡那霉素、2 mg/L AgNO3筛选培养基对共培养后的香蕉横切薄片进行筛选,共获得5个转ACS反义基因的抗性芽系;经GUS组织化学法及PCR检测,gus基因已整合进香蕉基因组。     

三明野生蕉Whirly转录因子的克隆及其在低温胁迫下的定量表达分析

以三明野生蕉叶片为材料,通过克隆获得Whirly基因的ORF,并研究Whirly基因在不同温度处理下的转录水平。结果表明:采用PT-PCR结合RACE技术,克隆得到三明野生蕉Whirly基因,其在GenBank的登录号为KC127691。Whirly的开放阅读框为738 bp,编码245个氨基酸。生物信息学分析显示,Whirly蛋白属于亲水蛋白,不具有信号肽,二级结构由α螺旋、β折叠和无规则卷曲组成,保守结构域预测显示该基因属于植物Whirly转录因子基因家族。实时荧光定量PCR分析显示,Whirly转录因子在不同低温胁迫下表达水平有较大差异,随着温度的降低,相对表达量呈"M"型变化模式,在20℃和4℃时达到较高的转录水平,结合前人研究结果可知,三明野生蕉Whirly转录因子可能参与了包括抗寒等多个抗逆途径的调控。     

霍山石斛HMGR基因的克隆及其定量表达分析

获得甲羟戊酸生物合成途径中的关键酶基因——3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因的信息是确定该基因与倍半萜类石斛碱含量相关性的重要基础工作。本研究采用RT-PCR结合RACE技术,以霍山石斛原球茎为材料,克隆得到霍山石斛HMGR基因的全长c DNA序列,其在Gen Bank中的登录号为KF011508。HMGR基因全长2 240 bp,包含144 bp的5′-UTR,407 bp的3′-UTR(含poly A),开放阅读框为1 689 bp,共编码562个氨基酸。生物信息学分析表明:该蛋白可能是定位于细胞质的一种疏水性不稳定蛋白,无信号肽,不含卷曲螺旋结构,具有14个功能位点、27个磷酸化位点,其二级结构由α螺旋、β折叠和无规则卷曲组成。系统进化树分析表明,该基因与黄姜HMGR基因亲缘关系最近,聚为同一类,主要负责催化萜类化合物生物合成途径中的辅酶A和甲羟戊酸的生成。q PCR结果显示:霍山石斛HMGR基因在茎中的表达量最高,而根中的表达量最低。     

马银花愈伤组织RoWUS基因及其启动子的克隆与表达分析

WUSCHEL(WUS)基因是植物干细胞的标志基因。采用同源克隆法结合RACE技术从马银花愈伤组织中克隆得到Ro WUS c DNA全长序列,采用染色体步移法克隆得到该基因的启动子序列,登录号分别为KF365488、KF861578。马银花Ro WUS c DNA全长1 123 bp,编码302个氨基酸;DNA序列2 001 bp,包含2个内含子和3个外显子;启动子序列3 122 bp。生物信息学分析表明:Ro WUS亚细胞定位于细胞核,是不稳定的亲水蛋白,无信号肽,具有跨膜结构,包含homeodomain功能位点。系统进化树分析结果表明:Ro WUS单独形成一个分支,与葡萄、大豆和苜蓿的亲缘关系最近。对Ro WUS的启动子进行分析表明,该启动子除了含有丰富的TATA-box和CAAT-box等基本元件以外,还含有多个光响应元件、逆境胁迫响应元件、激素应答元件和其他功能元件。q PCR结果表明:Ro WUS基因在马银花愈伤组织不同生长时期中呈先上升后下降的趋势,在第5个继代周期时表达量最高。外源赤霉素和脱落酸浓度为15 mg/L时表达量最高,说明Ro WUS基因在该浓度时对赤霉素和脱落酸的响应最强。     

《植物组织培养脱毒苗病毒的PCR检测》实验课程开设研究

植物组织培养是现代生物技术的重要组成部分,随着PCR检测技术在生产上的广泛应用,PCR法检测脱毒苗病毒实验课程的建立显得尤其重要。以香蕉试管苗束顶病病毒的PCR检测为例建立了新的实验课程,在实验内容设计、实验方法优化、实验课程安排及实验考核等方面进行了研究和探索。经过3年的有益实践表明,该课程取得了较好的教学效果,提高了大学生的科研能力和植物组织培养应用技能。     

龙眼体细胞胚胎的高频率萌发与植株再生

以龙眼胚性愈伤组织诱导产生子叶形胚状体为试验材料，比较了蔗糖、活性炭的质量浓度，椰乳的体积分数，光照度和成熟时间等因素对体胚“成熟”的影响以及不同成熟过程、成熟时间、胚状体形态、品种（基因型）等因素对龙眼体细胞胚胎萌发的影响．结果表明，龙眼体胚在含５０ｇＬ－１蔗糖、体积分数为０．０５的椰乳、１００ｍｇＬ－１肌醇的ＭＳ固体培养基上，在黑暗或弱光条件下，不论白色还是透明化（玻璃化）子叶形小胚状体，都可完成“成熟”过程．体胚对成熟培养的蔗糖质量浓度和成熟时间有特定的要求．经过成熟培养的体细胞胚胎，可高频率萌发成苗     

早熟金柑新品种‘金秋早’

早熟金柑新品种‘金秋早’是从福建省尤溪县‘尤溪金柑’园中优良实生单株选育而成。生长健壮。果实近球形,果皮橙黄至橙红色,单果质量17~26 g,皮肉脆嫩化渣,酸甜可口,风味浓。果汁可溶性固形物含量13%,总酸0.8%,总糖9%,维生素C 394 mg·L~(-1)。每果种子数5~7个。成熟期在11月上旬,比‘尤溪金柑’早15~20 d。适宜在福建省尤溪金柑适栽区种植。     

龙眼产期调节研究新进展

龙眼是我国著名的亚热带特产水果 ,由于产期集中 ,市场供应期很短。传统的产期调节方法如利用自然地理气候条件差异、早中晚熟品种搭配等 ,调节幅度和效果很有限。近年来龙眼科研工作者加强龙眼产期调节的研究 ,并在周年开花结果方面取得重大突破。现简介如下。近年 ,台湾的留美博士颜昌瑞教授发明了龙眼催花技术 (Ｆｏｒｃｉｎｇｆｌｏｗｅｒ) ,可实现周年开花结果。一年中任何时间 ,催花药剂处理后 4 5- 55ｄ即可开花。据颜博士的研究介绍 ,在不同时间、不同地点对不同品种及不同株龄龙眼处理均有催花效果。在泰国以高压苗处理之经验显示…     

(木奈)嫩芽总RNA的提取与纯化

以嫩芽为材料,对Trizol法进行改进提取总RNA,试验结果表明,加入10%PVPP与材料共研磨,并在Trizol提取液中加入1%β-巯基乙醇,可以完全排除酚类物质、色素等杂质的干扰;采用在匀浆液中加入终浓度为20%乙醇沉淀多糖、在裂解液抽提的上相中加入终浓度为3 mol/LLiCl沉淀RNA、在RNA的粗提液中加入适量的3 mol/LNaAc(pH5.2)和低浓度的无水乙醇沉淀多糖等方法相结合,可以有效地去除多糖的干扰,获得纯净、完整的RNA样品,用它为模板进行RT-PCR反应,获得PPO基因保守区约600～800 bp的cDNA条带;而单独采用在匀浆液中加入终浓度为20%乙醇沉淀多糖的方法,不能将样品中的多糖去除干净,这些残留的多糖会抑制逆转录酶的活性,导致逆转录反应的失败.     

余甘子(Phyllanthus emblica L.)Vc含量分析

采用2,6-二氯酚靛酚滴定法分析比较了余甘子各器官之间、同品种不同植株之间、不同余甘子品种之间以及与野生资源之间的Vc含量以及不同预处理方法对Vc测定的影响。结果表明．Vc在余甘子各器官中均有分布．以果实与初生幼叶中居多,茎、根中含量较低;皇帝甘与粉甘含量较多,但与其它品种的差异不大;5个野生资源单株Vc含量差异极显著。其中有3个野生单株的果肉Vc含量高于主栽品种粉甘。