柑桔碎叶病的热治疗

在光照培养箱中用35/28℃、40/30℃、42.5/30℃(每天光、暗均为12小时)不同变温热处理新会橙病苗92天可获得部分无碎叶病苗木,102天后所获苗木均不带碎叶病毒。 在玻璃温室中7～9月自然高温处理带病蕉柑、德森温州蜜柑、槾桔病苗60天,不能使碎叶病毒失活,但上一年8月份嫁接的苗木一直置于玻璃温室中,第二年9月份(计380天)采芽繁殖鉴定,所得植株均不带碎叶病毒。     

柑橘抗CTV转基因与分子标记研究进展

综述了柑橘抗衰退病基因工程中两方面的研究进展。介绍多种来源于柑橘衰退病毒(Citrustriztezavirus,CTV)核酸序列的转基因柑橘和抗性种质资源中抗性基因的分子标记,以及所涉及的方法和遇到的问题。目前研究表明,虽然已成功实现对病毒衣壳蛋白(CP)等基因的转化和Ctv等抗性基因的标记,但尚未获得对CTV有高度抗性的转基因柑橘,而抗性基因亦不能实现定点克隆和转化。因此上述两方面研究还有待深入。     

柑橘裂皮病类病毒的一步RT-PCR法检测及其在甜橙体内的分布

柑橘裂皮病是由柑橘裂皮病类病毒(Citrusexocortisviroid,CEVd)引起的一种重要的柑橘病害。分别采用快速微量核酸提取法和SDS-KAc抽提法在表现症状的Etrog香橼中提取核酸,采用一步RT-PCR法对CEVd进行检测,结果显示SDS-KAc法可以消除带毒样品中非特异性条带。从嫁接接毒的铜水72-1锦橙植株的接穗部取嫩叶、老叶、皮,从砧木部茎杆上取老皮以及根皮分别提取总核酸进行RT-PCR检测,分析CEVd在甜橙体内的分布情况。初步检测结果表明在接穗的嫩叶、老叶、皮,砧木部茎杆的老皮和根皮上都可以检测到CEVd,以接穗部叶和皮检出稳定性高。     

柚新老枝叶中柑橘衰退病毒的DTBIA检测

应用直接组织印迹免疫法(Direct Tissue Blot Immuno-Assay,DTBIA)检测了中国农业科学院柑橘研究所品种资源圃的212株柚植株,呈柑橘衰退病毒阳性的有94株,占样品总量的44.3%.进一步对85株DTBIA阳性柚植株的新老枝叶进行检测,结果初步明确CTV在柚植株中存在不均匀分布现象,其中,新茎的平均CTV检出率最高,为77.9%,其次为新叶的77.1%;老叶和老茎的CTV检出率相对较低,分别为40.5%和38.7%.     

重庆地区柑桔衰退病毒多态性研究

柑桔衰退病毒(CTV)存在着复杂的株系分化现象.在使用弱毒株交叉保护防治柑桔衰退病时需要对田间病毒株系组成进行分析,并对选用的株系进行单蚜分离纯化.作者运用限制性片段长度多态性和单链构象多态性对田间获得的168个CTV样品和2个蚜传毒株的外壳蛋白基因进行分析,了解重庆市田间CTV组群构成情况,发现田间CTV以多株系混合发生为主,其中主要是CP/HinfⅠRFLP第1、3和6组群,约占总数的90%,并以强毒株混合感染为主.甜橙中CP/HinfⅠRFLP的组群构成最为复杂.单头褐色桔蚜从柚类至甜橙传播CTV的效率低(不足1%),该蚜的取食可改变CTV的株系组成.     

重庆柑橘主产区衰退病毒组群分析

柑橘衰退病毒(CTV)存在严重的株系混合侵染现象,因此需要用一定的方法对混合株系进行识别。本文应用CPGs/HinfⅠ对采自重庆市6个主要柑橘产区的92个CTV阳性样品进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,结果发现在甜橙上既有单一株系侵染(CPGs/HinfⅠRFLP组群以3为主),也有混合株系侵染(CPGs/HinfⅠRFLP组群以1、3或1、3、6组群为主),而在柚类上只带单一的CPGs/HinfⅠRFLP6组群。     

一步法RT-PCR检测柑橘鳞皮病毒

柑橘鳞皮病是一种极具破坏性的柑橘病害,广泛分布于南美及地中海地区。我国目前缺乏对该病害的快速检测技术。以柑橘鳞皮病毒(CPV)的外壳蛋白基因(CPG)为靶标,初步建立了一步法RT-PCR快速检测体系,扩增产物与NCBI数据库中已知CPVCPG的核苷酸序列进行比对,2者序列间同源性超过99%。     

重庆地区马铃薯上黄瓜花叶病毒的检测及亚组鉴定

采用抗原直接包被ELISA对采自重庆11个马铃薯主产区的259份马铃薯病毒病样品进行了黄瓜花叶病毒 Cucumbermosaicvirus,CMV的检测及亚组鉴定.共有233份样品检测到CMV,总检出率达91.60%;其中属 CMV Ⅰ亚组的样品为197份,占84.55%;另36份样品为CMV Ⅱ亚组侵染,占15.45%;未检测到CMV Ⅰ和 CMV Ⅱ的复合侵染.这些结果表明,CMV Ⅰ是重庆地区马铃薯上的优势CMV亚组类型.     

柑橘黄化脉明病毒的TGB基因生物信息学分析及亚细胞定位

柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)是一种正义单链RNA病毒。其基因组含有6个开放阅读框(ORF),其中ORF2、ORF3和ORF4组成了三基因连锁结构(triple gene block,TGB)。以感染CYVCV的尤力克柠檬[Citrus limon(L.)Burm.f.]植株的总RNA为模板,扩增和克隆了CYVCV的TGB基因,并开展了其编码蛋白的理化性质和分子特性等生物信息学分析;进而通过In-Fusion~?技术构建了TGB各基因的亚细胞定位载体,经农杆菌介导转化洋葱表皮细胞并在荧光显微镜下进行亚细胞定位观察。生物信息学分析结果表明,CYVCV-TGB具有与Potexvirus属病毒TGB相似的理化性质和分子特性,可能参与病毒在寄主中的运动且需要外壳蛋白的参与。亚细胞定位结果显示,TGBp1定位于细胞壁(膜)上,TGBp2和TGBp3主要定位于细胞壁(膜),少量呈星点状定位于细胞内。研究结果为揭示CYVCV在寄主中的运动机理奠定了基础。     

土霉素对柑橘黄龙病的防治效果及对柑橘产量和品质的影响

为有效防控柑橘黄龙病，于2017年在佛罗里达大学柑橘研究与教育中心的奥本代尔市柑橘试验场进行田间试验筛选黄龙病的防治药剂及其浓度，测定注射土霉素后叶片中柑橘黄龙病菌亚洲种Cadidatus Liberibacter asiaticus、土霉素、淀粉含量、柑橘产量、出汁率、可溶性固形物含量和酸度，显微镜下观察注射土霉素后淀粉粒的分布。结果表明，浓度为1.6g/株土霉素处理180 d后柑橘叶片中黄龙病菌亚洲种含量减少幅度最大，为91.78%；注射浓度为1.6g/株土霉素后7d，叶片中土霉素含量达142.2 μg/kg，注射后11 d叶片中土霉素含量达到最大，为239.8 μg/kg，注射后45 d叶片中土霉素含量低至99.6 μg/kg以下；注射后7~90d，叶片中黄龙病菌亚洲种含量呈波浪形变化，注射90 d后叶片中黄龙病菌亚洲种含量一直处于增长趋势，叶片中黄龙病菌亚洲种含量总体随着土霉素含量的升高而降低；注射浓度为1.6g/株土霉素后，叶片中淀粉含量大幅度下降，60d时达到最低值，为3.3 μg/mm²，90d时达到峰值，为14.5 μg/mm²；单株产量为16.7 kg，与注射浓度为0.8 g/株土霉素处理差异不显著，但均显著高于其它2个处理；柑橘出汁率、可溶性固形物和酸度均与清水对照差异不显著。表明土霉素可有效抑制黄龙病菌亚洲种，减少柑橘叶片内淀粉含量，增加柑橘产量，但对果实品质未产生显著影响。