5种海水养殖石首鱼类肠道菌群多样性的比较

为探究海水养殖石首鱼类肠道菌群的结构特征及种间差异,本研究采用基于Illumina Hiseq2500测序平台的高通量测序技术,对福建宁德三都澳养殖的5种石首鱼类(大黄鱼(Larimichthys crocea)、黄姑鱼(Nibea albiflora)、鮸状黄姑鱼(Nibea miichthyoides)、鮸鱼(Miichthys miiuy)、眼斑拟石首鱼(Sciaenops ocellatus))的肠道菌群进行了16S rDNA V3-V4区测序。各样本得到unique tags的数目在20351到43347之间,上述5种鱼类分别得到479、626、603、518和556个OTUs(operational taxonomic units),分类注释结果显示,这些OUT隶属33个门273个属。5种石首鱼类肠道内容物和肠道壁的样品均以变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes)细菌为主要优势菌群,约占总菌量的70%,在大黄鱼肠道菌群中,螺旋菌门细菌占比达26.19%,也是其主要优势菌群;在属水平上,Bacillus、Photobacterium、Vibrio、Chryseobacterium、Sphingomonas、Pseudomonas等属细菌是5种养殖石首鱼类的主要类别。对养殖石首鱼类的肠道菌群多样性的分析表明,Shannon’s 群落多样性指数：黄姑鱼>鮸状黄姑鱼>眼斑拟石首鱼>鮸鱼>大黄鱼;各种鱼类的肠道内容物菌群的多样性均高于肠道壁;对不同鱼类间的肠道菌群差异性分析显示,大黄鱼与眼斑拟石首鱼之间肠道菌群的相似度要高于黄姑鱼、鮸状黄姑鱼和鮸鱼,而黄姑鱼、鮸状黄姑鱼和鮸鱼之间的相似度较高。综上所述,5种海水养殖石首鱼类肠道菌群中存在有自身特色的核心菌群,肠道菌群结构的差异与种类间的系统进化关系相似,证明肠道菌群结构与宿主遗传因素密切相关。     

刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备与特性分析

为获得刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体并初步分析单抗特性,提取刺激隐核虫幼虫膜蛋白,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/O细胞融合,以间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞。通过ELISA方法检测单克隆抗体的亚类及效价;通过SDS-PAGE和western blot分析单抗特异性结合的蛋白,并以串联质谱方法对所识别条带进行鉴定;采用免疫荧光法分析单抗的抗原结合位点和特异性。结果得到3株能稳定分泌刺激隐核虫幼虫膜蛋白抗体的细胞株(5D11AG5、5H9BG3、6E11CE7)。这3株细胞株产生的抗体亚型均为IgM,ELISA效价分别为1∶3200、1∶25600、1∶51200。单抗5D11AG5和单抗5H9BG3株能够识别~35kDa的刺激隐核虫幼虫膜蛋白线性抗原表位,单抗5D11AG5所识别的蛋白与数据库中刺激隐核虫表面抗原蛋白、嗜热四膜虫微管蛋白(tubulin)的肽段具有较高覆盖率。免疫荧光结果显示单抗5D11AG5和单抗5H9DG3识别部位主要在虫体表面近胞口的前端,而单抗6E11CE7识别虫体表面外膜。刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备,为刺激隐核虫功能性蛋白的筛选、纯化和功能分析提供了条件。     

多抗技术对多种鱼类血清免疫球蛋白的研究

亲和层析纯化鳜鱼血清免疫球蛋白,制备针对鳜鱼血清免疫球蛋白的兔多克隆抗体,采集常见经济鱼类血清25种,利用优球蛋白法纯化血清,通过间接ELISA的方法筛选与兔抗鳜鱼Ig反应的鱼类血清,结合变性还原条件与非变性非还原条件下的蛋白印迹试验显示:制备的兔抗鳜鱼Ig识别鲈形目中鳜鱼、加州鲈鱼、卵形鲳鲹、尼罗罗非鱼、花鲈、红罗非...     

创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡细胞免疫的影响

应用创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡进行腹腔注射免疫,免疫后35 d进行攻毒试验,结果表明,经免疫的欧洲鳗鲡相对存活率达75%,证实创伤弧菌ISCOMs疫苗具有较好的免疫保护性。对创伤弧菌ISCOM疫苗免疫后的欧洲鳗鲡细胞免疫水平的淋巴细胞进行转化试验,检测结果分析表明,试验组与对照组的淋转指数差异不显著,推测该疫苗诱导的免疫保护方式可能与细胞免疫保护无密切相关性。     

赤点石斑鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析

赤点石斑鱼血清免疫球蛋白经饱和硫酸铵沉淀,Sephrose-4B柱提纯后免疫BALB/c小鼠.经细胞融合和抗体分泌细胞筛选,获得2株抗石斑鱼免疫球蛋白的单克隆抗体,分别命名为Mab-8D6和Mab-2D3,两株单抗的亚级份均为IgG1,腹水抗体的ELISA效价为106,对纯化的石斑鱼免疫球蛋白的检测灵敏度为62 ng,...     

PCR法筛选大黄鱼微卫星DNA

构建大黄鱼部分基因组DNA文库。以M13通用引物和根据微卫星核心序列所设计的引物，用PER法直接对文库进行扩增，获得15个PER阳性克隆，对阳性克隆测序。测序结果说明，6个阳性克隆中含有微卫星核心序列，用Primer3引物设计软件对侧翼序列进行微卫星引物设计。用6对引物扩增大黄鱼基因组，PER结果经6％聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，其中2对引物能得到稳定的扩增。     

福建养殖大黄鱼(Pseudosciaena crocea)RAPD标记及多态性调查

运用DNA随机扩增多态检测(RAPD)技术和4种OPV引物,对采自福建平潭和罗源的3份养殖大黄鱼样品进行遗传多样性分析。在检出的39个位点中,14个位点显性频率为1,可作为筛选大黄鱼物种标记的参考位点。样品多态位点检出率平均48.2%。样品平均杂合度(H)分别为0.251 5、0.275 5和0.257 5。2004年采自平潭和罗源的两份样品在部分已知位点存在明显的基因型频率差异,显示网箱群体之间可以出现某种程度的遗传分化。     

网箱养殖大黄鱼"白肝病"防治初探

2000年4至9月，宁德地区网箱养殖大黄鱼出现大面积，大规模死亡，其主要症状为肝脏严重失血，肝组织受损，呈黄白色，并伴有烂鳃等症状，根据临床表现、检查诊断、，并结合治疗效果。本文将该病初步命名为“白肝病”现结合该病的防治，及对其产生的可能原因作初步探讨。     

不同培养条件水滴伪康纤虫种群生长研究

为揭示水滴伪康纤虫在不同培养条件下的种群动力学规律,初步探讨不同温度（6、12、20℃）及不同培养液条件（虾肉浸出液、麦粒浸出液、牛肉浸膏培养液和蛋白胨培养液）对其种群增长的影响。结果显示,4种培养液在设定浓度范围内,水滴伪康纤虫的种群密度呈现随着食物浓度增大而增长的趋势;不同温度下,6℃时繁殖速度慢,经历长时间（9 d左右）的停滞期后进入增长期,各培养液组在第12 d时达到种群密度峰值,但种群密度低;20℃时各培养液组虫体繁殖快,牛肉膏培养液组在第3 d 即达到种群密度的峰值（57490 ind · mL -1）,但衰退迅速;12℃时,4种培养液中的种群密度均显著高于其他2个温度处理,且稳定期维持时间长,更适宜水滴伪康纤虫种群生长。12℃时各培养液的最大种群密度表现为：牛肉膏（2.25 g·L -1）＞虾肉（4.5g·L -1）＞麦粒（10.14g·L -1）＞蛋白胨（2.25g·L -1）;种群自然增长率高低表现为：牛肉膏（2.25 g·L -1）＞麦粒（10.14g·L -1）＞虾肉（4.5g·L -1）＞蛋白胨（2.25g·L -1）,虾肉与麦粒浸出液种群密度能达到较大值,且稳定期明显长于其他培养液。结果表明,牛肉浸膏培养液适用于短期种群的快速扩大培养,虾肉及麦粒浸出液适用于试验室保种,水滴伪康纤虫在12℃培养可达到种群密度的最大值,20℃时种群自然增长率最高。研究结果提供了试验室培养和保存水滴伪康纤虫的方法,并为海水养殖动物的水滴伪康纤虫病研究提供了试验生态学数据。     

中草药浸出液体外驱杀两种水产致病性盾纤虫的研究

水滴伪康纤虫和海洋尾丝虫是严重危害海水养殖鱼类的兼性寄生纤毛虫,中草药在水产寄生虫病的防治中有着广泛的应用,具有无药物残留,无污染等优点.应用10种常见中草药浸出液对两种盾纤虫的体外驱杀效果的研究表明,水滴伪康纤虫对首乌藤、大黄和辣椒的敏感度较高,在药物浓度为0.5 g/L时,驱虫率分别为0.85、0.59和0.59,与空白对照组对比差异极显著(P<0.01);而海洋尾丝虫则对石榴皮、贯众、首乌藤和辣椒表现出了较高的敏感度,在药物浓度为0.5 g/L时,驱虫率分别为0.55、0.51、0.43和0.37,与空白对照组相比差异极显著(P<0.01).马鞭草、槟榔、虎杖、连翘、地榆等几味药物对两种盾纤虫的驱杀效果则不明显.试验结果提示,首乌藤和辣椒两种中草药浸出液在体外均表现出了对两种盾纤虫较好的驱虫效果,同时不同药物的驱杀效果差异也表明两种盾纤虫对药物的反应机制可能存在着一定的差异.