水貂绿脓杆菌分离株的血清型分析和Eric-PCR指纹图谱多样性研究

为了掌握山东地区水貂出血性肺炎流行情况,从2012年山东省内多个养貂社区进行水貂出血性肺炎流行病学调查。从病貂中分离获得48株绿脓杆菌,分别测定了分离株的生化特性、血清型以及部分菌株对小鼠与水貂的半数致死量（LD50）,同时运用Eric-PCR方法对分离进行了进行分型。结果显示,48株分离菌株与标准菌株生化特性基本一致,血清型G型为36株,血清型Ⅰ型为7株,血清型C型为4株;48株分离株大多数对恩诺沙星最敏感;动物试验显示,48株分离株对小鼠与水貂均能致病,所选4株分离株对小鼠与水貂的LD50有差异,且水貂对所选菌株显著敏感于小鼠;分子分型分为13个基因型。结果表明,该地区水貂出血性肺炎病原呈现遗传多样性。本试验为水貂出血性肺炎的防治提供了理论依据。     

基于MDCK悬浮细胞生产禽流感疫苗的放大工艺开发

以成功放大流感疫苗生产工艺至1500 L规模为目标,通过冷模实验研究了不同体积反应器条件下的混合时间,流体剪切力,体积氧传递系数和二氧化碳传递系数的区别。在1500 L反应器中进行培养时,转速为60 r/min,深层通气速率控制在22.5 L/min能够较好的满足供氧需求和提高CO2的移除效果,同时也降低了剪切力对细胞的损伤。病毒感染细胞60 h后,病毒滴度为211 HA units/25 μL,单位细胞病毒产量（Svy）为13145.05 virions/cell,2 L反应器的Svy为13298.70 virions/cell,两者仅相差1.16%。     

培养基组分及操作参数对抗体多聚体形成的影响

近年来,国家食品药品监督管理局基于药物安全性的考虑对于治疗性蛋白的质量提出了更高的要求,而蛋白多聚体能引起人体免疫反应,被认为是关键质量属性(critical quality attributes,CQA)。采用培养基组分添加试验和操作参数控制试验的方法,系统研究了培养基中氧化还原物质和培养过程参数(温度和p H值)对抗体多聚体形成的影响。结果表明,半胱氨酸的添加能显著抑制多聚体的形成,培养基中半胱氨酸添加浓度增至30 mmol/L,多聚体含量下降40%。而铜离子的添加浓度从500μmol/L降至0μmol/L,多聚体含量则降低了43%。培养温度从35℃降低至32℃,重链结合蛋白(Bi P)和蛋白二硫键异构酶(PDI)的表达水平均提高了89%,细胞翻译后修饰能力显著加强,分泌至上清液中的抗体多聚体含量相应下降了38%。研究结果明确了生产工艺和产品关键属性之间的关系,为后续设计优化以质量为先导的培养过程,生产质量可控、安全、有效抗体药物奠定了基础。     

基于产品质量分析的中国仓鼠卵巢细胞流加培养工艺的优化

在前期建立的流加培养工艺的基础上，考察培养过程中的pH值对流加培养过程的影响，明确了过程控制参数pH值与产品关键质量属性（critical quality attributes，CQAs）间的联系，建立了产物质量属性和过程操作属性间的关系，并确认pH值为抗体融合蛋白生产工艺中的关键控制参数。结果表明，流加培养过程随着培养pH值的提高，抗体融合蛋白的生物学活性呈一定程度的下降趋势，但唾液酸含量却呈明显的上升趋势；此外，在pH值6．9和pH值7．0的条件下培养过程中的最大细胞密度、活力、蛋白表达量均优于其他条件，确定6．95±0．05为过程的控制pH值。将此培养工艺放到大200 L中试生产规模，结果与2 L反应器的结果基本一致。     

百合萜烯合成相关基因LiGGPPS大小亚基基因的克隆、表达及功能分析

香叶基香叶基焦磷酸合酶（GGPPS）是调节萜类化合物生物合成的关键酶，为了研究GGPPS基因在百合萜类物质合成中的作用，本试验以‘西伯利亚’百合（Lilium ‘Siberia’）为试材，克隆了GGPPS大亚基（LiGGPPS.LSU）和小亚基（LiGGPPS.SSU）基因，并分析其表达和功能。通过生物信息学分析、相对表达量分析、荧光定量PCR、亚细胞定位、基因沉默（virus induced gene silencing，VIGS）预测并验证其特征及功能，揭示其表达模式。结果表明，LiGGPPS.LSU和LiGGPPS.SSU分别为1 100 bp和1 040 bp，LiGGPPS.LSU和LiGGPPS.SSU的氨基酸序列与其他物种的GGPPS.LSU和GGPPS.SSU的氨基酸序列具有较高的一致性，系统进化树显示它们分别与薯蓣（Dioscorea cayenensis subsp. rotundata）和深圳拟兰（Apostasia shenzhenica）亲缘关系最近。LiGGPPS.LSU和LiGGPPS.SSU基因均定位在叶绿体中，表达量随百合的生长发育呈现先上升后下降的趋势。LiGGPPS.LSU在花被片中高量表达，LiGGPPS.SSU在花药中显著高量表达。VIGS试验显示芳樟醇、罗勒烯、月桂烯释放量下降。LiGGPPS.LSU和LiGGPPS.SSU基因对百合花香单萜类物质合成具有重要作用，本试验为进一步研究百合GGPPS以及相关代谢途径提供理论基础。     

抗干旱耐盐碱树种的选择

肇东实验林场位于黑龙江省西部盐碱地中心地带,在苏打碱化草甸土、碱化草甸黑钙土等盐碱地类型上,引进400多个树种和无性系,经历50年,选出了A15杨、A43杨、小黑杨14,樟子松、黄榆、水曲柳、锦鸡儿、胡枝子、丁香、大扁杏等树种。同时,观察到造林对苏打盐渍土改良的初步效果。     

黑龙江省西部干旱盐碱地区果树新品种

果树新品种以其果食优质、产量高、结果期长等优势深受欢迎、特别是龙冠、龙丰、K_9梨等。但是在我省西部干旱盐碱地区,由于立地条件恶劣,果树新品种在这一地区栽培成活率及保存率都很低,打消了人们栽培的积极性。笔者通过多年的实验,摸索出果树新品种在这一地区的栽培经验,解决了新品种在西部“落户”这一难题。     

基于遗传模糊神经网络算法的棉花轧花过程智能监控方法研究

针对棉花轧花过程质量控制,这类缺乏精确数学描述的复杂实际对象,提出了基于遗传模糊神经网络的智能监控新方法,描述了遗传神经网络ＢＰ算法的工作原理,阐明了基于人的模糊经验规则实现的轧花过程控制的模型和学习算法。所提出的遗传算法同模糊神经网络相结合的方法提高了轧花过程监控的实时性,并具有预报性好的特点。     

检测水貂出血性肺炎绿脓杆菌的比色LAMP法的建立与应用

为了快速有效检测水貂出血性肺炎病原绿脓杆菌,本研究结合金属指示剂HNB特性建立了快速检测绿脓杆菌比色LAMP法。根据绿脓杆菌外毒素A基因设计引物,建立了检测LAMP法;并且对该方法进行了特异性、灵敏性分析;同时进行了初步应用。结果显示,该方法特异性强,灵敏性好,可检测167CFU/mL的菌体,对病貂肺脏检出率高。结果表明,该比色LAMP法可以有效地检测水貂出血性肺炎绿脓杆菌。     

高油大豆栽培技术要点

高油大豆是指含油率达到21％以上、蛋白质含量不低于38％（干基），主要用于榨油的大豆。东北三省及内蒙古东部地区是高油大豆的生态适宜区，也是我国最大的大豆产区，大豆播种面积和产量均占全国的一半。