全文获取类型
收费全文 | 10550篇 |
免费 | 456篇 |
国内免费 | 1078篇 |
专业分类
林业 | 495篇 |
农学 | 807篇 |
基础科学 | 248篇 |
817篇 | |
综合类 | 4695篇 |
农作物 | 586篇 |
水产渔业 | 449篇 |
畜牧兽医 | 2888篇 |
园艺 | 566篇 |
植物保护 | 533篇 |
出版年
2024年 | 113篇 |
2023年 | 384篇 |
2022年 | 414篇 |
2021年 | 496篇 |
2020年 | 463篇 |
2019年 | 589篇 |
2018年 | 297篇 |
2017年 | 504篇 |
2016年 | 662篇 |
2015年 | 565篇 |
2014年 | 701篇 |
2013年 | 666篇 |
2012年 | 920篇 |
2011年 | 858篇 |
2010年 | 776篇 |
2009年 | 698篇 |
2008年 | 617篇 |
2007年 | 537篇 |
2006年 | 357篇 |
2005年 | 252篇 |
2004年 | 197篇 |
2003年 | 165篇 |
2002年 | 134篇 |
2001年 | 73篇 |
2000年 | 64篇 |
1999年 | 75篇 |
1998年 | 69篇 |
1997年 | 62篇 |
1996年 | 59篇 |
1995年 | 55篇 |
1994年 | 39篇 |
1993年 | 34篇 |
1992年 | 33篇 |
1991年 | 33篇 |
1990年 | 39篇 |
1989年 | 28篇 |
1988年 | 16篇 |
1987年 | 12篇 |
1986年 | 5篇 |
1985年 | 5篇 |
1984年 | 2篇 |
1982年 | 2篇 |
1981年 | 2篇 |
1980年 | 2篇 |
1974年 | 1篇 |
1973年 | 1篇 |
1965年 | 1篇 |
1963年 | 2篇 |
1957年 | 1篇 |
1955年 | 3篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 16 毫秒
991.
为分析猪圆环病毒2型(PCV2)与猪细小病毒(PPV)体外共感染对猪外周血单个核细胞(PBMC)细胞凋亡相关因子mRNA转录水平的影响,探讨PCV2和PPV共感染机制及宿主—病毒之间的作用关系,运用病毒滴度和相对荧光定量PCR技术,测定和分析PCV2和PPV感染PBMC后PCV2、PPV的病毒滴度含量及Bcl-2、FasL、p53、Caspase-8、PBR、TNF-α等的转录时相变化。结果表明:PCV2、PPV能够感染PBMC细胞,PCV2/PPV共感染中PCV2、PPV的含量分别在24h显著最高(P<0.001);PCV2、PPV单独感染和PCV2与PPV共感染PBMC后引起Bcl-2、FasL、p53、Caspase-8、PBR、TNF-αmRNA转录水平上升;在3h时PCV2/PPV共感染组PBR、P53mRNA转录水平显著高于PCV2、PPV单感染组(P<0.05),12h时PCV2/PPV共感染组FasLmRNA转录水平显著高于PCV2、PPV单感染组(P<0.05),24h时Bcl-2、Caspase-8mRNA转录水平显著高于PCV2、PPV单感染组(P<0.05),PCV2/PPV共感染组TNF-αmRNA转录水平显著高于PPV组(P<0.05),与PCV2组差异不显著。结论:PCV2与PPV共感染引起细胞凋亡相关因子mRNA转录水平上调,加速淋巴细胞凋亡,本试验为PCV2和PPV共感染机制研究提供了理论基础和试验依据。 相似文献
992.
993.
为探讨高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)感染早期在猪体内的增殖规律,利用荧光定量PCR技术,检测HP-PRRSV经肌肉注射、气管接种后,外周血的全血、血清、外周血单个核细胞(PBMC)的Ct值,并计算其拷贝数。结果表明肌肉注射和气管接种两种方式均能对香猪感染成功,但与气管接种相比,肌肉注射能在外周血中先检测到病毒。同一只猪的全血和血清中的病毒含量差异不明显,但PBMC中的病毒含量却相对要少;HP-PRRSV感染后2~6 h,肌肉注射和气管接种后的病毒增殖都较慢,但肌肉注射更易检测到病毒;感染2 d后,气管接种组的病毒增殖迅速,明显高于肌肉注射的增殖速度;感染后2~6 d,外周血中的病毒迅速增殖,之后逐渐降低。气管接种组的临床症状比肌肉注射组的严重。 相似文献
994.
995.
为了解CD44分子在雏鸡肠组织内的表达及其时空表达特性,设计1对引物,建立RT-PCR方法对CD44mRNA进行鉴定;以GAPDH基因为内参,建立检测鸡CD44基因表达水平的SYBR Green Ⅰ实对荧光定量(Q-PCR)方法,对1~28日龄商品鸡肠组织不同部位中CD44 mRNA表达水平进行检测.结果显示,从鸡肠组织中成功鉴定出CD44 mRNA,建立的荧光定量方法能特异性检测到CD44 mRNA,CD44和GAPDH基因的扩增效率分别为95%和101%,线性范围均在108~104拷贝/μL,敏感度高,最低检测限分别为45和77个拷贝.建立的CD44SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有特异、灵敏、快速、重复性好等优点.雏鸡不同日龄,不同肠组织中CD44表达水平有所差异,5~20日龄时的空肠组织和5~10日龄时的直肠组织中CD44表达量较高. 相似文献
996.
建立了一种基于荧光显色的禽呼肠孤病毒(ARV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法.该检测方法使用针对ARV的p10基因8个区域的6条LAMP引物,能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低能够检出102个拷贝的病毒,敏感性比普通PCR高100倍,而对其他病毒检测结果为阴性.在荧光显色中分别应用SYBR Green Ⅰ和钙黄绿素作为显色剂,其结果与琼脂糖凝胶电泳一致.在对80份临床样本的检测中,使用LAMP和PCR检测出阳性样本的数量分别为68份和55份.因此,基于荧光显色的LAMP方法可以应用于ARV的快速检测,具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力. 相似文献
997.
小鼠Dazl基因融合蛋白表达载体的构建及转染 总被引:1,自引:0,他引:1
根据NCBI数据库上公布的小鼠Dazl基因的mRNA序列设计引物,以小鼠睾丸组织RNA为模板,RT-PCR扩增小鼠Dazl基因编码区片段,并将其克隆到增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1中,构建重组融合蛋白表达载体pEGFP C1-Dazl,单双酶切和测序验证正确.将pEGFP-Cl-Dazl质粒转染293和NIH 3T3细胞,荧光显微镜下观察到融合表达的绿色荧光蛋白,且呈胞质表达;对照组转染pEGFP-C1,绿色荧光遍布整个细胞.Dazl蛋白的免疫荧光试验也证明重组载体转染后,Dazl基因和GFP共同定位于胞质部分.pEGFP C1-Dazl融合蛋白表达载体的成功构建为进一步研究生殖特异性基因Dazl在小鼠和大型动物的表达特性奠定了一定的基础. 相似文献
998.
根据乙型脑炎病毒(JEV)NS3基因保守序列设计并合成一对引物,以构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测JEV的SYBR Green I荧光定量PCR方法.该方法在1.92×108~1.92×101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中19拷贝/μL的病毒核酸,敏感性是常规RT-PCR方法的10倍;检测时间缩短了50%,该方法不与其它猪源病毒发生交叉反应;在重复性试验中,批间、批内变异系数均小于1.2%.应用本方法对JEV在BHK-21细胞上繁殖滴度进行定量检测,绘制JEV在BHK-21细胞上的一步生长曲线,并与TCID50方法绘制的复制动态曲线进行比较.结果显示,两种方法测定的JEV在BHK-21细胞上的复制动态具有一定的平行关系,对于制备灭活疫苗而言,荧光定量PCR方法更快速和敏感,所测得的抗原含量更精确,有利于企业机动灵活地安排生产. 相似文献
999.
为建立一种能鉴别鸡毒支原体(MG)强、弱毒株的快速检测方法,本研究根据GenBank中MG强毒株和弱毒株的基因组序列,选取特异性保守区序列设计了2对引物和2奈探针,分别用于强弱毒株和弱毒株的检测,优化反应条件,建立了能区分MG强、弱毒株的荧光定量PCR检测方法.该法特异性强,对鸡常见呼吸道病原体的反应均为阴性;灵敏度高,可检测到100拷贝/μL的模板;稳定性好,批内和批间试验Ct值的变异系数小.本研究建立的MG强、弱毒鉴别检测方法简便、快捷,为该病的防控与净化提供新方法、新思路. 相似文献
1000.
为快速检测规模化猪场猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV),本研究参考GenBank中登录的CSFV序列设计引物,利用实时荧光PCR技术,构建重组质粒作为阳性标准品,建立特异、敏感、重复性好的CSFV快速定量检测方法.同时建立标准曲线,用于对猪瘟病毒的定量分析.本方法对规模化猪场的100份抗凝血和50份公猪精液样品进行检测,常规PCR检出27份占18%,荧光定量PCR检出123份占82%.表明荧光定量RT-PCR方法在检测猪瘟样品中具有潜在的应用价值,同时可检测猪群中猪瘟病毒持续性感染的状态存在. 相似文献